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1、,主讲老师：叶素丹,微生物检验技术,金黄色葡萄球菌检验国标解读与检验准备（第二法）,主讲老师：叶素丹,微生物检验技术,金黄色葡萄球菌检验国标解读与检验准备（第二法）,目录页,金黄色葡萄球菌检验国标解读与检验准备（第二法）,GB 4789.10-2010标准版本,一、标准版本与内容,适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验,适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数,适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。,一、标准版本与内容,金黄色葡萄球菌是我国细菌性食物中毒的主要致病菌之一,乳粉和婴儿配方食品等产品,要求按照GB 4789.10-2010第二法（平板
2、计数法）进行检验。,二、方法的选择与应用,检验方法的选择,二、方法的选择与应用,选择 2 个3 个连续的适宜稀释度的样品匀液，接种 Baird-Parker 平板,36 1 ,报告,接种与培养,典型菌落计数与确认,检样25g（mL）样品+ 225mL稀释液，均质,计数与血浆凝固酶试验,样品处理与稀释,10倍梯度稀释,三、标准检验流程,45h48h,10-1 样品匀液,10-2样品匀液,10-3样品匀液,根据对样品污染状况的估计，选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）,每个稀释度分别吸取 1 mL 样品匀液以 0.3 mL、 0.3 mL、 0.4 mL 接种量分别加入三块
3、 Baird-Parker 平板，涂布，培养。,三、标准检验流程,2、接种与培养,1、样品稀释,三、标准检验流程,3、典型菌落计数与确认,选择在BP琼脂平板有典型金黄色葡萄球菌菌落特征， 且同一稀释度 3 个平板所有菌落数合计在 20 CFU200 CFU 之间的平板，计数典型菌落数。,再从典型菌落中任选 5 个菌落（小于 5 个全选），做血浆凝固酶试验进行典型菌落数确认。,3、典型菌落计数与确认,三、标准检验流程,三、标准检验流程,a）只有一个稀释度平板的菌落数在20 CFU200 CFU之间且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落； b） 最低稀释度平板的菌落数小于 20 CFU 且有典
4、型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；c） 某一稀释度平板的菌落数大于 200 CFU 且有典型菌落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释度平板上的典型菌落；d） 某一稀释度平板的菌落数大于 200 CFU 且有典型菌落，且下一稀释度平板上有典型菌落，但其平板上的菌落数不在 20 CFU200 CFU 之间，应计数该稀释度平板上的典型菌落；,3、典型菌落计数与确认,三、标准检验流程,e）若2 个连续稀释度的平板菌落数均在 20 CFU200 CFU 之间，按公式（2）计算。,3、典型菌落计数与确认,4、结果与报告,三、标准检验流程,金黄色葡萄球菌检验,一、无菌器材,（1）样品稀释液：2
5、25ml生理盐水或磷酸盐缓冲溶液）、无菌试管（含9ml生理盐水或磷酸盐缓冲溶液）（2）分离平板：baird-parker（BP）琼脂平板；（3）鉴定试剂：脑心浸出液肉汤（BHI）、冻干兔血浆、营养琼脂斜面。,二、培养基与试剂,三、实验室准备与要求,一般样品检验在洁净实验室中进行样品稀释与接种过程,病原微生物分离鉴定在二级生物安全实验室（BSL-2）中进行。分离鉴定,按照GB4789.1-2010 食品安全国家标准 食品卫生学检验 总则的要求：,一般一个样品需要几根无菌涂布棒？ 几块BP平板？ 几支BHI和冻干兔血浆试剂？,参考网站：http:/,谢谢观看,智慧职教 http:/,校本资源库http:/,参考网站：http:/,谢谢观看,课程网址：,微生物检验技术,课程教学团队,
