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1、-覆盆子鉴别与含量测定 法学确认案文件审批部 门姓 名签 名日 期起 草 人质量部* 年 月 日审 核 人质量部* 年 月 日批 准 人质量部* 年 月 日1、目的本试验对覆盆子鉴别与含量测定检验法进展确认，为了确保检验数据的科学性、准确性和可靠性，制定本确认案，以确定建立的鉴别与含量测定检验法能够对该产品进展准确的检验，为我司化验室以后的覆盆子检验法提供依据。2、围本案适用于我公司覆盆子鉴别与含量测定检验法确实认。3、职责职务岗位*职责组长质量部部长*1.确认案及报告的审核；确保案及报告容符合GMP及检测要求。2.组织实施确认工作，确保确认工作格按照案实施；3.确认过程中偏差和变更的审核，组
2、织确认过程中发生的偏差的调查；小组成员QC主任*负责确认案及确认报告的起草，确认实施记录的审核QC*按照确认案进展确认工作，填写记录，并判定是否符合认可标准要求4、确认依据文件?中国药典?2015年版5、确认程序5.1先决条件确实认5.1.1仪器经过校准确认所需仪器经过校准并在有效期，确认记录见附表01。5.1.2.人员培训确认确认小组人员参加了本案的培训，以及仪器的操作、维护和保养培训、偏差处理、变更控制等SOP的培训，确认记录见附表02。相关SOP确实认制定仪器操作、校验、维护和保养标准程序并批准，确认记录见附表03。5.1.4药品确实认确认案确认过程中使用的药品符合规定，并在有效期。确认
3、记录见附表04。5.2鉴别法学确认专属性：供试品溶液制备 取山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定项下供试品溶液，即得。对照品溶液制备 取椴树苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。阴性溶液制备 照供试品溶液制备法除取样品外，同法制成阴性溶液。测定 照?薄层色谱法标准操作规程?试验，吸取上述供试品溶液与阴性溶液各5l，及对照品溶液2l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸90440.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在105加热5分钟，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的荧光斑点；阴性液在相应位置上不显斑点见
4、薄层色谱图05-1。确认记录见附表05。5.3含量测定法学确认5.3.1鞣花酸含量测定5.3.1.1检查法： 照?高效液相色谱法标准操作规程?测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液1585为流动相；检测波长为254nm。理论板数按鞣花酸峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备 取鞣花酸对照品适量，精细称定，加70%甲醇制成每1ml含5g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末过四号筛约0.5g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精细量取续滤
5、液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精细吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按枯燥品计算，含鞣花酸C14H6O8不得少于0.20%。5.3.1.2系统适用性确认5.3.1.2.1色谱条件 高效液相色谱仪*色谱柱Aglilent TC-C18(2) 250*4.6mm 5um流速1.0ml/min检测波长254nm，UV检测器柱温25进样量10l运行时间30min5.3.1.2.2溶液配制 名称配制法流动相分别量取乙腈色谱纯与超纯水，以乙腈-0.2%磷酸溶液1585的比例混合，用0.45m水系微滤膜滤过，超声脱
6、气10 min，即得。必要时可根据实际使用情况调整配制溶液的体积。空白溶剂样品处理用70%甲醇溶液。对照品溶液取鞣花酸对照品适量，精细称定，加70%甲醇制成每1ml含5g的溶液，即得。平行制备2份，分别为对照品溶液1、2。供试品溶液取本品粉末过四号筛约0.5g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精细量取续滤液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行制备2份，分别为供试品溶液1、2。5.3.1.2.3试验操作待仪器稳定后，按以下进样序列注入高效液相色谱仪
