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1、自动定氮器操作规程一、工作原理：KDN蛋白质测定仪是由电加热消化装置和蒸播装置二大部分组成。消化装置采用电加热井式炉结构，温度由数显自动恒温控制表控制，温度均匀，消化彻底；蒸储装置采用了电热蒸汽发生器，使自来水产生蒸汽完成蒸储工作，利用水位平衡器使蒸汽发生器内水位保持稳定，从而不间断地产生蒸汽。样品中含氮有机物经浓缩硫酸加热消化，然后有机物炭化成碳，碳将硫酸还原为S02，本身则变为C2,S02使N还原为NH3,本身则氧化S2O3,而消化过程中生成的H2,又加快了NH3的形成，在反应过程中生成的H2O和S2O3溢出，而NE则与H2SO4在溶液中结合成(NH4)2SO4,加入NaoH并蒸储，使NE
2、溢出，用H3BO3吸收后，用已知摩尔浓度的盐酸滴定，测出样品全氮含量，乘以氮与蛋白质的换算系数,即为粗蛋白质的含量。消化过程主要反应如下：RCHNH2COOH+H2SO4-CO2+SO2NH3+H2O2NH3+H2SO4-(MH4)2SO4在蒸储和吸收过程中主要反应如下：(NH4)SO42NaOH-Na2SO4+2NH4OH2NH4OH2NH3+2H2ONH3+4H3BO3-NH4HB4O7+5H2O滴定的过程是盐酸和硼酸氢钱的反应过程。NH4HB4O7+HC1+5H2ONH4C1+4H3BO3二、操作方法：1、样品制备：1.1.选取具有代表性的样品200克，清杂后按四分法缩减取样，粉碎样品至
3、40目通过，盛于密闭容器待用。1.2液体试样必须具有代表性，取样后先放在消化管内浓缩至体积三分之一，再加入其它试剂进行消化。2、消化：2.1 称取经粉碎且通过40目的试样OS1.g（视含氮量而定），精确到0.0002,干净无损地移入已洗净且烘干的消化管中，加催化剂（硒片或硒+无水硫酸钠1:1000）一片和1Om1.硫酸。2.2 将消化管分别放入消化架各个孔内，然后置于消化炉上。2.3 连接抽气三通，打开进水阀。2.4 接通电源开关，在加热出事阶段须注意观察，防止试样因急速沸腾而飞溅，温度设定应略低于正常值，如设定在400度。2.5 温度设置：08孔消化炉的八个电炉由八只开关（A1-A4,B1-
4、B4）及二只温控表上的CH1-CH4分别控制。设置一组电炉的温度可按相对应的温控仪的CH1.-CH4三秒，进入通道菜单项出现SP参数，按上下键调节温度，然后按SET键七次，使仪表的四条显示窗同时显示温度值，至此，该组电炉的温度参数设定完成。其余一次类推。（设定温度低于室温,电炉不加热。）2.6 保持消化管中液体连续沸腾，沸酸在瓶颈部下冷凝回流,待溶液消煮至无微小碳粒，呈兰绿色时继续消煮30-40m1no2.7消化结束将消化架连同消化管、排气管一起移到冷却架（白色），冷却至室温，注意在冷却过程中排气管必须保持吸气状态（切忌将消化管放入水中冷却）。防止废气溢出。3、蒸储：3.1 KDN-CZ型自动
5、定氮蒸储器蒸储时，碱液及蒸储水采用电磁泵加液置入方法，因而避免了漏液现象，NaOH比0的注入接口橡胶管套入后，分别置于各自的容器中，冷却水接口与自来水龙头用橡胶管连接，排、出水管分别用橡胶管接上并一起放入水池中，关上排水阀门。加液时按面板上相应的开关，液体经电磁泵自动流入消化管内，注入的毫升数视标尺所示位置或溶液变色程度而定。3.2 打开自来水龙头，按下电源开关，按下加热开关，再按下蒸汽开关，蒸汽发生炉内的水由冷却水接口通过冷凝管，经水位平衡器慢慢流入，由于蒸汽发生炉内水位不断上升，使电极之间电流逐渐增加，水经过电极加热，温度不断上升,但由于初态时水温较低，此时水位上升较快，蒸汽尚未能产生，电
6、流急剧增加，待电流表上电流上升到12安培左右，电磁阀由电气部分自控通断，反复数次，待蒸汽正常连续喷出，电流指示在4-7A时，关闭蒸汽开关，蒸储工作即可进行。3.3 在250m1.三角接收瓶中加入50m1.1.2%H3B3和2-3滴混合指示剂，将该瓶放在接收瓶托架上，按定时开关，用手向上唾弃接收瓶托架，使它被电磁铁吸合并固定在接收位置。使接收导出管管口浸没在接收液中,时间设定在7分钟左右。3.4向下按动托架手柄，把消化管固定在消化管托架上，然后按面板上注水、注碱开关，分别向消化管内注入蒸储水和氢氧化钠溶液，然后开启蒸汽开关，向消化管内注入蒸汽进行蒸储，当接收瓶托架到了设定的时间（接收液到150m
7、1.）,自动回落到原位，同时蜂鸣器响，关闭时控按钮。使接收导出管脱离液面，用蒸储水冲洗接收导出管，继续蒸储半分钟,关闭蒸汽开关，取下消化管，然后取下接收瓶，待滴定用。3.5空白测定：用0.1克糖代替样品或不加样品做空白测定。3.5每天做完样品后，请及时排空蒸汽发生炉内的水。确认蒸汽发生炉中的水已排空，拔掉电源插头。4、滴定、计算结果：用标定的盐酸溶液滴定接收瓶内溶液，滴定溶液由绿色变为淡紫色时止，记下消耗的He1.的毫升数，按下列式计算蛋白质量：(%-Vj)C0.01406.251粗蛋白质()=式中：V2滴定试样时所需标准酸溶液体积，m1.;V1滴定空白时所需标准酸溶液体积；m1.；C一一盐酸
8、标准溶液浓度，mo1./1.；m试样质量，g；V 试样分解液总体积，m1.；V 试样分解液蒸储用体积，m1.；0.0140每毫克当量氨的克数；6.25氨换算成蛋白质的平均系数。三、注意事项：1、当消化炉窗口显示“HH或1.1.”时，请检查传感器接线是否正确。2、消化结束后切忌将消化管放入水中冷却。3、每次工作完毕必须清洗试管及仪器，经常保持清洁、干燥及完整。4、每次试样蒸播结束，必须迅速取下消化管，预防消化管液体被倒吸至蒸汽发生炉中，腐蚀机件或电极。5、NaoH溶液在消化管内容易产生粘团现象，因此每天工作完毕必须认真清洗有关部位，NaOH外接管要移入蒸储水瓶内抽清几次，待下一次蒸播时，须先排出100m1.NaOH,以防稀释NaOH,影响测定结果。用干爽洁布擦净仪器。
