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1、大肠杆菌和沙门氏菌,大肠杆菌和沙门氏菌,实验原理,各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，生化试验是极其常用的一种方法。,大肠杆菌和沙门氏菌,2,实验原理各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差,一、目的要求,学习常用的生化实验方法；掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。,大肠杆菌和沙门氏菌,3,一、目的要求学习常用的生化实验方法；大肠杆菌和沙门氏菌3,个体为杆状,散在或成对,G,二、背景知识介绍,大肠杆菌,中等大小0.4-0.72-3m,大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；
2、与广泛的兽医临床病征有关，如：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；狗的尿道感染；鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、 气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等。,大肠杆菌和沙门氏菌,4,个体为杆状散在或成对G二、背景知识介绍大肠杆菌中等大小大肠,大肠杆菌和沙门氏菌,5,大肠杆菌和沙门氏菌5,大肠杆菌和沙门氏菌,6,大肠杆菌和沙门氏菌6,个体为杆状,散在或成对,G,沙门氏菌,是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，G，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；人类食物中毒的主要病原之
3、一。,大肠杆菌和沙门氏菌,7,个体为杆状散在或成对G沙门氏菌是一大群寄生于人和动物肠道内,大肠杆菌和沙门氏菌,8,大肠杆菌和沙门氏菌8,伤寒沙门氏菌,鼠伤寒沙门氏菌,除雏沙门和鸡沙门氏菌外， 其余各菌具有周生鞭毛。,大肠杆菌和沙门氏菌,9,伤寒沙门氏菌 鼠伤寒沙门氏菌 除雏沙门和鸡沙门氏菌外， 其余,三、实验材料,常规接种工具：接种棒、酒精灯等革兰氏染色液、玻片、滴管 等菌种:大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。培养基：三糖铁斜面（1支/人）生化管：葡
4、、乳、麦、甘、蔗、H2S 、尿、枸（1套/人）试剂：吲哚试剂、M.R试剂、V-P试剂 等,大肠杆菌和沙门氏菌,10,三、实验材料常规接种工具：接种棒、酒精灯等大肠杆菌和沙门氏菌,大肠杆菌和沙门氏菌培训课件,三糖铁琼脂接种,挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；置 37培养。,大肠杆菌和沙门氏菌,12,三糖铁琼脂接种挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；,生化管接种培养,糖发酵试验：葡 乳 麦 甘 蔗 H2S试验；尿素酶试验；枸橼酸盐利用试验。,葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸,大肠杆菌和沙门氏菌,13,生化管接种培养糖发酵试验：葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸,葡 乳 麦
5、甘 蔗 H2S 尿 枸,大肠杆菌,沙门氏菌,大肠杆菌,沙门氏菌,置 37培养,大肠杆菌和沙门氏菌,14,葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸大肠杆菌沙门氏菌大肠杆菌沙,吲哚试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置37培养3-5d；静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂1mL；上层变为红色者为阳性反应。,乙醚,混匀,分层,吲哚试剂,大肠杆菌和沙门氏菌,15,吲哚试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中，置,吲哚试验原理,蛋白质中的色氨酸,玫瑰吲哚,红色,先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。,大肠杆菌和沙门氏菌,16,吲哚试验原理蛋白质中的色氨酸有些细菌如大肠埃希氏菌吲哚对位二
6、,M.R试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37培养3-5d）；于培养物中加入几滴试剂；变红色者为阳性反应， 桔红到黄色则为阴性。,M.R试剂,大肠杆菌和沙门氏菌,17,M.R试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置,V-P试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37培养3-5d）；于培养物中加入0.5mL V-P甲液；随后加V-P乙液0.5mL，轻摇；静置10-15min。15min内变红者为阳性。,V-P甲液,V-P乙液,大肠杆菌和沙门氏菌,18,V-P试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置,M.R与V-P试验原理,M.R试
7、验：甲基红是一种pH指示剂：当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。,H 4.4 - 6.2 红 黄,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,2,3-丁二烯醇,某些细菌能发酵,二乙酰,碱,V-P试验：,+,胨中的胍基化合物,注意：通常M.R和V-P试验是密切相关：如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。,粉红色化合物,+,大肠杆菌和沙门氏菌,19,M.R与V-P试验原理M.R试验：pH 4.4 - 6.2葡,M.R试剂,V-P试剂,甲基红 0.02g95酒精 60mL蒸馏水 40mL,甲液：萘酚酒精溶液 （萘酚5g无水乙醇100mL）乙液：KOH溶液 （KOH
8、40g，水100ml）,将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10保存。,大肠杆菌和沙门氏菌,20,M.R试剂V-P试剂甲基红,五、结果观察,大肠杆菌的生长表现,普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约23mm；麦康凯：琼脂上形成红色菌落较大的菌落。,大肠杆菌和沙门氏菌,21,五、结果观察大肠杆菌的生长表现普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润,三糖铁琼脂,反应模式表示：,大肠杆菌和沙门氏菌,22,三糖铁琼脂斜面产酸（黄色）底部产酸（黄色）产气H2S反应,沙门氏菌的生长表现,普通琼脂：生长不良；麦康凯：琼脂上形成灰白色菌落。,大肠杆菌和沙门氏菌,23,沙门氏菌的生长表现普通琼脂：生长不良；
9、大肠杆菌和沙门氏菌23,三糖铁琼脂,反应模式表示：,大肠杆菌和沙门氏菌,24,三糖铁琼脂斜面产碱（红色）底部产酸（黄色）产气H2S 反,细菌的染色、镜检,大肠杆菌,沙门氏菌,G直杆菌，大小0.4-0.72-3m，无芽胞，两端钝圆，散在或成对。,大肠杆菌和沙门氏菌,25,细菌的染色、镜检大肠杆菌沙门氏菌G直杆菌，大小0.4-0.,生化管接种培养,葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸,葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸,大肠杆菌,沙门氏菌, /- , ,大肠杆菌和沙门氏菌,26,生化管接种培养葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸葡 乳 麦,吲哚、M.R、V-P试验结果,大肠杆菌,沙门氏菌,吲哚试验,M.R试验,V-P试验,吲哚试验,M.R试验,V-P试验,大肠杆菌和沙门氏菌,27,吲哚、M.R、V-P试验结果大肠杆菌沙门氏菌吲哚试验M.R试,六、思考题,革兰氏染色特性与形态特点？在麦康凯平板上的生长表现？在三糖铁琼脂上的生长表现？常规糖发酵情况？IMViC试验结果？,大肠杆菌与沙门氏菌：,大肠杆菌和沙门氏菌,28,六、思考题革兰氏染色特性与形态特点？大肠杆菌与沙门氏菌：大肠,
