化脓性球专题知识讲座培训课件.ppt

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1、化脓性球专题知识讲座,化脓性球专题知识讲座,第一节 葡萄球菌属,一、分 类 重要菌种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌， 头状葡萄球菌，人葡萄球菌和腐生葡萄球菌。 人体分离的葡萄球菌还有溶血葡萄球菌、沃氏 葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施 氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔 氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、 山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌和中间葡萄球菌。,化脓性球专题知识讲座,2,第一节 葡萄球菌属 一、分 类化脓性球专题知识,二、临床意义,凝固酶阳性葡萄球菌是重要致病菌，以急性 化脓性感染为特征，感染还可扩散或转移。 常见的感染有疖痈、切口创伤等局部感染和 骨髓炎等全身性感染。

2、致病性与侵袭性酶类 (如血浆凝固酶)和多种毒素有关。某些菌株 还能产生肠毒素引起食物中毒；产生剥脱毒 素可引起人类烫伤样皮肤综合征；产生毒性 休克综合征毒素引起毒性休克综合征(TSS)。,化脓性球专题知识讲座,3,二、临床意义 凝固酶阳性葡萄球菌是重要致病菌，以,凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤粘膜 正常菌群，是医院感染的主要病原菌， 其中表皮葡萄球菌引起人工瓣膜性心 内膜炎、静脉导管感染、腹膜透析性 腹膜炎、血管移植物感染和人工关节 感染等；腐生葡萄球菌则是女性尿路 感染的重要病原菌，成为重要的条件 致病菌和免疫受损患者的感染菌。,化脓性球专题知识讲座,4,凝固酶阴性葡萄球菌是人体皮肤粘膜化脓性

3、球专题知识讲座4,感染的发生常和细菌产生夹膜多糖或糖萼有关，它能增强细菌与生物性瓣膜、导管等物质表面的粘附或在其表面形成一层生物膜而保护细菌对抗杀菌物质作用。葡萄球菌的耐药性已演变为医院感染和临床治疗的棘手问题。,化脓性球专题知识讲座,5,感染的发生常和细菌产生夹膜多糖或糖化脓性球专题知识讲座5,三、微生物特性,直径0.51.5m、革兰阳性球菌， 排列呈葡萄串样，无鞭毛和芽胞。 能形成荚膜。,化脓性球专题知识讲座,6,三、微生物特性 直径0.51.5m、革兰阳性球菌，,兼性厌氧菌，营养要求不高，最适生长温度3537，最适 pH7.47.6。普通培养基上形成23mm呈金黄色、白色、柠檬色等不透明

4、圆形凸起菌落，血琼脂平板上有透明溶血环。能在1015NaCl琼脂中生长，接种于高盐琼脂平板上，有利于菌种检出。,化脓性球专题知识讲座,7,兼性厌氧菌，营养要求不高，最适生长温化脓性球专题知识讲座7,抵抗力最强，耐干燥，对多种抗生素和消毒剂不敏感。生化反应活泼、能分解多种糖类和蛋白质，触酶阳性。G+Cmol为3039，携带青霉素酶和乙酰基转移酶的质粒，能通过转导转移耐药性。,化脓性球专题知识讲座,8,抵抗力最强，耐干燥，对多种抗生素和化脓性球专题知识讲座8,四、微生物检验,（一） 采取标本应避免正常菌群污染。 （二） 直接显微镜检查 无菌体液如脑脊液和关节穿刺液涂片革 兰染色，查见细菌具有重要临

5、床价值； 其他体液标本如同时伴有炎性细胞也 具有参考价值，可向临床初步报告“查 见属革兰阳性葡萄球菌”。,化脓性球专题知识讲座,9,四、微生物检验 （一） 采取标本应避免正常菌群污染。化脓性球,其他体液标本如同时伴有炎性细胞也具有参考价值，可向临床初步报告“查见属革兰阳性葡萄球菌”。,化脓性球专题知识讲座,10,其他体液标本如同时伴有炎性细化脓性球专题知识讲座10,（三）分离培养与鉴定 临床标本可接种血平板，污 染标本接种在选择平板上，如甘 露醇高盐平板，血液标本则用肉 汤增菌培养基。,化脓性球专题知识讲座,11,（三）分离培养与鉴定化脓性球专题知识讲座11,孵育过夜平板上可见直径约为2-3m

6、m，呈金黄色、白色或柠檬色的光滑、不透明、凸起圆形菌落，有时可见-溶血环，挑取菌落作鉴定试验。,化脓性球专题知识讲座,12,孵育过夜平板上可见直径约为2-3mm，化脓性球专题知识讲座1,鉴定病原性葡萄球菌的方法,1凝固酶试验 试验所用的血浆为 EDTA抗凝兔血浆。金黄色葡萄球 菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反 应。,化脓性球专题知识讲座,13,鉴定病原性葡萄球菌的方法 1凝固酶试验 试验所用的血浆为,(1)玻片凝固酶试验：金黄色葡萄 球菌表面有结合的凝固酶(聚集 因子)，与血浆中的纤维蛋白原 交联使菌体快速凝聚。,化脓性球专题知识讲座,14,(1)玻片凝固酶试验：金黄色葡萄化脓性球专题知识讲座14

