《梅毒实验室检测汇总课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《梅毒实验室检测汇总课件.ppt（61页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、梅毒的实验室诊断,病原体,?,为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白密螺,旋体苍白亚种,(Treponema pallidum,subspecies pallidum),苍白亚种,梅毒,苍白螺旋体,地方亚种,地方性梅毒,极细亚种,雅司病,密螺旋体属,品他螺旋体,品他病,梅毒螺旋体的生物学特性,1,、直径,0.100.15m,，有,814,个致密而规则的,小螺旋，两端尖直。,2,、原生质圆柱体上紧绕着,34,根周浆鞭毛，故运,动活跃，运动方式多样。,3,、,G-,，但不易着色。,Fantana,镀银染色呈棕褐色。,4,、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。,5,、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感
2、；对青霉,素、四环素、红霉素等抗生素敏感。在干燥条件下不易,生存。肥皂水和一般消毒剂以及加温,42,以上均极易将其,杀灭。,梅毒螺旋体,传播途径,?,性接触是主要的传染途径,?,未经治疗的患者在感染后的,1,年内最具有传染性,?,随着病期的延长，传染性越来越小,?,到感染后,2,年，通过性接触一般无传染性,?,母婴传播,?,在妊娠,7,周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗,者，虽已无性传播（病期,2,年），但妊娠时仍可传染给,胎儿,?,病期越长，传染性越小,;,?,输血传染,?,间接传播：日常用品、接吻、哺乳、医疗器械等途径（接,触部位附有梅毒螺旋体）,。,梅毒的分期,梅毒的诊断,?,梅毒
3、的诊断,?,早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期,梅毒（三期和晚期隐性梅毒）,?,必须依靠病史、症状及实验检查进行综合分析,?,梅毒的实验室检查,?,结果对诊断有决定性意义,常用梅毒实验室检测方法,?,病原学检测,?,血清学检测,病原学检查,?,取材方法,?,一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平,湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋,巴结穿刺术得到的组织液,?,暗视野显微镜、镀银染色法和直接,荧光法,?,在暗视野显微镜下，光线从聚光器的,边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发,出亮光，从而可根据其特殊形态和运,动方式进行检测。,白色发光，螺旋整,齐，运动规律（旋转、伸缩或蛇行运,动）,病原学检查的临床
4、意义,?,病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床,可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的,特点。,?,螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，,对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽,早切断传染源都有十分重要的意义。,?,如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的,可能性。,梅毒血清学检测方法,梅毒血清学检测分类,1.,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,（非特异性梅毒抗体）,2.,梅毒螺旋体抗原血清学试验,（特异性梅毒抗体）,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,?,原理,（抗心磷脂抗体）：,?,人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的,一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激,机体产生类脂质抗体
