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1、交叉配血试验（凝聚胺法）标准操作程序【项目名称】交叉配血试验【实验用途】辅助用于交叉配血【实验原理】红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引。此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用Q凝聚胺技术首先利用低离子介质溶液，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。其后，加入凝聚胺试剂，它是一种高价阳离子多聚物，是肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产
2、生非特异性的聚集。最后，加入重悬液，重悬液具有中和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性聚集散开，试验结果为阴性。【标本种类】被检验者的血液，ABO正反血型Rh（D）血型抽3毫升不抗凝静脉血，交叉配血及不规则抗体抽5毫升不抗凝静脉全血。血清标本：取静脉血沿管壁慢慢注入干燥试管内，待血液凝固后离心分离血清。红细胞悬液的配制：用于一般实验，以血型鉴定，配血等的红细胞至少要用大量生理盐水洗一遍，通过洗涤可以去除红细胞表面的下述物质：1、少量血浆蛋白，如纤维蛋白原、抗球蛋白抗体，会干扰特异凝集和中和加入的抗体；2、已溶解红细胞的基质，有竞争抗体的作用；3、可容性的抑制物，如A、B、Chido、IeWiS
3、等物质；4、抗凝剂，有抗非体作用，如第1次洗后有溶血现象，则要洗第2次，如第2次洗后上清液仍不完全清澈，这种红细胞不亦使用，应弃去Q红细胞悬液常用浓度有2%、5%和10%,配制时应将最后一次洗涤的红细胞水平离心机3000转/分离心，30分钟压积，在不除去上层盐水的情况下，吸取一定量的压积红细胞按体积百分比配成所需浓度的悬液。实际工作中，可用一般洗涤压积的红细胞1滴加8滴生理盐水，配成的悬液约为10%,按此比例配成其他所需浓度的悬液2%的悬液一般用于滴定抗体效价，5%的悬液常用于血型鉴定或间接抗球蛋白试验，10%的悬液则用于测定抗体的亲合力。【仪器和材料】仪器：无特殊专用仪器材料：凝聚胺试剂盒试
4、剂稳定性：原装试剂在28。C避光保存，有效期24个月试剂规格与组成分：400人份、150人份、75人份三种规格，具体组成见下表：组份4000人份150人份75人份低离子介质溶液120mlX2瓶45ml2瓶45ml1瓶重悬液20mlX2瓶15mlX1瓶7.5mlX1瓶凝聚胺20mlX2瓶15mlXl瓶7.5ml1瓶阳性对照4mlX1瓶1.5mlX1瓶0.75mlX1瓶阴性对照4mlX1瓶1.5mlXl瓶0.75ml1瓶注：（1）低离子介质溶液：由乙二胺四醋酸二钠和葡萄糖等配制而成。（2）凝聚胺：由凝聚胺和氯化钠等配制而成。（3）重悬液：由枸椽酸三钠和葡萄糖等配制而成。（4）阳性对照：由氯化钠、磷
5、酸盐和不完全抗体抗D等制备而成。（5）阻性对照：由氯化钠和磷酸盐等制备而成，不含任何人红细胞血型抗体。试剂稳定性：原装试剂在28。C避光保存，有效期24个月【操作步骤】、取试管两支，标主次侧，主侧管加病入血清（血浆）IOOul（2滴），加供血者3-5%的红细胞悬液50Ul（1滴），次侧管反之。、各加低离子介质溶液0.6ml,混合均匀后，静置1分钟，再各加凝聚胺溶液IOOUI（2滴），混合均匀，静置15秒。、3400转（900g）,离心15秒，然后把上清液倒掉。、轻摇试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集则必须重作。、最后加入重悬液100Ul（2滴），轻轻转动试管混合并同时观察结果，结果判定：如果凝集在60秒内凝集散开，代表是由凝聚胺溶液引起的非特异性凝集，配血结果相合。如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性凝集，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步用显微镜观察。【注意事项】、若病人血浆含肝素多，则应加入双倍量的凝聚液中和肝素，随后再加入重悬液的量可能也要增加。、本试剂盒操作方法也适用于抗体鉴定。、试剂使用前请恢复室温再做。、加做辅助性抗人球蛋白试验目的是增加检测抗-K的敏感性。、在冬天气温较低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑,应将标本和试剂分别在37。C混合，随后判读结果。