7、,(2)试管凝固酶试验：细菌分泌到 菌体外的凝固酶被血浆中的协 同因子激活形成复合物，再使 纤维蛋白原转变成纤维蛋白。,化脓性球专题知识讲座,15,(2)试管凝固酶试验：细菌分泌到化脓性球专题知识讲座15,2.耐热核酸酶试验 大多数金 黄色葡萄球菌、施氏葡萄球 菌、中间葡萄球菌、猪葡萄 球菌能产生耐热核酸酶。,化脓性球专题知识讲座,16,2.耐热核酸酶试验 大多数金化脓性球专题知识讲座16,将待测菌的过夜肉汤培养物置沸水浴15min后，滴加于含甲苯胺蓝核酸琼脂上已打好的直径为25mm小孔内，置35孵育，1h后观察结果，绕孔周围蓝色琼脂转变为粉红环为阳性。,化脓性球专题知识讲座,17,将待测菌的

8、过夜肉汤培养物置沸化脓性球专题知识讲座17,大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌为阳性。,磷酸酶试验,化脓性球专题知识讲座,18,大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡磷酸酶试验 化脓性球专题,将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的pH5.66.8MH琼脂上，孵育1824h，菌落周围出现黄色为阳性。,化脓性球专题知识讲座,19,将待测菌种点种在加有硝基酚化脓性球专题知识讲座19,溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、 施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为 试验阳性。 将孵育24h斜面培养物接种在含 吡咯烷酮-萘基酰胺肉汤中,35 孵育2h，加入试剂后2分钟内呈现 深紫红色为阳性。,吡

9、咯烷酮芳基酰胺酶试验,化脓性球专题知识讲座,20,溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、吡咯烷酮芳基酰胺酶试验,(四)药物敏感性试验,葡萄球菌属细菌药敏试验选择抗生素： A组(常规首选药物)为苯唑西林、青 霉素； B组(临床使用主要药物)阿齐霉素、 克林霉素、甲氨苄啶磺胺甲嗯唑、 万古霉素；,化脓性球专题知识讲座,21,(四)药物敏感性试验 葡萄球菌属细菌药敏试验选择抗生素：,C组(对A组耐受、过敏或无反应者)用环丙沙星、庆大霉素、氯霉素；U组(尿道中分离细菌)用诺氟沙星、呋喃妥因。,化脓性球专题知识讲座,22,C组(对A组耐受、过敏或无反应者)化脓性球专题知识讲座22,耐甲氧西林葡萄球菌,通过药敏试验

10、可筛选出耐甲氧西林葡萄球菌(methecillin resistant Staphylococcus，MRS)，它是携带mec A基因、编码低亲和力青霉素结合蛋白导致耐甲氧西林、所有头孢菌素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素酶抑制剂抗生素的葡萄球菌，该菌是医院内感染的重要病原菌，感染多发生于免疫缺陷患者、老弱患者及手术、烧伤后的患者、极易导致感染暴发流行，治疗困难、病死率高。,化脓性球专题知识讲座,23,耐甲氧西林葡萄球菌通过药敏试验可筛选出耐甲氧西林葡萄球菌化脓,(六)检验结果分析与报告,葡萄球菌是临床上常见的细菌，经涂片染色镜检观察革兰阳性球菌和典型菌落形态，若触酶试验阳性者，应先用凝固酶试验

11、检查，将其分成凝固酶阳性和凝固酶阴性细菌。,化脓性球专题知识讲座,24,(六)检验结果分析与报告葡萄球菌是临床上常见的细菌，经涂化脓,前者大多为金黄色葡萄球菌，应及时快速鉴定和进行药敏试验，尽快报告临床。后者大多是从输液导管、人工植入组织中分离出的细菌，应视为病原菌，须鉴定到菌种。,化脓性球专题知识讲座,25,前者大多为金黄色葡萄球菌，应及化脓性球专题知识讲座25,对凝固酶阴性葡萄球菌，可先用呋喃唑酮纸片（100g/片)，杆菌肽纸片(0.04u片)作药敏试验和氧化酶试验，以此与微球菌属细菌鉴别，微球菌对杆菌肽敏感而对呋喃唑酮耐药、氧化酶试验阳性，与葡萄球菌属正好相反。,化脓性球专题知识讲座,2

12、6,对凝固酶阴性葡萄球菌，可先用呋化脓性球专题知识讲座26,若药物敏感性试验是甲氧西林耐药的菌株，则报告该菌株耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和-内酰胺药-内酰胺酶抑制剂类抗生素，同时对氨基糖苷类，大环内酯类和四环素类抗生素也耐药。,化脓性球专题知识讲座,27,若药物敏感性试验是甲氧西林耐药化脓性球专题知识讲座27,第二节 链球菌属,一、分 类 分类发生变化，D群链球菌独立为肠球菌属, N群链球菌为乳球菌属。鉴定仍用传统的分类方法，分为： 1.具有A、C、G抗原群溶血性链球菌。 包括: 菌落直径大于0.5mm A群的化脓 性链球菌,C群、G群的马链球菌和似马链 球菌；菌落直径小于0.5mm