7、，记录色谱图，以鞣花酸峰面积计算5针对照品溶液1的RSD；按外标法以对照品溶液1的鞣花酸峰面积计算对照品溶液2的回收率。序号样品名称进样体积ul进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液2525.3.1.2.4系统适用性回收率 按以下公式计算对照品溶液2的回收率：式中： AR1、AR21、AR22：分别为对照品溶液1连续5针的平均峰面积和对照品溶液2第一针和第二针的峰面积；MR1、MR2：分别为对照品1、2的称样量；CR1和CR2：分别为对照品1、2中鞣花酸的含量；RcR21和RcR22：分别为对照品溶液2第1针和第2针的回收率；5.3.1.2.5可承受标准5针对照品溶液1鞣花酸主峰
8、的保存时间的RSD均不大于2.0%，鞣花酸主峰面积的RSD均应不大于1.0%；对照品溶液2的回收率应在98.0%102.0%。理论板数按鞣花酸峰计算应不低于3000。注：假设系统适用性不符合标准应立即停顿进样，排查原因后再重做系统适用性，系统适用性合格后可进展如下试验。确认记录见附表06。5.3.1.3含量测定5.3.1.3.1操作系统适用性合格后，接着系统适用性进样序列取供试品溶液1、2，用0.45um尼龙66一次性针式过滤头弃去5ml后取续滤液，进样，进样序列如下序号4、5、6：序号样品名称进样体积ul进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液2524供试品溶液1525供试品溶液
9、2526对照品溶液152注：在对照品溶液1运行完成后一般间隔10针以时间最短的计后，应重新插入2针对照品溶液1，作为系统跟踪，以此来评价系统稳定性。5.3.1.3.2计算综合前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算鞣花酸峰面积的RSD，当RSD不大于2.0%时，按以下公式计算覆盆子的含量：注：综合供试品溶液的前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算鞣花酸峰面积的RSD不符合规定时，应排查原因后，再按5.3.1.2项重新测定。5.3.1.3.3可承受标准：按枯燥品计算，含鞣花酸C14H6O8不得少于0.20%。确认记录见附表06。5.3.2山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定5.3.2.
10、1检查法：照?高效液相色谱法标准操作规程?测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.2%磷酸溶液1585为流动相；检测波长为344nm。理论板数按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备 取山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精细称定，加70%甲醇分别制成每1ml含80g的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粉末过四号筛约1g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精细量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用油醚振摇提取3
11、次，每次20ml，弃去油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精细吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按枯燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷C27H30O15不得少于0.03%。5.3.2.2系统适用性确认5.3.2.2.1色谱条件高效液相色谱仪*色谱柱Aglilent TC-C18(2)250*4.6mm 5um流速1.0ml/min检测波长344nm，UV检测器柱温25进样量10l运行时间35min5.3.2.2.2溶液配制名称配
12、制法流动相分别量取乙腈色谱纯与超纯水，以乙腈-0.2%磷酸溶液1585的比例混合，用0.45m水系微滤膜滤过，超声脱气10 min，即得。必要时可根据实际使用情况调整配制溶液的体积。空白溶剂样品处理用70%甲醇溶液。对照品溶液取山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品适量，精细称定，加70%甲醇分别制成每1ml含80g的溶液，即得。平行制备2份，分别为对照品溶液1、2。供试品溶液取本品粉末过四号筛约1g，精细称定，置具塞锥形瓶中，精细参加70%甲醇50ml，称定重量，加热回流提取1小时，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精细量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用油醚
