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1、检测器,Waters LC School 培训教材,检测器Waters LC School 培训教材,对检测器的要求,高灵敏度可重现的设置合适的带宽快速或可变的时间常数宽的线性响应容易使用及保养自我诊断功能,对检测器的要求高灵敏度,检测器的种类,检测器的种类,衡量检测器的指标,灵敏度 S = R / QR是检测器响应值的增量Q是样品量的增量噪音 没有样品时检测器的最大输出信号漂移 检测器在一段时间内响应值的变化线性动态范围最大线性相应与最小检出限之比最小检测限样品产生两或三倍于噪音信号时的浓度信噪比S/N注意最小检测限不是一个单纯的检测器指标。它实际上是评价整个色谱系统的指标，包括了色谱系统、
2、分离机理、色谱柱在内的综合性指标，信噪比亦如此,衡量检测器的指标灵敏度 S = R / Q,紫外-可见光检测器,基于样品池(S)中的样品对光产生吸收，有信号差如是可变波长检测器，还有分光系统(光珊),紫外-可见光检测器基于样品池(S)中的样品对光产生吸收，有信,Beers Law - BEER定律,光能量 P0 = 透过溶剂的光能量 P = 透过样品的光能量光通量(透过率%)T=P/P0吸光度 A = -log(T)= log(P0/P)吸光度 = 单位吸光度 流动池长度 溶液浓度即 A = abc,Beers Law - BEER定律光能量,同紫外检测器灵敏度有关的因素,信号强度(S)从BE
3、ER定律可看出样品的种类样品浓度及进样的体积检测池的长度所使用的波长，检测器的时间常数噪音(N)流动相所使用的波长，灯的能量检测器的时间常数非检测器因素 - 电噪音，泵脉动等,同紫外检测器灵敏度有关的因素信号强度(S),紫外检测器的溶剂影响,不同种类溶剂有其截止波长溶剂的质量好坏对其截止波长有影响为何溶剂质量不好?含紫外吸收的杂质溶解在其中的氧气缓冲液溶质的紫外吸收,紫外检测器的溶剂影响不同种类溶剂有其截止波长,背景吸收的影响,背景吸收减少线性范围许多溶剂产生背景吸收,背景吸收的影响背景吸收减少线性范围,示差折光效应,示差折光效应的危害产生假的紫外吸收变化定量误差，光谱图不准确梯度时严重的基线
4、漂移梯形池设计（曾用于440/441，490及486检测器）最初的专利设计,示差折光效应示差折光效应的危害,Waters 2487 检测器,用于2487的消除示差折光效应的设计专利的梯形狭缝设计，消除示差折光效应同时；进一步提高灵敏度及线性范围Waters 2487的其他特点：双通道、高灵敏度仪器内集成比色皿位置多种功能，胜任更复杂的工作MaxPlot，RatioPlot，灯优化软件等,Waters 2487 检测器用于2487的消除示差折光效应,梯形狭缝(TaperSlit )流动池,Patent applied for,梯形狭缝(TaperSlit )流动池Patent app,不同种类流
5、动池的比较,普通的圆柱形池,梯形池,梯形狭缝池,进口,出口,进口,出口,进口,出口,不同种类流动池的比较普通的圆柱形池梯形池梯形狭缝池,486的面板及操作,按此键后可调波长(190nm-600nm)波长数值显示在面板下面一行按此键褉环改变面板上面一行显示的内容Absorbance:吸光度Reference:参比池的能量Sample:样品池的能量调正满刻度量程对积分输出无作用调正滤波参数常设为1.0自动调零,486的面板及操作按此键后可调波长,486的Diagnostics操作,按此键后，进入Diagnostics状态面板下面一行显示ddd，按相应的数字可进行不同的校正，常用的如下(详细参见操作
6、手册)4，重新校正波长12，显示检测器(486)的版本号13，显示及修改IEEE地址(2-29)，缺省值及非IEEE操作是015，正常参比及样品池位置16，转换参比及样品池位置，常用于制备20，设置关灯时间21，设置积分输出的偏置26，设置扫描参数起、止波长，步宽(nm)，停留时间27，和26号参数一起工作，完成扫描,486的Diagnostics操作 按此键后,2487的面板及操作,回车键,分屏显示键,选项移动键,主屏幕,方法调用，A/B通道参数显示切换,设置及诊断,单/双波长方式切换，自动调零,运行/停止键,第二功能键,监视色谱图,2487的面板及操作回车键分屏显示键选项移动键主屏幕方法调
7、用,2487的显示面板,通道,吸光度,灯开/关,波长,灵敏度,下一画面,运行时间,自控/遥控,诊断开/关,键盘锁开/关,单/双波长,Shift 开/关,2487的显示面板通道吸光度灯开/关波长灵敏度下一画面运行时,光电二极管矩阵检测器,简称PDA(Photodiode Array Detector)兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息在收集色谱图的同时，得到光谱图色谱峰的纯度鉴定，色谱峰的确认任意波长的再处理对PDA的要求色谱的灵敏度光谱的灵敏度光谱的分辨率,光电二极管矩阵检测器简称PDA(Photodiode Ar,光电二极管矩阵检测器示意图,光电二极管矩阵检测器示意图,Waters的光电二
