抑菌试验方法总结+++ppt课件.pptx

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1、抑菌试验方法总结,实验内容,实验一 影响药物作用的因素实验二 药物代谢动力学实验实验三 处方与药物的配伍禁忌实验四 中毒与解救试验实验五 药物对离体肠的影响实验六 抗微生物药物的体外抑菌实验实验七 生物碱的提取及其药敏实验实验八 药物对离体心脏的影响,实验六、抗菌药物的体外抑菌实验,【实验目的】 掌握药敏试验的方法,了解药物对常见菌的作用。意义:体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。鉴定新药是否具有抗菌活性。,下一张,主 页,退 出,上一张,耐 药 性,抗 菌 作 用,防治作用与不良反应,药 动 学 过 程,抗 病 力,致 病 力,【实验原理】,下一张,主 页,退 出,上一张,【基本原理】 抗菌

2、活性:是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物的能力。两种测定方法:体外与体内(化学治疗实验);评价指标: (1)最低抑菌浓度(MIC): 能够抑制培养基中细菌生长的最低浓度。 (2)最低杀菌浓度(MBC): 能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。,下一张,主 页,退 出,上一张,【试剂与器材】 细菌菌液(如金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌)、药液(青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素)、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、平皿等。 256/ml青霉素溶液: 药敏试纸的准备:,下一张,主 页,退 出,上一张,【实验步骤】一、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液

3、(每ml约含3亿个细菌),注意不宜蘸取过多,以刚浸湿整个棉签为度,轻轻地从四个不同方向平行交叉划线,使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方法,也可制作大肠杆菌平板备用。,下一张,主 页,退 出,上一张,二、纸片法 取已经制备好的4种药敏片:青霉素16万u/ml 、链霉素10万u/ml 、10%磺氨嘧啶钠、四环素0.05g / ml ,放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区域。为了位置间隔准确,最好事先在平皿底用蜡笔作上记号。 将培养皿置37培养24h,观察纸片周围有无抑菌环,并测量抑菌圈的直径,比较各药的抗菌效力。样例如下图:,下一张,主 页,退 出,上一张,下一张,主 页,退 出,上一张,下

4、一张,主 页,退 出,上一张,实验结果记录:抑菌直径(mm),下一张,主 页,退 出,上一张,药物,沙门氏杆菌,二、试管二倍稀释法 取灭菌小试管10支,按照1至10编号,排列于试管架上。按照无菌操作,从第一管到第10管,分别加入牛肉膏汤1ml。用吸管吸取256/ml的青霉素溶液1ml放入第一管,并反复吹匀;接着从第一管吸出1ml放入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管,依次逐管进行稀释到第管,第10管不加青霉素液,作细菌对照组,第管只加药物,不加菌液,作为药物对照组。,下一张,主 页,退 出,上一张,0.5,0,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,葡萄球菌液(ml)

5、,0,弃1,1,1,1,1,1,1,1,1,青霉素(ml),1,1,1,1,1,1,1,1,1,1,牛肉膏汤(ml),10,9,8,7,6,5,4,3,2,1,试管号,下一张,主 页,退 出,上一张,1-8,10各加入培养18 h并用牛肉膏汤稀释至5107108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37培养箱内培养24h后,取出观察细菌生长情况。以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌的最低抑制浓度(MIC)。最低杀菌浓度(MBC)结果记录于下表:,下一张,主 页,退 出,上一张,记录实验结果,下一张,主 页,退 出,上一张,【注意事项】1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹;用过的棉签火焰烧灼后丢弃。2. 用试管二倍稀释法测MIC值,稀释时注意 稀释的顺序;每次移液前注意清洗吸管。 3. 药敏片之间要间隔适当距离,以免抑菌圈 出现交叉。4. 四人一组,纸片法每人一个平皿,作四种药物对一种菌的作用,同组每人所接菌种不同,平皿上做好记号。结果记录时将本组结果综合。,下一张,主 页,退 出,上一张,【思考题】 分别以抑菌圈的大小和MIC值来比较常见药物对金黄色葡萄球菌的作用强度。,下一张,主 页,退 出,上一张,Careful ,then successful !,

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