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1、,抗原抗体反应及应用,傅慧 2018年2月,2,一、抗原抗体反应的基本原理二、抗原抗体反应的类型三、免疫标记技术的应用,内容,3,一、抗原抗体反应的基本原理,4,抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。,抗原抗体反应,Ag,Ab,（ ）,（ ）,如同钥匙和锁的关系,5,这种反应既可在机体内进行，也可以在机体外进行。,体内体液免疫反应,1.中和作用: 中和毒素等2.溶菌、杀菌、促进吞噬3.免疫损伤: 抗体与组织或细胞反应,沉淀（Precipitation）凝集（Agglutination）细胞溶解（cell lysis）补体结合（Complement fixation）,体外,抗体存在于
2、血清中,常用血清作试验,因此又名血清学反应,6,6,6,抗原抗体反应的原理1、抗原抗体结合力（4种）2、抗原抗体亲和力和亲合力3、亲水胶体转化疏水胶体,抗原抗体反应的原理,电荷引力（静电引力） 范德华引力 氢键结合力 疏水作用力,7,1、抗原抗体结合力 -静电引力（electrostatic forces）,静电引力或库仑引力（Cou-lombic forces）是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基（NH3+）与羧基基团（COO-）间相互吸引的能力，之间的引力，距离越近引力越大。,8,1、抗原抗体结合力 -范德华引力（Van der Waals forces）,分子间（或原子间)相互接近，分子极化
3、产生引力，其作用取决于分子空间构型，如：凹槽与凸起互补，抗原与抗体，酶与底物。能量小于静电引力。,9,1、抗原抗体结合力 -氢键结合力（hydrogen bond ）,是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较强于范德华引力 ，能量大于范德华引力。,10,1、抗原抗体结合力 -疏水作用力（hydrophobic interactions）,水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。作用力最强，占总结合力的50。,11,静电引力：异性相吸（electrostatic forces），离子键（Ionic bond）范德华引力: 作用最小（van der Waals
4、 interactions）氢键: 最具特异性（hydrogen bond ）疏水作用力: 作用最大 （hydrophobic interactions）,疏水作用力氢键结合力静电引力范德华引力,1、抗原抗体结合力,12,2、抗原抗体亲和力和亲合力,是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间相适应而存在着的引力，是抗原抗体间固有的结合力。,亲和力（affinity),13,亲和力是指反应系统中复杂抗原与相应抗体之间的结合能力。与抗体结合价、抗体的亲和性、抗原有效表位数目等相关。,亲合力(avidity),2、抗原抗体亲和力和亲合力,3、亲水胶体转化为疏水胶体,抗体和大多数抗原同属蛋白质
5、。在通常的血清学反应条件下均带有负电荷，使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体，因此蛋白质不会自行凝集出现沉淀。当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化层变薄;而且由于抗原抗体复合物形成后，与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏水胶体。此时在电解质(如NaCl，的作用下，使各疏水胶体之间进一步靠拢、沉淀，形成可见的抗原抗体复合物。,14,可见反应 (沉淀),抗原抗体复合物 (疏水胶体),电解质,抗原(亲水胶体),抗体(亲水胶体),+,15,二、抗原抗体反应的类型,16,抗原抗体反应的类型,或,17,抗原抗体反应的类型,18,抗原抗体反应的类型,19,三、免疫标记技术的应用,20,免疫标
6、记技术的应用,免疫标记技术是用荧光素、放射性同位素、酶等标记抗体或抗原等所进行的抗原抗体反应。,特点：敏感度高 特异性强 快速 容易观察 能进行定性、定量、定位检测等,21,1、荧光免疫技术,将结合有荧光素的荧光抗体进行抗原抗体反应的技术。 常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（FITC)和罗丹明（RB200)等。它们可与抗体球蛋白中赖氨酸的氨基结合，在蓝紫光激发下，可分别出现鲜明的黄绿色及玫瑰红色。,22,自身抗体检测,抗核抗体 (均质型),抗核抗体 (核膜型),抗核抗体 (斑点型),欧蒙,荧光免疫技术的应用,23,荧光免疫技术的应用,病原体检测,呼吸道合胞病毒,流感病毒A/B型,副流感病毒,免疫病
7、理检测,细胞表面抗原和受体检测,特殊应用：流式细胞分析,24,2、放射免疫技术及其应用,用放射性同位素标记技术来检测抗原抗体反应的高灵敏度方法。反应特点：灵敏，精确；不稳定 ；安全性差,标记Ag或Ab,标记物纯化,抗原抗体反应,抗原抗体复合物沉淀,测定其放射活性,现临床实验室应用较少,广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域中各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析等,25,3、酶免疫技术,将待测抗原或抗体吸附于固相表面（聚苯乙烯微量反应板），与酶标记的抗体或抗原反应后，加入底物反应（显色或发光）的分析方法。,26,方法,（1）直接法（可检测抗原或抗体）：,27,（2）间接法（有两种抗体参与，一抗做反应桥梁）,1Ab,2Ab酶,一抗,二抗,28,（3）夹心法（不同抗体将抗原夹在中间反应）, 直接夹心法, 间接夹心法,29,酶联免疫吸附实验夹心法,30,ELISA 应用的范围很广，而且正在不断地扩大。临床实验室主要应用于：1、传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗体、乙肝三对、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等；2、细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等；3、也用于一些蛋白质的检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）,3、酶免疫技术的应用,Thanks 谢谢聆听,