8、极管矩阵检测器,全新的光路设计不用聚光镜及各种消色差镜，以减少光路损失反相梯形光束流动池，用以消除示差折光效应灵敏度及分辨率的同时提高分辨率：1.2nm噪音：1.510-5AU,Waters的光电二极管矩阵检测器全新的光路设计,996与传统光学单元的比较,996与传统光学单元的比较,示差折光效应的影响,示差折光效应的影响,从硬件上消除示差折光效应,带来的好处不损失灵敏度及分辨率不会因错选参比波长而损失色谱及光谱信息只需设定如下参数即可操作波长范围分辨率每秒采集的光谱数操作极为简便不需费神选择参比波长及其带宽,从硬件上消除示差折光效应带来的好处,Waters 996 的操作,996需同2019一
9、起工作所有的操作在2019上完成,Waters 996 的操作996需同2019一起工作,示差折光检测器,Differential Refractive Index Detector,示差折光检测器Differential Refractive,Waters 410及2410的日常操作,调整检测器内、外(如有柱温箱)温度以5ml/min的流速“purge”参比池五分钟不接色谱柱！视室温变化大小，需较长时间的平衡参数设置按文献值或实验决定通常410可以在白天结束工作后不关机，节省第二天的平衡时间，保持0.1到0.5ml/min的流速,Waters 410及2410的日常操作调整检测器内、外(如,
10、显示,参数指示灯,Waters 410及2410的面板,显示参数指示灯Waters 410及2410的面板,410及2410操作：键盘及指示灯,按下键盘上的某些键，会有相应的指示灯亮，分别表示%Full Scale屏幕上的显示为记录仪输出满刻度量程的百分比SENS屏幕上的显示为目前的灵敏度设置SCALE FACTOR屏幕上的显示为目前的刻度因子，10mV 输出起作用EXT1 / EXT2屏幕上的显示为外部柱温箱温度，或可设置温度INT屏幕上的显示为检测器内部温度2ND FUNC按下此键(蓝色)可选键上方指示的第二功能，其指示灯在 ENTER键的旁边REMOTE表示410在其他控制器的控制下,4
11、10及2410操作：键盘及指示灯按下键盘上的某些键，会有相,示差检测器的注意事项,不能做梯度实验最大的池耐压是 100 psi流速范围是 0.3 - 10 ml/min.,示差检测器的注意事项不能做梯度实验,荧光检测器,Fluorescence Detector 滤光片分类近通 Short pass -低于特定点的所有波长可以通过远通 Long pass - 高于特定点的所有波长可以通过带通 Band pass - 在特定范围内的所有波长可以通过,荧光检测器Fluorescence Detector 滤光片,Waters 474 的特点,可调波长荧光检测器双扫描发射波长及激发波长均可扫描在扫描
12、模式下(Scan)高灵敏度水的RAMAN峰S/N大于200可编程 时间 - 波长 时间 - 增益在编程模式下(Program),Waters 474 的特点可调波长荧光检测器,474的操作,显示在一般(Normal)操作模式下，474有如下显示Mode显示474目前的操作模式，Normal、Program、ScanSignal显示当前荧光发射信号的强度Response响应设置的大小，相当于滤波(Filter)常数EX激发波长(nm)EM发射波长(nm)Gain增益设置的大小，加在光电倍增管上的电压，大时灵敏度高Atten衰减设置的大小，对10mV信号的衰减，积分信号不起作用键盘 很多键有多个功
13、能，需用Shift 键控制,474的操作显示在一般(Normal)操作模式下，474有,电化学检测器,Electrochemical Detector随着化合物被氧化或还詟，产生正比于浓度的电流,电化学检测器Electrochemical Detector,Waters 464 的面板,464的面板有显示屏、键盘及指示灯指示灯表示Cell On:464在工作状态，电极上加了电压Run:464在工作状态，不断测定池子的电流并输出Potential Overload:不能保持电极上的电压，一般是池及其连接部分有问题Current Overload:电流超过满量程Communication Erro
14、r:目前不用Shift:按下Shift键，这时可用第二功能,Waters 464 的面板464的面板有显示屏、键盘及指示,Waters 464 的操作,开机后，可在SELECT MODE下用蒉键选五种模式之一DC 直流模式，常用于高灵敏度检测SCAN 扫描模式，可得到样品的电位 - 电流图PULSE 脉冲模式，可优化某些样品的相应，如分析离子，该模式下稳定性好而灵敏度稍低SYSTEM 模式，对仪器进行设置CALIBRATION 模式，对仪器自检或校正,Waters 464 的操作开机后，可在SELECT MOD,电导检测器,Conductivity Detector,电导检测器Conductivity Detector,Waters 432的操作,根据流动相的本底电导设定基础电压电导检测器是温度敏感检测器，注意恒温电导检测器是压力敏感检测器，注意选用无压力波动的溶剂输送系统用一般色谱泵时注意，如系统反压低1000psi时，加额外的压力阻尼装置,Waters 432的操作根据流动相的本底电导设定基础电压,
