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1、输血科ABO疑难血型鉴定标准操作规程1 .目的为规范ABO疑难血型鉴定操作，保证临床输血安全有效，依据输血实验室管理程序4.1.7（1）条款的要求制定本规程。2 .适用范围适用于医疗机构输血科对ABO血型鉴定正反定型不相符，常规方法不能确定ABO血型的进一步确认试验。3 .职责医疗机构输血科技术人员负责ABO疑难血型鉴定。4 .原理ABo血型鉴定正反定型不相符时，通过采用单克隆抗-A、抗-B、抗-Ai、抗-AB、抗-H试剂与受检者红细胞反应监测ABH抗原，A、B、。型试剂红细胞及自身红细胞与受检者血清（血浆）反应监测血型抗体，红细胞洗后放散试验监测弱A、弱B抗原，凝集抑制试验监测唾液ABH血型
2、物质，血清（血浆）吸收试验排除ABO血型以外的抗体对鉴定的影响，从而获得确定受检者ABO血型的依据，确定ABo血型。5 .检测环境条件室温应控制在18-27C,湿度应保持30%70%。6 .步骤与方法6.1 收集受检者临床资料当执行试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程鉴定ABO血型出现正反定型不相符，并已排除试剂及操作因素时，应调查受检者的疾病史、输血史、药物治疗情况、组织或器官移植史、孕产史及以前的血型记录，分析可能影响ABO血型鉴定的临床资料。6.2 根据受检者正反定型的反应结果及临床资料，初步分析引起正反定型不符的可能原因。6.2.1 当正定型红细胞与抗-A和（或）抗-B物凝集，而反
3、定型未检出预期的凝集反应时，应首先确实是否因红细胞表达弱A和（或）弱B,与抗-A和（或）抗-B不凝集。经吸收放散等试验确认红细胞不表达A和（或）B抗原后，可考虑是否为低免疫球蛋白血症、免疫抑制等致血型抗体异常。6.2.2当反定型检出了与正定型不相符的凝集时（如反定型与0型试剂红细胞凝集）应考虑血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体。6.2.3出生3个月内的婴儿ABO血型鉴定只做正定型，不做反定型，具体执行试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程。6.3 受检者血标本的采集及处理采集受检者静脉血5ml,EDTA干粉抗凝，离心分离血浆及压积红细胞，将压积红细胞用生理盐水洗涤23次后，取压积红细胞3
4、0PI加生理盐水ImI配成约为3%的红细胞盐水悬液。6.4 排除冷自身抗体对血型鉴定的影响ABO血型鉴定正反定型不一致,反定型与A、B、。型试剂红细胞均发生凝集时，应做自身对照，如自身对照出现凝集，且置于4冰箱5min后凝集反应明显增强，放置于37电热恒温水浴箱3min凝集反应消失。考虑是受检者冷自身抗体引起ABO血型鉴定正反定型不符，应用37C生理盐水洗涤受检者红细胞3次后做正定型；执行吸收试验标准操作规程7.2：冷自身抗体吸收试验，用受检者吸收后血浆做正定型。6.5 排除IgM同种抗体多ABO血型鉴定正反定型不一致，反定型受检者血清（血浆）与A、B、。型试剂红细胞均凝集，自身对照不凝集，置
5、4C冰箱5min后反定型凝集反应明显增强，自身对照仍不凝集，放置于37C电热恒温水浴箱3min凝集不消失。考虑是受检者IgM型同种抗体引起ABO血型鉴定正反定型不符，应执行以下步骤：6.5.1 受检血标本红细胞不规则抗体筛选、鉴定，执行红细胞不规则抗体筛选及鉴定标准操作规程。6.6 其他引起ABo血型鉴定正反定型不一致是可能原因有类B、假凝集、全凝集、多凝集、溶血、不能确定特异性的红细胞不规则抗体等，限于本实验室的条件不能确定受检者ABo血型是，可以送有条件的实验室进一步鉴定，具体执行血标本管理程序中对外送检血标本相关要求。7.注意事项7.1 出生3个月内的婴儿因自身ABO血型抗体尚未完全产生
6、，而来自其母体的血型抗体又可影响其血型鉴定，故ABo血型鉴定时只做正定型。7.2 除出生3个月内的婴儿外，ABo血型鉴定必须正反定型结果一致才可确定。7.3 ABO血型鉴定出现正反定型不符时，应首先确认试剂质量合格，技术操作无误后方可执行本操作规程，常见的试剂及技术原因如下：7.3.1 血型抗体试剂效价太低，亲和力不强。7.3.2 血型抗体试剂被污染。7.3.3 受检或试剂红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当，易误判为阴性结果。7.3.4 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。7.4 受检者血清蛋白紊乱（如高球蛋白血症）常引起红细胞成缗线状
7、排列，应注意与抗原-抗体特异性凝集相鉴别。7.5 已经吸附有冷自身抗体的红细胞如果经37C生理盐水不能洗涤干净时，可以换用45生理盐水反复洗涤，仍不能洗涤干净时，可以在56C水浴震荡箱内热放散解离冷自身抗体。7.6 ABO亚型、疾病引起的ABO血型抗原减弱及类孟买血型等都表现为A、B抗原弱表达，分泌型者都可从唾液中检出血型物质，但类孟买血型红细胞H抗原表现为缺失或弱表达，而ABO亚型、疾病引起的ABo抗原减弱者红细胞H抗原较强。7.7 ABo亚型与疾病引起的AB。血型抗原减弱者常表现为相似的血型血清学特征，难以鉴别，对白血病或肿瘤患者如出现A、B抗原弱表达，应待疾病缓解后复检ABO血型，如弱表达的A、B抗原恢复正常，可与ABO亚型相鉴别。必要时进行PCR-SSP分型或基因测序分型。