5、（反应素）。,?,主要是,IgM,和,IgG,混合抗体。,?,抗体产生时间,?,感染,3,周,-4,周，硬下疳出现,1,周,-2,周,?,一般在感染后,5,7,周（或硬下疳出现后,2,3,周）产生。,?,抗体作用,?,无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长,期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。,原理和方法,?,反应原理,?,抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉,眼所见,?,抗原基本成分,?,心磷脂、卵磷脂和胆固醇,?,方法包括：,?,快速血浆反应素环状卡片试验,(RPR),?,不加热血清反应素,(USR),?,甲苯胺红不加热血清试验（,TRUST,
6、）,?,性病研究实验室试验,(VDRL),等。,四种非特异性试验方法比较,VDRL,抗原成分,心磷脂、卵磷,脂、,胆固醇,不稳定,1,天,需灭活,玻片，肉眼或,显微镜,唯一用于检查脑,脊液的试验，诊,断神经梅毒,USR,同前,+EDTA+,氯,化胆碱,RPR,同前,+EDTA+,氯,化胆碱,+,活性,炭,TRUST,同前,+EDTA+,氯化胆碱,+,甲苯胺红,抗原稳定性,血清试验前处理,稳定4 8 ,稳定4 8 ,稳定4 8 ,保存,12,个月,保存,12,个月,保存,12,个月,不需灭活,玻片，肉眼或,显微镜,不需灭活,不需灭活,反应板及结果,判断,注释,纸卡片，肉眼,纸卡片，肉眼,结果容易
7、判断,结果容易判断,一期敏感性,（未经治疗）,二期敏感性,（未经治疗）,晚期敏感性,（未经治疗）,74%-87%,100%,77%-88%,100%,77%-99%,100%,77%-99%,100%,98%,99%,98%,99%,RPR/TRUST,检测流程,?,试验前期准备,?,RPR,仪,(,水平旋转仪器,),必须滴！,?,试剂,?,50l,移液器、吸头,?,记号笔、废物缸,?,工作服,?,一次性手套、口罩、帽子,?,生物安全柜,梅毒自动旋转仪,测速,:100,转,/MIN,（,2,转）,检测流程（定性）,加样：,?,吸取,50l,血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地,涂布在整个圈内。,将
8、抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加,1,滴抗,原。,将卡片置梅毒自动旋转仪,8,分钟立即在亮光下观,察结果。,加抗原,：,?,反应,：,?,检测流程（定量）,稀释液准备：,?,在圈内加入,50l,生理盐水（根据需要确定稀释,度），勿将盐水涂开。,吸取,50l,血清,(,浆,),与各圈中盐水作系列稀释，并,涂布满整个圈内。,加样,：,?,重复定性试验后两步。,凝集反应强度分级：,3+,4+,：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液,体清亮。,2+,：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较,清亮。,1+,：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。,：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分,散。,RPR,定量试验
9、,?,中等至大的凝块为阳性（圈,4,和,7,）有明确但,很小的凝块为弱阳性（圈,2,和,3,）颗粒均匀分,布（圈,1,5,8-10,）或稍粗糙（圈,6,）为阴性,临床意义,?,早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后,3,个月，,VDRL,试验抗体滴度下降,2,个稀释度，,6,个月,下降,4,个稀释度。,?,一期梅毒,1,年后转为阴性,?,二期梅毒,2,年后转为阴性。,?,晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，,2,年后约,50%,病人血,清反应仍为阳性,?,早期梅毒硬下疳出现,1,周,-2,周后，血清可呈阳性。,?,经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观,察、判愈、复发或再感染的指征。,
10、假阳性问题,?,假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性,技术性假阳性,?,由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试,剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。,生物学假阳性,?,是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使,梅毒血清试验出现阳性,急性生物学假阳性反应的疾病,?,风疹,?,水痘,?,传染性单核细胞增多症,?,传染性肝炎,?,上呼吸道感染,?,肺炎球菌性肺炎,?,病毒性肺炎,?,牛痘疹,慢性生物学假阳性反应的疾病,?,系统性红斑狼疮,?,自身免疫性溶血性贫血,?,盘状红斑狼疮,?,风湿性心脏病,?,干燥综合征,?,毒品瘾者,?,结节性多动脉炎,?,类风湿性关节炎,?,桥本氏甲状腺炎,?,