13、振摇提取3次，每次20ml，弃去油醚液，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。平行制备2份，分别为供试品溶液1、2。5.3.2.2.3试验操作待仪器稳定后，按以下进样序列注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积计算5针对照品溶液1的RSD；按外标法以对照品溶液1的山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积计算对照品溶液2的回收率。序号样品名称进样体积ul进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液2525.3.2.2.4系统适用性回收率按以下公式计算对照品溶液2的回
14、收率：式中：AR1、AR21、AR22：分别为对照品溶液1连续5针的平均峰面积和对照品溶液2第一针和第二针的峰面积；MR1、MR2：分别为对照品1、2的称样量；CR1和CR2：分别为对照品1、2柰酸-3-O-芸香糖苷的含量；RcR21和RcR22：分别为对照品溶液2第1针和第2针的回收率；5.3.2.2.5可承受标准5针对照品溶液1山柰酸-3-O-芸香糖苷主峰的保存时间的RSD均不大于2.0%，山柰酸-3-O-芸香糖苷主峰面积的RSD均应不大于1.0%；对照品溶液2的回收率应在98.0%102.0%。理论板数按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000。注：假设系统适用性不符合标准应立即停
15、顿进样，排查原因后再重做系统适用性，系统适用性合格后可进展如下试验。确认记录见附表07。5.3.2.3含量测定5.3.2.3.1操作系统适用性合格后，接着系统适用性进样序列取供试品溶液1、2，用0.45um尼龙66一次性针式过滤头弃去5ml后取续滤液，进样，进样序列如下序号4、5、6：序号样品名称进样体积ul进样针数1空白溶剂512对照品溶液1553对照品溶液2524供试品溶液1525供试品溶液2526对照品溶液152注：在对照品溶液1运行完成后一般间隔10针以时间最短的计后，应重新插入2针对照品溶液1，作为系统跟踪，以此来评价系统稳定性。5.3.2.3.2计算综合前面5针对照品溶液1和后面2
16、针对照品溶液1计算山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积的RSD，当RSD不大于2.0%时，按以下公式计算覆盆子的含量：注：综合供试品溶液的前面5针对照品溶液1和后面2针对照品溶液1计算山柰酸-3-O-芸香糖苷峰面积的RSD不符合规定时，应排查原因后，再按5.3.2.2项重新测定。5.3.2.3.3可承受标准：按枯燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷C27H30O15不得少于0.03%。确认记录见附表07。6、偏差处理在确认过程中，应格按照确认案进展操作和判定，出现个别指标不符合标准的结果时，针对不合格指标应展开调查分析，对于确认是因操作不当等自身原因造成，应重新进展测试。确认过程中所产生的偏差记录在
17、附表08中。7、变更控制涉及到案变更时，填写“变更申请表，需要对其进展原因分析，根据分析结果断定是否需要重新制定确认案还是修改可承受标准，并将涉及到的变更情况记录在附表09中。8、附表清单编号附表名称编号附表名称01仪器校验确认记录表06鞣花酸含量测定法确认记录表02人员培训确认记录表07山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定法确认记录表03相关SOP确认记录表08偏差处理确认记录04药品确认记录09变更控制确认记录05鉴别法确认记录表9、变更记录版本号批准日期变更描述00/新文件。附表01：仪器校验确认记录表仪器校验确认仪器名称型号检定有效期至检定证书编号符合要求电子天平*是 否*是 否高效液相色
18、谱仪*是 否玻璃仪器校验确认玻璃仪器名称规程编号校正日期符合要求容量瓶10ml是 否25ml是 否50ml是 否100ml是 否移液管是 否是 否10ml是 否50ml是 否 是否存在偏差或不一致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差。否结论：所有仪器均经校验且在有效期。检查人/日期复核人/日期附表02：人员培训确认记录表培训记录覆盆子鉴别与含量测定法学确认案*电子天平标准操作与维护规程*型高效液相色谱仪标准操作与维护规程偏差处理标准管理规程变更控制标准管理规程培训时间培训地点课时讲师*是否已承受培训是用“表示，否用“表示 是否存在偏差或不一致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差。否
