第二讲生物传感器ppt课件.ppt

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1、Advanced analytical technology,Chapter 生物传感器 (Biosensors),1.1 Generalization (概述) 1.2 Principle (基本原理) 1.3 Classification(分类) 1.4 Application(应用),主 讲: 何海波 博士 讲师(上海大学理学院化学系),传 感 器 是 什 么?,1.1 概 述,人体中的传感器: 耳朵、眼睛、手指、鼻子和舌头 ,嗅觉膜,神经细胞,大脑,神经纤维,BIOSENSORS,鼻子类似于传感器,敏感元件,传送器,信号处理器,实验室中的传感器: 石蕊试纸 - 显色反应 pH试纸 -

2、混合指示剂 pH 计 - 电化学装置,传感器是什么?,BIOSENSORS,1.1 概述,传感器:能感受(或响应)一种信息并变换成可测量信号(一般指电信号)的装置。生物传感器:将生物体的成份(酶、抗原、抗体、激素)或生物体本身(细胞、细胞器、组织)固定化在一器件上作为敏感元件的传感器称为生物传感器。, 定义,BIOSENSORS, 生物传感器的基本组成,敏感膜(分子识别原件)、换能器(传送和转换)和 信号处理器,BIOSENSORS, 生物传感器的优点,测定范围广泛; 样品一般无需预处理,被测组分的分离和检测同时完成,且测定时不需加入其它试剂;采用固定化生物活性物质作敏感基元(催化剂),价值昂

3、贵的试剂可以重复多次使用;分析成本远低于大型分析仪器,便于推广普及;,可进入生物体内实现活体检测; 测定过程简单迅速; 准确度和灵敏度高,一般相 对误差不超过1; 体积小,便于野外连续自动 监测; 专一性强,只对特定的底物 起反应,而且不受颜色、浊 度的影响。,BIOSENSORS,第一代生物传感器: 1962年,Clark和 Lyon报道了用葡萄糖氧化酶与氧电极相结合检测葡萄糖的结果,可认为是最早提出了生物传感器(酶传感器)的原理。, 生物传感器的发展历程,BIOSENSORS,第一代生物传感器:,1967年Updike和 Hicks将葡萄糖氧化酶固定在氧电极表面,研制成功酶电极,被认为是世

4、界上第一个生物传感器,开创了生物传感器的历史。这类传感器抗干扰能力差,背景电流大,易受溶液中氧浓度变化影响。,BIOSENSORS,1977年,钤木周一等发表了关于对生化需氧量(BOD)进行快速测定的微生物传感器的报告 ,并在微生物传感器对发酵过程的控制等方面 ,作了详细报导 ,正式提出了对生物传感器的命名。,第一代生物传感器:,上市产品: 1979年,美国YSI公司(维赛仪器公司) ,血糖测试用酵素电极。 1988年,美国Medisense公司(1996年,雅培),电化学法血糖仪- ExactechPen ,袭卷70%以上的第一代产品市场,成为生物传感器业的盟主。目前全球每天有250万人使用

5、MediSense的血糖仪。,第一代生物传感器:,BIOSENSORS,雅培血糖仪(手握式),第二代生物传感器:, 生物传感器的发展历程,定义为使用抗体或受体蛋白当分子识别组件,换能器的选用则朝向更为多样化,诸如场效半导体(FET),光纤(FOS),压晶体管(PZ),表面声波器(SAW)等。 组织、微生物、免疫、酶免疫和细胞器等传感器。 上市产品:如瑞典Pharmacia公司推出的BIAcore与BIAlite两项产品(1991年)。,BIOSENSORS,第三代生物传感器:, 生物传感器的发展历程,最近,人们更关注酶与电极之间的直接电子传递研究,并用于构造第三代生物传感器; 将生物技术和集成

6、电路技术结合起来,研制成场效应生物传感器; 生物传感器和流动注射分析与电脑技术相结合; 定位在更具携带式,自动化,与实时测定功能。,BIOSENSORS, 国内外得到应用的生物传感器:,测定水质的BOD(biochemical oxygen demand)分析仪,在市场上有以日本和德国为代表产品供应,德国研发的环境废水BOD分析仪,BIOSENSORS,采用丝网印刷和微电子技术的手掌型血糖分析器,已形成规模化生产,年销售量约为10亿美元, 国内外得到应用的生物传感器:,手掌型葡萄糖(glucose)分析仪,BIOSENSORS,固定化酶传感分析仪,国外以美国的YSI公司和德国BST公司为代表,