13、具A、C、 G抗原，称米勒链球菌，主要包括咽喉炎 链球菌、中间型链球菌和星座链球菌3种。 还有溶血和不溶血的细菌。,化脓性球专题知识讲座,28,第二节 链球菌属 一、分 类化脓性球专题知识讲座2,2. 具有B抗原群溶血性链球菌又称 无乳菌。3.溶血或草绿色溶血包括肺炎链球 菌和草绿色链球菌群。4. 不溶血D群抗原链球菌称牛链球菌。,化脓性球专题知识讲座,29,2. 具有B抗原群溶血性链球菌又称化脓性球专题知识讲座29,二、临床意义,化脓性链球菌是致病力最强的链球菌,能产生多种毒素、M蛋白、脂磷壁酸和链激酶、链道酶、透明质酸酶等致病因子，可引起咽炎、呼吸道感染、丹毒、心内膜炎和脑膜炎等，产毒株还

14、可引起猩红热。该群细菌可致变态反应性疾病如急性肾小球肾炎，风湿热等。,化脓性球专题知识讲座,30,二、临床意义 化脓性链球菌是致病力最强的链球菌,化,无乳链球菌是新生儿脑膜炎的常见菌，该菌定居于妇女生殖道，故感染多发于出生后24h，以肺炎为主。晚发型为产后7天至3月,以脑膜炎和菌血症为主。 B群链球菌对成人侵袭力较弱，主要有肾盂肾炎、子宫内膜炎;糖尿病泌尿生殖道功能失调，肿瘤和免疫功能低下者易受B群链球菌感染。,化脓性球专题知识讲座,31,无乳链球菌是新生儿脑膜炎的常见菌，化脓性球专题知识,C、G群溶血性链球菌可引起上述相似的感染。米勒链球菌是口腔、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常菌群，引起手

15、术和创伤等内源性感染。,化脓性球专题知识讲座,32,C、G群溶血性链球菌可引起上化脓性球专题知识,肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜菌血症。荚膜的侵袭力起重要作用，溶血素、神经胺酸酶也是其主要致病物质。,化脓性球专题知识讲座,33,肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气化脓性球专题知识讲座,草绿色链球菌是人体正常菌群，从血液中分离出该菌常被认为是污染的细菌。然而它可引起瓣膜异常患者的亚急性细菌性心内膜炎。血液链球菌、温和链球菌、格氏链球菌、口腔链球菌、中间型链球菌、常分离自深部脓肿、尤其是肝和脑脓肿。,化脓性球专题知识讲座,34,草绿色链球菌是人体正常菌群，从

16、化脓性球专题知识讲座3,三、微生物特征 直径小于2m的革兰阳性球菌，呈链状排 列，无芽胞和动力，形成荚膜。肺炎链球菌 呈矛尖状，宽端相对尖端向外。 兼性厌氧菌，肺炎链球菌和草绿色链球菌 某些菌种需要CO2：促进其生长。营养要求 高，须在培养基中加入血液、血清。最适生 长温度3537，pH7.47.6，血平板上形 成灰白色，透明表面光滑的小菌落，环绕菌 落形成、三种特征性溶血现象，液 体培养形成絮状和颗粒沉淀。,化脓性球专题知识讲座,35,三、微生物特征化脓性球专题知识讲座35,发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性。链球菌基因DNA中G+C mol为3134。抗原结构复杂，主

17、要有多糖抗原和蛋白抗原，前者位于细胞壁以此可将链球菌分类为A、D、C、D、F、G等13群。 本菌属对干燥和消毒剂敏感，除肺炎链球菌外，较少引起细菌耐药性。,化脓性球专题知识讲座,36,发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳化脓性球专题知识讲,四、微生物检验 1. 主要采咽拭标本、痰液、脓汁和血液 等标本，采集后在2h内送验，对B群 溶血链球菌的检查，第3537周妊娠 妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素 (10gm1)和萘啶酸(15g gm1) 选择性培养肉汤中孵育1824h，再 作分离培养。,化脓性球专题知识讲座,37,四、微生物检验化脓性球专题知识讲座37,2. 直接显微镜检查标本涂片革兰染色 镜检，

18、见链状排列革兰阳性球菌有 助于无正常菌群污染标本，荚膜肿 胀试验用于检查肺炎链球菌。3. 直接检测抗原咽拭标本的A群和阴 道标本的D群链球菌可用抗原检测， 先将标本放于含亚硝酸液中孵育片 刻，用ELISA方法检测。标本含菌 数少可出现假阴性。,化脓性球专题知识讲座,38,2. 直接显微镜检查标本涂片革兰染色化脓性球专题知识讲座38,4. 分离培养与鉴定 用血平板培养有助于识别溶血特性和 进一步鉴定。初代分离需用5CO环 境, 3537孵育24h, 观察菌落性状： 溶血的A、C、G群菌落较大，直径大 于0.5mm，而米勒链球菌则小于0.5mm。 B群链球菌菌较大，溶血环较A、C、G 群模糊，溶血