19、结论：执行本案的人员已得到必要的培训。检查人/日期复核人/日期附表03：相关SOP确认记录表SOP名称检查标准检查结果*电子天平标准操作与维护规程已批准生效是 否*型高效液相色谱仪标准操作与维护规程已批准生效是 否偏差处理标准管理规程已批准生效是 否变更控制标准管理规程已批准生效是 否 是否存在偏差或不一致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差。否结论：相关SOP均已批准生效。检查人/日期复核人/日期附表04:药品确认记录名称批号来源符合要求覆盆子留样室是 否椴树苷对照品中国食品药品检定研究院是 否鞣花酸对照品中国食品药品检定研究院是 否山柰酸-3-O-芸香糖苷对照品中国食品药品检定研究院
20、是 否是否存在偏差或不一致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差。否结论：样品、对照品符合要求。检查人/日期复核人/日期附表05:鉴别法确认记录人员工程薄层板点样式温度湿度图谱判定标准结果符合要求专属性市售手动见05-1供试品与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的斑点；阴性液不显斑点。是否是否存在偏差或不一致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差。否结论：椴树苷鉴别分析法已确认符合规定。检查人/日期复核人/日期附表06:鞣花酸含量测定法确认记录色谱柱柱 温检测器波 长流动相进样量系统适用性确认工程理论板数对照品1对照品2供试品1供试品2鞣花酸可承受标准按鞣花酸峰计算应不低于3000是否
21、符合规定是 否是 否工程别离度对照品1对照品2供试品1供试品2鞣花酸可承受标准与相邻色谱峰之间的别离度应大于1.5是否符合规定是 否是 否工程重复性对照品1 RSD值对照品2回收率鞣花酸可承受标准5针峰面积的相对标准偏差RSD值应不大于2.0%；对照品溶液2的回收率应在98.0%102.0%是否符合规定是 否是 否工程保存时间空白溶剂对照品溶液供试品溶液鞣花酸可承受标准空白溶剂在相应保存时间处没有峰；供试品与对照品在相应保存时间处出现峰。是否符合规定是 否是 否含量测定确认工程平均峰面积对照品1对照品2供试品1供试品2鞣花酸含量测定结果供试品1供试品2平均值可承受标准：按枯燥品计算，含鞣花酸C
22、14H6O8不得少于0.20%。是否符合规定是 否 是否存在偏差或不一致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差。否结论：覆盆子的鞣花酸含量测定分析法已确认符合规定。检查人/日期复核人/日期附表07：山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定法确认记录色谱柱柱 温检测器波 长流动相进样量系统适用性确认工程理论板数对照品1对照品2供试品1供试品2山柰酸-3-O-芸香糖苷可承受标准按山柰酸-3-O-芸香糖苷峰计算应不低于3000是否符合规定是 否是 否工程别离度对照品1对照品2供试品1供试品2山柰酸-3-O-芸香糖苷可承受标准与相邻色谱峰之间的别离度应大于1.5是否符合规定是 否是 否工程重复性对照品1
23、RSD值对照品2回收率山柰酸-3-O-芸香糖苷可承受标准5针峰面积的相对标准偏差RSD值应不大于2.0%；对照品溶液2的回收率应在98.0%102.0%是否符合规定是 否是 否工程保存时间空白溶剂对照品溶液供试品溶液山柰酸-3-O-芸香糖苷可承受标准空白溶剂在相应保存时间处没有峰；供试品与对照品在相应保存时间处出现峰。是否符合规定是 否是 否含量测定确认工程平均峰面积对照品1对照品2供试品1供试品2山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定结果供试品1供试品2平均值可承受标准：按枯燥品计算，含山柰酸-3-O-芸香糖苷C27H30O15不得少于0.03%。是否符合规定是 否 是否存在偏差或不一致项：是 偏差或不一致记录在偏差报告中，偏差。否结论：覆盆子的山柰酸-3-O-芸香糖苷含量测定分析法已确认符合规定。检查人/日期复核人/日期附表08：偏差处理确认记录偏差处理单号发生日期记录标题偏差解决日期处理结果符合要求是 否是 否是 否是 否检查人/日期复核人/日期附表09：变更控制确认记录变更号日期变更描述批准日期处理结果符合要求是 否是 否是 否是 否是 否是 否是 否检查人/日期复核人/日期. z.