7、都有系列分析仪产品,它们主要用于环境监测和食品分析,国内到目前为主只有山东省科学院生物研究所的系列化产品在市场得到应用。 SPR (surface plasma resonance)生物传感器,在日、美、德、瑞典等国得到了开发和初步应用。, 国内外得到应用的生物传感器:,BIOSENSORS, 生物传感器的发展方向,生物传感器是一个多学科交叉的高技术领域,伴随着生物科学、信息科学和材料科学等相关学科的高速发展,生物传感器的发展将会有以下新特点:,1. 功能更加全面,并向微型化发展 未来的生物传感器将进一步涉及医疗保健、食品检测、环境监测、发酵工业的各个领域。当前生物传感器研究中的重要内容之一就

8、是研究能代替生物视觉、听觉和触觉等感觉器官的生物传感器,即仿生传感器。而且随着微加工技术和纳米技术的进步,生物传感器将不断地微型化,使人们面前出现各种便携式生物传感器的。,2. 智能化程度更高 未来的生物传感器将会和计算机完美紧密的结合,能够自动采集数据、处理数据,可以更科学、更准确地提供结果,实现采样、进样、最终形成检测的自动化系统。同时, 芯片技术将越来越多地进入传感器领域,实现检测系统的集成化、一体化。,BIOSENSORS,1.2 生物传感器原理,无论是基于电化学、光学、热学或压电晶体等不同类型的生物传感器,其探头均由两个主要部分组成,一是感应器,它是由对被测定的物质(底物)具有高选择

9、性分子识别功能的膜构成。二是转换器,它能把膜上进行的生化反应中消耗或生成的化学物质,或产生的光、热等转变成电信号,最后把所得的电信号经过电子技术的处理后,在仪器上显示或记录下来。,BIOSENSORS,换能器(Transducer),感受器(Receptor),= 分析物(Analyte),溶液(Solution),选择性膜(Thin selective membrane),识别元件(Recognition),生物传感器工作机理,测量信号(Measurable Signal),BIOSENSORS,生物功能物质和分子识别: 分子识别过程是分子在特定的条件下通过分子间作用力的协同作用达到相互结合

10、的过程。“特定的条件”即是指分子要依靠预组织达到互补的状态,“分子间相互作用力”即是指存在于分子之间非共价相互作用,而“协同作用”则是强调了分子需要依靠大环效应或者螯合效应使得各种相互作用之间产生一致的效果。 具有识别能力的生物分子称为生物功能物质。 例如:葡萄糖氧化酶能从多种糖分子的混合溶液中,高选择性地识别出葡萄糖,并把它迅速地氧化为葡萄糖酸内酯。这种葡萄糖氧化酶即称为生物功能物质。,生物传感器原理,BIOSENSORS, 生物功能物质能够识别相应的生物分子,具有很高的选择性。犹如钥匙和锁的关系一样,一把钥匙只能打开一把锁。因此所制备的生物传感器具有很高的选择性,可以从不经前处理的样品中,

11、直接测定出欲测的物质。,生物功能物质和分子识别,偶氮染料,环糊精,BIOSENSORS,生物功能物质的固定化,将具有分子识别能力的生物功能物质,如酶、抗原、抗体等,包藏或吸附于某些高分子材料,生物高分子或无机材料,如分子筛内制备成感应器,称为生物功能物质的固定化。固定化技术的研究是生物传感器的研究和开发中最为重要的工作。,生物传感器原理,BIOSENSORS,生物功能物质的固定化方法,直接化学结合法: 将电极表面先经过化学处理或修饰,然后将生物功能物质以共价,离子或配位等方式结合固定于电极表面。,TiO2电极,BIOSENSORS, 架桥化固定法: 用多功能的试剂,如戊二醛与酶蛋白分子相互结合

12、,起着桥梁的作用,从而使酶固定于电极表面,是酶固定化用得比较多的方法。,生物功能物质的固定化方法,BIOSENSORS, 高分子载体包埋法: 将生物功能物质与合成高分子Nafion(全氟磺酸树脂) 或生物高分子丝素蛋白经溶剂混合而使酶包埋其中,制备成具有活性的感应膜,再把它覆盖到转换器即电极的表面,构成生物传感器。,生物功能物质的固定化方法,其中:m=1, 2或3; n=67; x1000,是一种由四氟乙烯与全氟-2-(磺酸乙氧基)丙基乙烯基醚的共聚物, Nafion为美国杜邦公司注册的商品名。,BIOSENSORS, 高分子膜吸附法: 先在电极表面上修饰一层合成高分子或生物高分子,然后将生物

