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1、可见分光光度计性能检查,卫生检验学教研室 王茂清,可见分光光度计性能检查 卫生检验学教研室,1、掌握可见分光光度计主要性能的检定方法和仪器 的使用2、熟悉仪器的主要性能和技术指标3、了解可见分光光度计的基本结构,一、实验目的,1、掌握可见分光光度计主要性能的检定方法和仪器 一、实验目,二、实验原理,紫外可见分光光度法是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组成进行定性或定量及结构分析的方法。 Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依据。 A=bC,二、实验原理 紫外可见分光光度法是根据物质的分子,为了确保可见分光光度计分析的灵敏度和准确度，需要定期对仪器鉴定，
2、通过对一些特定技术指标的评价，可以了解仪器是否处于良好状态。 不同型号仪器的技术指标所能达到的标准不同，可以按照仪器说明书中的标准，采用特定方法评价进行评价。,为了确保可见分光光度计分析的灵敏度和准确度，需要定期对,1、开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约0.5h。2、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进入光度测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按MODE键进行切换。,三 、仪器的使用方法,1、开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约,3、设置测量波长： 在测量界面下，按GOTO 键，在数字键盘上键入波 长数值，按ENTER键4、设置吸收池模式和
3、个数： 按SHIFT/RETURN键，切换至系统应用界面。 （1）按上翻键，设置吸收池类型：,3、设置测量波长：,（2）按下翻键，设置吸收池个数 例如：如果实验需要6个吸收池进行测量，那么吸收池类型应设置为8CELL，吸收池个数设为6。,注意：设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳,（2）按下翻键，设置吸收池个数注意：设定的吸收池个数不应大于,5、自动校零： 按SHIFT/RETURN键，切换到测量界面。在1号吸收池中放入空白溶液，按Zero键进行空白校正。,注意：空白校正这一步骤，
4、一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正,5、自动校零：注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成,6、测量样品：从2号吸收池开始，依次放入样品，按START键，仪器测量全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值。读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值7、结束测量：按SHIFT/RETURN键，从读数界面返回测量界面，关闭电源,6、测量样品：从2号吸收池开始，依次放入样品，按START键,1、试剂：氯化钴溶液：2000、6000、10000g/ml 亚硝酸钠溶液：50g/L2、器材：T6新悦可见分光光度计 1c
5、m玻璃吸收池 镜头纸 滤纸 洗瓶 一次性吸管,四、试剂与器材,1、试剂：氯化钴溶液：2000、6000、10000g/m,五、实验步骤,1、波长校正2、波长重现性检定3、线性误差检查4、透光度重现性检定5、杂散辐射率6、吸收池的配套性检定7、稳定度检测,五、实验步骤1、波长校正,1、波长校正（波长准确度检定）：,开机，预热,按SHIFT/RETURN,按数字键9,系统自动检测内置镨钕玻璃片808.0nm的特征波长，时间大约1min。检测完成后，系统显示实测波长值,1、波长校正（波长准确度检定）：开机，预热按SHIFT/RE,（1）实测值与808.0nm的差值大于1nm时，应进行校正：在 默认的
6、“yes”状态下，按ENTER键，系统将进行校 正，然后返回系统应用界面（2）实测值与808.0nm差值小于1nm时，无须校正： 按下翻键，切换至“no”，再按ENTER键，系统直接返 回系统应用界面,（1）实测值与808.0nm的差值大于1nm时，应进行校正：,以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶(6000g/ml)在506、508、510、512、514，516nm处的吸光度。从一个波长方向，逐一作3次测量，记录吸光度值，做吸收光谱图，波长为横坐标，吸光度值为纵坐标。选择最大吸收峰波长测量值，代入公式计算波长重复性(0.2nm)。,2、波长重现性检定：,以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶(600
7、0g/ml),3、线性误差检查： 以蒸馏水为参比，测量2000、6000、10000g/ml氯化钴溶 液于514nm处的吸光度，重复测定3次，记录吸光度值，取 其平均值代入公式计算,3、线性误差检查：,按SHIFT/RETURN键，从读数界面切换至测量界面。（1）设置波长：514nm（2）设置吸收池个数：4个（3）空白校正（4）测量：将氯化钴溶液分别倒入2、3、4号吸收池中，按START键开始测量，记录读数。,具体步骤：,按SHIFT/RETURN键，从读数界面切换至测量界面。具,计算线性误差公式：,计算线性误差公式：,4、透光度重现性检定： 以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶液（6mg/ml）
8、510nm的透 光度（英文缩写T），重复7次，记录读数。,技术指标：T 0.15,4、透光度重现性检定：技术指标：T 0.15,以蒸馏水为参比，测定50g/LNaNO2 360nm处的透光度，即为仪器在此波长处的杂散辐射率,技术指标： 杂散辐射率0.1,5、杂散辐射率：,以蒸馏水为参比，测定50g/LNaNO2 360n,在同一工作条件下，同一光径吸收池分别注入蒸馏水，测定各吸收池在700nm处的透光度。凡透光度值之差不大于5%的吸收池可以配套使用,6、吸收池的配套性检定：,在同一工作条件下，同一光径吸收池分别注入蒸馏水，测定,（2）光电流稳定度（100% ）：调节透光度为透光度为 100时，观察3min，记录读数。示值的最大漂移 量，即为光电流稳定度 100%： 0.5% /3min,7、稳定度检测,（1）零点（0%）稳定度：吸光度为0，观察3min， 记录读数。示值的最大漂移量，即为零点稳定度 0% ： 0.3% /3min,（2）光电流稳定度（100% ）：调节透光度为透光度为7、,思考题： 1.了解吸收光谱 2.Lambert_Beer定律的适用条件和影响因素,思考题：,预习实验二 原子吸收分光光度法测定发中锌含量 预习重点：1、湿法消化 2、标准曲线,预习,