11、慢性肾炎,?,肝硬化,?,老年,?,麻风,(,是唯一产生慢,性生物学假阳性的感染,性,疾病,),妊娠的假阳性反应,这是一种生理情况下的生物学假阳性,假阳性发生率较低有报告为,0.4%,，滴度低。,假阳性问题,?,梅毒假阳性反应的处理,?,技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假,阳性反应，经过重复试验即可除外。,?,对急性生物学假阳性反应，应做,TPHA,（,TPPA,）,等试验进行排除。,前带现象,?,原理,?,指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，,有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、,不典型或阴性反应的结果。,?,处理,?,将血清稀释后再进行试验。,血清固定,?,耐血清性（血
12、清固定）,?,指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验,在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗,量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系,统梅毒等因素有关。,梅毒螺旋体抗原血清学试验,试验原理,?,检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗,原的抗体（,IgG,和,IgM,）。,?,特异性,IgM,型抗梅毒螺旋体抗体，感染,2,周后,即可测出。,实验方法,?,梅毒螺旋体颗粒凝集试验,(TPPA),?,梅毒螺旋体血球凝集试验,(TPHA),?,梅毒酶联免疫吸附试验（,TP-ELISA,）,?,梅毒免疫层析法,-,梅毒快速检测,(RT),?,荧光螺旋体抗体吸收试验（,FTA-ABS,）,?,化
13、学发光免疫分析法（,CLIA,）,?,梅毒螺旋体蛋白印迹试验（,WB,）,TPPA/TPHA,原理,?,TPPA,试验原理与,TPHA,试验基本相同,?,TPPA,试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒,?,TPHA,试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞,?,特点,?,梅毒螺旋体,(Nichols,株,),全抗原,操作步骤,1.,试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。,2.,加稀释液：每份样本做,4,孔，加标本稀释液加至微量反应板,孔内，第,1,孔,100,微升，第,2,4,孔各,25,微升。,3.,样本稀释：取血清,25,微升加至第,1,孔，混匀后取,25,微升至第,2,孔，混匀后取,25,微升至第,3
14、,孔，混匀后取,25,微升至第,4,孔，,混匀后弃去,25,微升。,4.,加对照液：第,3,孔加未致敏颗粒,25,微升，第,4,孔加致敏颗粒,25,微升。,5.,混合：将反应板置振荡器振荡,30,秒。,6.,反应：置有盖湿盒，孵育,2 h,，或放,4,冰箱过夜观察结果。,结果判断,?,1.,观察加未致敏颗粒的第,3,孔，不出现凝集为,有效试验。,?,2.,观察凝集反应强度：分级如下。,4+,：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。,3+,：,颗粒光滑覆盖大部分孔底。,2+,：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。,1+,：,颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒,环。,：颗粒沉集孔底，中央形成
15、一小点。,一：颗粒紧密沉积孔底中央。,荧光螺旋体抗体吸收试验,（,FTA-ABS,）,?,原理,?,将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸,收剂（用,Reiter,螺旋体制备而成）吸收过的梅毒,患者血清形成抗原抗体复合物，再加入异硫氰酸,荧光素（,FTIC,）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅,毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。,在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，,即为阳性反应。,?,曾经认为,FTA-ABS,试验是检测梅毒的“金标,准”试验。,TP-ELISA,?,原理,?,用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒,血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合,物与酶标记物结
