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1、实验二 水中总大肠菌群的测定发酵法,实验二 水中总大肠菌群的测定发酵法,1.掌握发酵法测定大肠菌群数的基本原 理及意义,实验目的和要求,原理：根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。,1.掌握发酵法测定大肠菌群数的基本原实验目的和要求 原理：根,意义：常用于推断样品是否被人、畜粪便污染以及污染程度和存在肠道致病菌的可能性。,意义：常用于推断样品是否被人、畜粪便污染以及污染程度和存在肠,2. 掌握发酵法测定水中总大肠菌群的 试
2、验的具体操作过程及方法,初发酵,复发酵,平板分离,2. 掌握发酵法测定水中总大肠菌群的初发酵 复发酵 平板分离,实验步骤,实验步骤,1. 乳糖蛋白冻培养基制备：第1组,3倍的：250 ml，,1倍的：取150 ml 3倍的稀释成1倍的,调PH,1倍的,一、培养基的制备及灭菌,不需加热,1. 乳糖蛋白冻培养基制备：第1组3倍的：250 ml，1倍,2.乳糖蛋白冻培养基分装 (12个组),杜氏小管,杜氏小管,杜氏小管,杜氏小管,5 ml 3倍,10 ml 1倍,10 ml 1倍,10 ml 1倍,2.乳糖蛋白冻培养基分装 (12个组)杜氏小管杜氏小管杜氏小,3. 配置伊红美蓝琼脂培养基1300 m
3、l， 每组分100 ml，第1组,灭菌完，55oC时加伊红、美蓝,乳糖也要加,倒平板,4-5个,100 ml,2 ml 伊红,1 ml 美蓝,3. 配置伊红美蓝琼脂培养基1300 ml，灭菌完，55o,3. 准备其他要灭菌的:,4. 灭菌:115 OC，20 min,水源水,90 ml无菌水,9 ml无菌水,3. 准备其他要灭菌的:4. 灭菌:115 OC，20 mi,二、水样的采集和制备,1. 采样瓶,2. 采集湖水水面下10 cm的水样,3. 将湖水自来水1：1混匀， 作为实验的原液,200 ml原液,二、水样的采集和制备1. 采样瓶2. 采集湖水水面下10 c,三、水样的稀释,1 ml,
4、水源水,200 ml原液,10 ml,90 ml无菌水,9 ml无菌水,原液,10-1,10-2,三、水样的稀释1 ml水源水200 ml10 ml90 ml,四、大肠菌群的测定,原液,10-1,10-2,10 ml,杜氏小管,杜氏小管,杜氏小管,杜氏小管,5 ml 3倍,10 ml 1倍,10 ml 1倍,10 ml 1倍,1 ml,1 ml,1 ml,3724h,四、大肠菌群的测定原液10-110-210 杜氏小管杜氏小管,五、观察大肠菌群的初发酵结果,1.培养基变为黄色，杜氏管中有气泡,2.培养基仍为紫色，杜氏管中没有气泡气泡,五、观察大肠菌群的初发酵结果1.培养基变为黄色，杜氏管中有气
5、,杜氏小管,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,37，24h,六、大肠菌群的平板分离,杜氏小管第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭,平板划线,杜氏小管,平板划线杜氏小管,七、革兰氏染色,涂片干燥 固定染色 ：结晶紫，1min, 水洗 媒染：典液，1min, 水洗脱色：95%乙醇，30 s，水洗复染：沙黄复染液，1 min。或石碳酸复红，10 s水洗、待干、镜检: 紫色或红色染色标本的保存与封片,七、革兰氏染色涂片,八、复发酵,八、复发酵,九、大肠菌群测定的结果分析与报告,九、大肠菌群测定的结果分析与报告,实验报告,1. 实验目的2.实验原理3. 实验步骤4. 实验结果5. 讨论,实验报告1. 实验目的,