19、菌落呈草绿色，肺炎链 球菌因荚膜多糖使菌落呈粘性。牛型链 球菌则为无溶血环呈灰色。,化脓性球专题知识讲座,39,4. 分离培养与鉴定化脓性球专题知识讲座39,链球菌属鉴定方法 1. -溶血链球菌鉴定 (1) Lancefield群特异性抗原鉴定：B群 为无乳链球菌，F群为米勒链球菌。 (2) PYR试验：化脓性链球菌产生的吡 咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮B- 萘基酰胺，加入 N、N-二甲氧基肉 桂醛试剂后产生桃红色。,化脓性球专题知识讲座,40,链球菌属鉴定方法 化脓性球专,(3) 杆菌肽敏感试验：可作为筛选试验。 0.04U杆菌肽药敏纸片贴在待测菌的 血平板上，35孵育过液后，观察 抑菌环,

20、化脓性链球菌敏感为阳性。(4) VP试验：挑取平板上孵育过夜菌落 置于2ml VP肉汤中，孵育6h后加入 VP试剂，摇匀30秒，出现桃红色者 为阳性。,化脓性球专题知识讲座,41,(3) 杆菌肽敏感试验：可作为筛选试验。化脓性球专题知识讲座,(5) CAMP试验：无乳链球菌能产生 CAMP因子促进金葡菌溶血能力， 可作为初步鉴定试验。先将金葡 菌(ATCC25923)沿直径划线接种， 再沿垂直方向接种无乳链球菌， 两线不得相接，间隔约34mm。 35孵育过夜，划线交界处出现 箭头状溶血为阳性。,化脓性球专题知识讲座,42,(5) CAMP试验：无乳链球菌能产生 化脓性球专题知识讲座,2. 非溶

21、血链球菌鉴定 (1) optochin试验：含5optochin 纸片贴于涂布有待测菌的平板上, 35孵育过夜，抑菌圈大于14mm 即为敏感。肺炎链球菌敏感。,化脓性球专题知识讲座,43,2. 非溶血链球菌鉴定化脓性球专题知识讲座43,(2) 胆汁溶菌试验：将O5ml的麦氏浓 度细菌悬液和等量的2去氧胆盐置 于试管内，35孵育2小时后, 菌液 变清为阳性。肺炎链球菌为阳性。(3) 胆汁七叶苷试验：将待测菌落接种 于胆汁七叶苷斜面，35孵育48小 时，斜面黑色为阳性。牛链球菌试 验阳性。,化脓性球专题知识讲座,44,(2) 胆汁溶菌试验：将O5ml的麦氏浓化脓性球专题知识讲,3草绿色链球菌鉴定,

22、化脓性球专题知识讲座,45,3草绿色链球菌鉴定 链球菌群VP脲酶精氨酸七叶苷甘露醇山梨,(五) 抗链球菌溶血素O试验 常用于风湿热的辅助诊断，活 动性风湿热患者的抗体效价一般 超过400单位。,化脓性球专题知识讲座,46,(五) 抗链球菌溶血素O试验化脓性球专题知识讲座46,(六) 药物敏感性试验 A组为红霉素、青霉素、甲氨苄啶磺 胺甲嗯唑等； B组为头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、 培南类等； C组为阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、 利福平等。青霉素是抗链球菌的首选药 物，此外头孢菌素、红霉素、万古霉素 也是治疗链球菌感染的药物。,化脓性球专题知识讲座,47,(六) 药物敏感性试验化脓性球专题知识

23、讲座47,有报道A群链球菌红霉素耐药株和牛链球菌万古霉素耐药株，耐青霉素的肺炎链球菌和草绿色链球菌。 若来源于血和脑脊液，对该菌株应检测对头孢曲松、头孢噻肟和美洛培南的MIC以判断敏感、中介或耐药。,化脓性球专题知识讲座,48,有报道A群链球菌红霉素耐药株和化脓性球专题知识讲座4,(七) 检验结果分析与报告 -溶血性链球菌和肺炎链球菌 系毒力强的致病菌，均应及时报 告，及时使用抗生素以减少发生 并发症。,化脓性球专题知识讲座,49,(七) 检验结果分析与报告化脓性球专题知识讲座49,C、G群大菌落-溶血性链球菌是咽喉炎病原体，而米勒链球菌群是正常菌群，但在脓肿或伤口中分离的应视为致病菌而非污染

24、菌。 牛链球菌生物型1和心内膜炎及胃肠道癌症有关。,化脓性球专题知识讲座,50,C、G群大菌落-溶血性链球菌是化脓性球专题知识讲,第三节 肠球菌属,一、分 类 肠球菌属归类链球菌科，但种系 分类法证实粪肠球菌和屎肠球菌 不同于链球菌属的细菌，将其命 名为肠球菌属。有19种肠球菌， 分成5群，临床分离的肠球菌多属 于2群。,化脓性球专题知识讲座,51,第三节 肠球菌属 一、分 类化脓性球专题知识讲座51,二、临床意义 肠球菌所致感染最多见于尿路感 染，多与尿路器械操作、留置导尿、 尿路结构异常有关，是重要的医院 感染病原菌。腹腔和盆腔创伤时也 常见肠球菌感染。近年来用抗生素 而出现的耐药性，使肠