16、合，用酶联检测仪判定试验阳性,反应。,?,特点,?,本法可用于大规模血清检测。,免疫层析,临床应用,?,梅毒螺旋体试验的作用是作为证实试验,?,它们可以帮助确定非梅毒螺旋体试验阳性反,应是真阳性还是假阳性。,?,一旦这些试验呈阳性，则患者终身阳性。,方法特点,?,特异性强，敏感性高,?,很少出现假阳性。据统计，在普通人群中，,有,1%,的生物学假阳性发生。,如系统性红斑狼疮患者血清可使,FTA-ABS,试验,呈假阳性反应，但大多数病例中螺旋体呈串株状,荧光。,传染性单核细胞增多症，可能由于嗜异性抗体所,致，可使,TPHA,呈假阳性。,麻风患者也可使特异试验呈阳性。,临床意义,?,作为,RPR,
17、初筛阳性标本的确证试验。,?,不能作为疗效观察的指标。,?,阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合,RPR,结果进行诊断。,假阳性问题,?,存在交叉反应的抗体,?,处理方法：用,Reiter,株吸收血清中交叉反应的,抗体。,老年人抗体阳性的问题,?,1,、真阳性,?,2,、假阳性：这些老年患者所患的基础疾病,可能使机体释放诱导产生抗类脂抗体和,/,或抗,T.pallidum,抗体的交叉抗原；,梅毒血清学试验结果解释,梅毒血清学试验结果的临床意义,RPR,TRUST,阴性,阳性,阳性,阴性,TPPA,TP-ELISA,阴性,阳性,阴性,阳性,临床意义,排除梅毒,（一期梅毒的早早期）,现症梅毒,(
18、,梅毒孕妇所生的婴儿除外,),生物学假阳性,早期梅毒经治疗后,（早期梅毒）,RPR,结果解释示意图,治疗前,早,期,一期,二期,早期潜伏,晚,期,晚期潜伏,三期,阳性,阴性,治疗后,TPPA,结果解释示意图,治疗前,早,期,一期,二期,早期潜伏,晚,期,晚期潜伏,三期,治疗后,阳性,阴性,梅毒血清学试验适用范围,检,测,方,法,样,品,种,类,血清,血浆,末梢血,脑脊液,非梅毒螺旋体试验,快速血浆反应素环状卡片试验,(RPR),?,?,甲苯胺红不加热血清试验（,TRUST,）,?,?,性病研究实验室试验,(VDRL),?,?,梅毒螺旋体试验,梅毒螺旋体颗粒凝集试验,(TPPA),?,梅毒螺旋体
19、血球凝集试验,(TPHA),?,梅毒酶联免疫吸附试验（,TP-ELISA,）,?,梅毒免疫层析法,-,梅毒快速检测,(TP-RT),?,化学发光免疫测定试验（,CLIA,）,?,?,?,?,?,?,荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（,FTA-ABS,）,?,?,?,?,?,梅毒,IgM,抗体检测（,TP-IgM,）,?,?,梅毒螺旋体蛋白印迹试验（,TP-WB,）,?,?,?,梅毒检测策略与流程,对这些实验指标的临床应用中常会出,现以下情况：,?,1,）单独用筛查试验（如：,RPR,试验、,TRUST,试验等非密螺旋体抗体试验）进行梅,毒的诊断。,?,2,）认为筛查试验不好，没有临床应用价值，,就在
20、临床实践中丢弃它。,?,3,）只做确诊试验（密螺旋体抗体试验：,TPPA,TPHA,，,TP- ELISA,等），阳性一定就,是梅毒现症感染。,?,策略一,?,采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行,初筛,?,策略二,?,采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进行初,筛,?,非梅毒螺旋体抗原血清试验：,RPR,、,TRUST,、,VDRL,?,梅毒螺旋体抗原血清试验：,TPPA,、,TPHA,、,TP-ELISA,、,RT,、,FTA-ABS,、,CLIA,、梅毒,IgM,抗体检测、,WB,以临床诊断为目的检测策略一,非梅毒螺旋体试验（具体方法）,阳性,阴性,报告检测方法及阴,性结果
21、,非,梅毒螺旋,体定量试,验,报告检测,方法及定,量结果,报告检测,方法及阳,性结果,梅毒螺旋,体试验,（具,体方法）,阳性,报告检测方法及阳,性结果,阴性,报告检测方法及阴,性结果,以临床诊断为目的检测策略二,梅毒螺旋体试验（具体方法）,阳性,报告检测,方法及阳,性结果,非梅毒螺旋,体试验（具,体方法）,阴性,报告检测方法及,阴性结果,阳性,报告检测,方法及阳,性结果,非梅毒螺旋体定,量试验,报告检测方法及,定量结果,阴性,报告检测方法及,阴性结果,梅毒实验室检测策略思考,策略一和策略二比较,小结,?,根据目的选择检测方法及检测策略。可采用,任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。,?,策略一,?,采用任何一种非梅毒螺旋体抗原血清试验对样品,进行初筛,?,策略二,?,采用任何一种梅毒螺旋体抗原血清试验对样品进,行初筛,