25、球菌感染率 不断上升。,化脓性球专题知识讲座,52,二、临床意义 化脓性球专题知识讲座52,肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人、长期住院的免疫功能低下患者。偶尔可见呼吸道或中枢神经系统的肠球菌感染，在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意义。,化脓性球专题知识讲座,53,肠球菌引起的菌血症常发生于有化脓性球专题知识讲座53,三、微生物特性,革兰阳性球菌、卵圆形、链状排列。无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。 兼性厌氧菌，最适生长温度35；大多数菌株在1045均能生长。在含6.5NaCl肉汤中能生长，在40胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺

26、(PYR)，不含细胞色素氧化酶和触酶。粪肠球菌培养于血培养基中，可合成细胞色素或触酶。含D群链球菌D抗原。G+Cmol为3745。,化脓性球专题知识讲座,54,三、微生物特性 革兰阳性球菌、卵圆形、链状排列。无,四、微生物检验 1. 常规采集血、尿、创伤标本和 其他拭子，标本于1小时内接 种完毕。 2. 直接涂片染色镜检可见成短链 排列, 卵圆形革兰阳性球菌。,化脓性球专题知识讲座,55,四、微生物检验化脓性球专题知识讲座55,3. 接种于含血平板，若含革兰阴性杆菌可 选用选择鉴别培养基，常用叠氮胆汁七 叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而 肠球菌分解七叶苷为黑色菌落； 35 37孵育24h后，

27、形成灰白不透明、表面 光滑、直径0.51大小的圆形菌落，血平板上为溶血或不溶血。,化脓性球专题知识讲座,56,3. 接种于含血平板，若含革兰阴性杆菌可化脓性球专题知识讲座,细菌鉴定方法,化脓性球专题知识讲座,57,细菌鉴定方法 菌属万古霉素 分解葡萄糖 PYR胆汁七叶苷Na,(五) 药物敏感试验 A组为青霉素或氨苄青霉素， B组为万古霉素； C组为四环素类和红霉素、氯霉素、 利福平； U组为环丙沙星、诺氟沙星等。,化脓性球专题知识讲座,58,(五) 药物敏感试验 A组为青霉素或氨苄青霉素，,肠球菌的耐药性对一般剂量或中剂量氨基糖苷类耐药和对万古霉素低度耐药。临床上联合使用青霉素G、氨苄青霉素与

28、氨基糖苷类抗生素成为治疗肠球菌首选方法。,化脓性球专题知识讲座,59,肠球菌的耐药性对一般剂量或中化脓性球专题知识讲座59,对重症感染患者分离的肠球菌应鉴定到种，由于医院内感染肠球菌呈上升趋势，故对肠球菌分型的流行病学调查显得越来越重要，传统的分型可用生物分型、抗生素耐药谱、噬菌体、细菌素等分型方法，但费时费力，较为先进的分子生物学方法分型，尤其是在耐药株暴发流行时，显示其重要价值。,(六) 检验结果分析与报告,化脓性球专题知识讲座,60,对重症感染患者分离的肠球菌应鉴定到(六) 检验结果,第四节奈瑟菌属和布兰汉菌属,一、分 类奈瑟菌科包括奈瑟菌属、卡他布兰汉菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌

29、属。奈瑟菌属包括淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌及卡他布兰汉菌。,化脓性球专题知识讲座,61,第四节奈瑟菌属和布兰汉菌属一、分 类化脓性球专题知识讲,二、临床意义 1. 淋病奈瑟菌 淋病奈瑟菌是性病病原菌，临床 表现为：淋病；盆腔炎；口 咽部和肛门直肠病；淋菌性结膜 炎；播散性淋病。 淋病奈瑟菌致病物质包括菌毛、 外膜蛋白、IgA蛋白酶、脂多糖和 铁调节蛋白。,化脓性球专题知识讲座,62,二、临床意义化脓性球专题知识讲座62,2. 脑膜炎奈瑟菌 脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎 病原体,通过呼吸道感染后多数为隐性 感染或表现为上呼吸道症状，少数可 发展为败血症，进而形成化脓性脑膜 炎。3.卡他布兰汉菌

30、卡他布兰汉菌是导致中耳炎，鼻窦 炎，慢性阻塞性肺炎的病原体。,化脓性球专题知识讲座,63,2. 脑膜炎奈瑟菌化脓性球专题知识讲座63,三、微生物特性 为革兰阴性双肾样，坦面相邻的双球 菌, 直径约为0.61.5m，无动力无芽 胞, 某些菌种形成荚膜，孵育24h后在培 养基上发生自溶。需要丰富营养，对脂 肪酸敏感, 在培养基中需加入淀粉。,化脓性球专题知识讲座,64,三、微生物特性化脓性球专题知识讲座64,需氧生长，CO2和湿度刺激奈瑟菌生长，最适生长温度为3537。氧化酶阳性，触酶阳性，对糖分解能力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不同，常作为鉴别依据。抵抗力弱，对化学消毒剂敏感。+mol奈瑟菌属

31、为4654，布兰汉菌属为4048。,化脓性球专题知识讲座,65,需氧生长，CO2和湿度刺激奈瑟菌化脓性球专题知识讲座,四、微生物检验 1. 采集脑脊液、血液、瘀点穿刺液等标 本后, 立即送检，或用血平板床边接种 后立即孵育。 2. 直接镜检 涂片固定革兰染色，显微镜 观察可见革兰阴性双球菌和胞内含球 菌的多形核白细胞，有助于男性淋病 早期诊断。女性宫颈拭子标本涂片可 见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌, 由 于女性阴道有正常菌群寄居，故必须 由培养结果得以证实方可报告。,化脓性球专题知识讲座,66,四、微生物检验化脓性球专题知识讲座66,脑脊液或皮肤瘀点渗出液涂片所见革阴 性双球菌和白细胞内的革兰

32、阴性双球菌， 有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。3. 抗原检测和核酸检测 利用ELISA检测淋 病奈瑟菌抗原，该法在检测男性尿道分 泌物标本和涂片染色具有相同的敏感度 和特异度，但在宫颈和直肠拭子中，由 于奈瑟菌属存在共同抗原，其特异性较 革兰染色涂片镜检低。 4. 分离培养与鉴定。,化脓性球专题知识讲座,67,脑脊液或皮肤瘀点渗出液涂片所见革阴化脓性球专题,奈瑟菌属鉴定 1. 推测性鉴定 G-双球菌和氧化酶试验阳性是两个推测 性鉴定指标。区分G-双球菌和G-球杆菌方 法是将待检菌接种于巧克力平板上, 贴10U 的青霉素纸片，35孵育1824小时，挑 取纸片边缘生长的菌落，涂片 染色观察， 若菌

33、体延长成长索状则为G-球杆菌，而G- 双球菌则仍保持双球菌形态，某些菌体出 现肿胀。,化脓性球专题知识讲座,68,奈瑟菌属鉴定化脓性球专,2. 确证性鉴定 利用生化反应，如脑膜炎奈瑟菌、 淋病奈瑟菌葡萄糖试验产酸，而卡 他布兰汉奈瑟菌为阴性；脑膜炎奈 瑟菌麦芽糖试验产酸，而淋病奈瑟 菌为阴性。,化脓性球专题知识讲座,69,2. 确证性鉴定化脓性球专题知识讲座69,(五) 药物敏感性试验 药物敏感试验选择药物为青霉素、头 孢菌素、四环素、环丙沙星和壮观霉素。 治疗首选药物为青霉素。 近年来，由于淋病奈瑟菌耐药质粒转 移，由其介导的耐青霉素酶的淋病奈瑟 菌临床上多见，该菌表现对青霉素和四 环素耐药

34、，对壮观霉素和三代头孢菌素、 喹诺酮类敏感，强调临床实验室的药敏 试验结果，以有助于合理用药。,化脓性球专题知识讲座,70,(五) 药物敏感性试验化脓性球专题知识讲座70,对引起的下呼吸道感染卡他布兰汉菌，既往对青霉素敏感，近年来报告耐药菌株日渐增多，可用广谱青霉素与青霉素酶抑制剂的合剂进行治疗。,化脓性球专题知识讲座,71,对引起的下呼吸道感染卡他布兰化脓性球专题知识讲座71,(六) 检验结果分析与报告 淋病的早期和正确诊断，具有医 学和社会的重要意义，诊断报告必 须慎重，对各种实验室诊断试验需 掌握其敏感性和特异性的程度，必 须综合分析各种试验的结果，最后 的确证还依赖于分离培养和鉴定。,

35、化脓性球专题知识讲座,72,(六) 检验结果分析与报告化脓性球专题知识讲座72,脑膜炎奈瑟菌的快速诊断能为治疗提供时机，故瘀点及脑脊液的染色，涂片镜检是快速简便方法。,化脓性球专题知识讲座,73,脑膜炎奈瑟菌的快速诊断能为治化脓性球专题知识讲座73,第七章 肠杆菌科,第一节 概述 肠杆菌科包括24个与医学有关的菌属, G+Cmol39-59。1. 四类引起人类腹泻和肠道感染的细菌：埃 希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌 属。2. 八种与医院感染有关的条件致病菌：枸橼 酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源 菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登 菌属和摩根菌属；,化脓性球专题知识讲座,74,第七

36、章 肠杆菌科 第一节 概述,3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对 人致病性较强。此外，许多细菌既 是正常菌群，也是条件致病菌。在 机体抵抗力下降，寄居部位的改变 或菌群失调时能引起机会感染。,化脓性球专题知识讲座,75,3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对化脓性球专题知识讲座75,二、临床意义 占临床分离菌总数的50和-总数的 80, 将近50的败血症70以上的泌尿 道感染和大量的肠道感染是由肠杆菌科 细菌引起的。 1. 人类肠道外感染 除志贺菌较少引起肠外 感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产 酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆 菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引 起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢

37、神经系 统的感染;,化脓性球专题知识讲座,76,二、临床意义化脓性球专题知识讲座76,且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可 引起烈性传染病鼠疫。2. 人类肠道感染 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶 尔森菌属。主要引起各种急、慢性肠 道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠 热症等。,化脓性球专题知识讲座,77,且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可化脓性球专题知识,三、共同特性 (1) 1. 形态结构 -杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭 毛，能运动。致病性菌株有菌毛。 2. 抗原成分 抗原是细胞壁成分脂多糖。以核 心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类 A, 为内毒素的毒性成分。外侧是由重复 的特异多糖，决定抗原的特

38、异性。,化脓性球专题知识讲座,78,三、共同特性 (1)化脓性球专题知识讲座78, H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸 序列和空间构型决定H抗原的特异性。 表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗 原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠 埃希菌称K抗原、伤寒沙门菌称Vi抗原 和志贺菌称B抗原等。 O抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分 群和分型的依据。表面抗原存在时可阻 断。抗原与相应抗体之间的反应，加热 处理能消除表面抗原的阻断作用。,化脓性球专题知识讲座,79, H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸化脓性球专题知识讲座7,共同特性 (2) 3. 变异性 S-R变异是初次分离的细菌，菌体 抗原上都有特异性多糖链

39、，菌落为光滑 型。在人工培养基中反复传代时，细胞 壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保 留，菌落变为粗糙型。 H-O变异是有鞭毛的细菌, 失去鞭 毛，动力也随之消失，称H-O变异, 有 时见于新分离的菌株中。,化脓性球专题知识讲座,80,共同特性 (,4. 培养和生化特性 营养要求不高，在普通培养基上生长 良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发 酵葡萄糖(产酸或产酸产气)，触酶阳性, 氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸 盐。5. 抵抗力 抵抗力不强，加热6030min即被杀 死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏 感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵 抗染料的抑菌作用。,化脓性球专题知识讲座,81,4.

40、培养和生化特性 化脓性球专题知识讲座81,四、微生物检验 1. 标本采集 肠外标本:采自不同的感染部位如血液 、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各 种标本。 肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑 取粘液脓血部分进行培养。应在2h内进 行，以利志贺菌等检出。如不能及时培 养应冷藏待检。 2. 直接镜检 -杆菌，形态及染色性无鉴别 意义。,化脓性球专题知识讲座,82,四、微生物检验化,3分离培养鉴定 (1) 肠外标本:采自无菌部位的标本用血 琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他 标本中含有杂菌，需用选择性培养基 以增加分离率，常用伊红美蓝(EMB) 琼脂，因为EMB能促进肠杆菌科细 菌生长并抑制其他-菌。

41、,化脓性球专题知识讲座,83,3分离培养鉴定 化脓性球专题知识讲座83,(2) 肠道标本：常用的选择鉴别培养基(如EMB)和针对沙门菌和志贺菌的强选择鉴别培养基，(如SS琼脂)。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选择琼脂(CIN)。,化脓性球专题知识讲座,84,(2) 肠道标本：常用的选择鉴别培化脓性球专题知识讲,肠杆菌科细菌鉴定1) 常规生化鉴定:为实验室最常用的方 法。各菌属(种)主要生化特性有助 于鉴定细菌。2) 鉴定试剂盒:选用标准化和商品化的 微生物鉴定试剂盒，特点是质量可 靠稳定鉴定能力强，并与编码技术 结合，可用仪器读取结果，实现自 动化，并提高了工作效率。,化脓性球专题知识讲座,85

42、,肠杆菌科细菌鉴定化脓性球专题知识讲座85,3) 血清学鉴定：用特异性抗血清进 行血清学分型鉴定后才能作出最 终报告。4) 分子生物学鉴定：可鉴定至科、 属 、种、血清型和肠毒素基因 等。甚 至可区分致病菌株和非 致病菌株。,化脓性球专题知识讲座,86,3) 血清学鉴定：用特异性抗血清进化脓性球专题知识讲座86,耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉素G等抗生素天然耐药，而大多数是形成的获得性耐药。有染色体或质粒介导的超广谱-内酰胺酶或AmpC酶而产生的耐药性。已出现了耐多种抗菌药物的多重耐药菌株，因此必须根据抗菌药物敏感试验选用抗生素，并作好耐药性监控工作。同时细菌的耐药谱还可成为医院感染流行

43、病学调查中的标志。,(五) 抗菌药物敏感试验,化脓性球专题知识讲座,87,耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉(五) 抗菌药物,一、分 类 埃希菌属包括5个种： 大肠埃希菌是肠道中G-杆菌的主要 成员， 常引起肠内外的感染，是腹 泻和泌尿道感染的主要病原菌。 蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在的致 病性。,第二节 埃希菌属,化脓性球专题知识讲座,88,一、分 类第二节 埃希菌属化脓性球专题知识讲座88, 弗格森埃希菌； 赫尔曼埃希菌； 伤口埃希菌。 最近还发现称为不脱胺凝聚埃 希菌 G+Cmol为 4852。,化脓性球专题知识讲座,89, 弗格森埃希菌； 化脓性球专题知识讲座89,二、临床意义 1.

44、致病因素 侵袭力 K抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和 补体的作用。菌毛能帮助细菌粘附于 粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖 产生毒素而引起相应的症状，直接侵 犯粘膜引起炎症。,化脓性球专题知识讲座,90,二、临床意义 化脓性球专题知识讲座90, 内毒素 具有发热、休克、DIC等病理作用。 肠毒素 产生不耐热和耐热肠毒素两种肠 毒素：均可使肠道细胞中cAMP 的水平升高，引起肠液大量分泌 而导致腹泻。,化脓性球专题知识讲座,91, 内毒素 化脓性球专题知识讲座91,二、临床意义 2. 所致疾病 肠道外感染 是临床分离的G-杆菌中最常见的 菌种，可引起泌尿系等各种类型的感染。 引起泌尿系感染的菌株以血清

45、型01、 2、6为多见，本菌还可引起菌血症、 胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。 常 见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、 肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面 感染。,化脓性球专题知识讲座,92,二、临床意义 化脓性球专题知识讲座92,有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产 生的脓液粘稠，有粪臭味。该菌对一般 抗生素敏感，易产生超广谱-内酰胺酶，而导致对第三代头孢菌素耐药。 肠道内感染 其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱 样严重腹泻，并能引起致死性并发症如 溶血性尿毒综合征。,化脓性球专题知识讲座,93,有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产化脓性球专题知识讲,(1) 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)： 引起儿

46、童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型 霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素(ST) 和不耐热肠毒素(LT)。(2) 肠致病性大肠埃希菌(EPEC)： 引起婴幼儿肠道感染, 血清型是055、 0111等, 是婴儿腹泻的重要病原菌。(3) 肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)： 类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引起 菌痢样症状，出现脓血粘液便。,引起肠道感染的大肠埃希菌,化脓性球专题知识讲座,94,(1) 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)：引起肠道感染的大肠埃,(4) 肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食 源性感染，通过粪-口途径传播。致病 因子是菌毛和Vero毒素，血清型是0157 ：H7，可引起出血性结肠炎，有2

47、7发展成溶血性尿毒综合征，出现溶 血性贫血，血小板减少性紫癜和急性肾 衰竭，死亡率为310。(5) 肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)：代表 一群不产生LT或ST，不能用O：H血清 分型，可粘附于Hep-2细胞的菌株。与 世界各地慢性腹泻有关。,化脓性球专题知识讲座,95,(4) 肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食化脓性球专题知,三、微生物特性 1. 形态结构 G-直短杆状， 大小为1.01.5m， 多数有鞭毛能运动， 引起肠外感染的菌株有荚膜(微 荚膜)和周身菌毛。,化脓性球专题知识讲座,96,三、微生物特性化脓性球专题知识讲座96,2. 抗原成分 O抗原是多糖磷脂复合物(LPS)，耐

48、热加热100不能灭活，已有171种 是血清学分型的基础。 H抗原是不耐热的蛋白质，已知有56 种，均为单相菌株。 K抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定， 能阻止O凝集。血清型别按O：K：H 的顺序以数字表示。,化脓性球专题知识讲座,97,2. 抗原成分 化脓性球专题知识讲座97,3. 培养特性 兼性厌氧，营养要求不高，在普通 琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿 润的菌落，在选择培养基上可发酵乳 糖形成有色菌落。IMViC 试验结果为 +-。,化脓性球专题知识讲座,98,3. 培养特性 化脓性球专题知识讲座98,四、微生物检验 (1) 肠道外感染标本 1. 标本采集 血液标本以无菌操作技术采集静脉血 5

49、ml注入血液培养瓶。痰标本取清晨口 腔清洁后从深部咳出的痰液。脓、分泌 物等标本用无菌棉拭子直接采取。 2. 直接涂片染色检查 除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本 均作涂片染色检查。尿液和各种体液离 心后取沉淀物作涂片, 可见G-短杆菌。,化脓性球专题知识讲座,99,四、微生物检验 (1) 化脓性球专题知识讲座99,3. 分离培养鉴定 (1) 血液标本接种肉汤增菌培养，待生 长后移种血平板。体液标本取离心 沉淀物接种于血平板。尿液标本应 同时作菌落计数。脓、痰和分泌物 标本可直接接种于血平板。35孵 育1824h后观察菌落形态。,化脓性球专题知识讲座,100,3. 分离培养鉴定 化脓性球专题知

50、识讲座100,(2) 鉴别培养基上挑选有色菌落，用生 化反应、血清学试验鉴定到属和种。 典型的生化反应特征： TSIA(双糖铁)产酸产酸产气， CIT(枸橼酸盐)阴性,URE(脲酶)阴性, IND(吲哚)阳性, MOT(动力)+-, ORN(鸟氨酸)+-。,化脓性球专题知识讲座,101,(2) 鉴别培养基上挑选有色菌落，用生化脓性球专题知识讲座1,四、微生物检验(2) 肠道内感染标本 引起腹泻的ETEC、EPEC 、EIEC和EHEC具有与肠道外感染的大肠埃希菌相似的生物学特性，但分别具有特殊的血清型、肠毒素或毒力因子。 检验程序同肠道外标本。采集腹泻 和食物中毒患者粪便和残留食物，肛拭标本，