13、功能物质吸附到高分子膜上,制备成感应器,再与转换器结合,构成传感器。 电聚合高分子包埋法: 将单体和生物功能物质同时混合于电解液内,通电使单体在电极表面电聚合成高分子,与此同时可以将酶包埋于高分子膜内,直接固定于电极表面,构成生物传感器。,生物功能物质的固定化方法,BIOSENSORS,生物功能物质的固定化方法,BIOSENSORS, 分子自组装固定法: 在单晶金电极表面,新修饰一层硫醇化合物,这是通过分子间的引力自组装构成的单分子层,然后在通过自组装方法将媒介体和酶一层层地修饰于电极上,构成传感器。, 无机材料吸附结合法: 利用无机材料如分子筛或氧化铝等的强烈的吸附性,以此作为载体,先将分子

14、筛用聚乙烯调制后固定于电极表面,然后使生物功能物质吸附固定于分子筛膜内,即可构成生物传感器。 碳糊固定法: 将酶用石蜡油等溶剂调匀,再加入石墨粉调制成糊状物,填充于玻璃管内制备成碳糊电极。,生物功能物质的固定化方法,BIOSENSORS,生物传感器原理,信号转换: 在感应器即具有生物功能活性的膜内发生的化学反应中,必然会消耗或产生一些化学物质,或者产生热和光等,这些变化都必须先转变成电信号,然后经过电子技术的处理之后才能从仪表上显示或记录下来。目前在生物传感器中研究最多的是电化学生物传感器,其转换器主要有电流型和电位型两类。,BIOSENSORS,大都是基于对于某种离子或气体具有选择性的电极。

15、pH键连:是最简单的电位型生物传感器,可用于任何当化学反应时有pH 变化的体系。制作传感器必须有合适的酶固定在pH电极上。,BIOSENSORS,电位型生物传感器,a) 青霉素:,青霉素(penicillin ),青霉噻唑盐,b)葡萄糖:,电位型生物传感器实例 - pH 键连,BIOSENSORS,葡萄糖氧化酶(glucose oxidase ),+ H2O2,+ O2,葡萄糖 (glucose ),葡萄糖酸(gluconic acid),C)尿素: 尿素酶固定在pH 电极上。 CO(NH2)2 + 2H2O 2NH4+ + CO32-,电位型生物传感器实例 - pH 键连,BIOSENSOR

16、S,尿素酶,2. 氨键连: 反应产物为氨的任何反应都可以用氨选择性电极来检测。a) 尿素:尿素酶固定在氨电极的聚丙烯膜上。b) 肌酸酐:肌酸酶固定在氨电极的聚丙烯膜上。,电位型生物传感器实例,肌酸(Creatine),肌酸酐(Creatinine),+ NH3,BIOSENSORS,c) 苯丙氨酸,电位型生物传感器实例 - 氨键连,BIOSENSORS,+ NH3,L-苯丙氨酸(phenylalanine),反式肉桂酸盐(trans-3-phenylacrylic acid ),苯丙氨酸胺裂解酶,d) 腺苷:,电位型生物传感器实例 - 氨 键连,腺苷(Adenosine),+ NH3,肌苷(I

17、nosine),腺嘌呤脱氧氨基酶,BIOSENSORS,3. 二氧化碳连:用二氧化碳选择性气体电极来测定溶液中析出的二氧化碳。尿素: CO(NH2)2 + 2H+ 2NH3 + CO2b) 草酸: C2H2O4 CO2 + HCOOH 地谷新(异羟基洋地黄毒苷原)将地谷新固定在聚苯乙烯珠上,样品地谷新与过氧化酶标记的抗体一起加入,然后络合过的过氧化酶与1,2,3-苯三酚和过氧化氢反应。H2O2 + 1,2,3-苯三酚 CO2,电位型生物传感器实例 - CO2 连,BIOSENSORS,草酸脱酸酶,过氧化酶,电位型生物传感器实例,4.碘选择性电极:葡萄糖:,BIOSENSORS,碘化物电极跟踪着

18、碘化物浓度的减小,而碘化物被过氧化氢所消耗。,b) 雌三醇:,电位型生物传感器实例 - 碘选择性电极,BIOSENSORS,E,(H2O2 , I-),E,碘化物电极,标记酶抗原+ 样品,加入基质,E/mV,反应机理,校正曲线,用脱酸酶或脱羧酶制备的传感器大多属于电流型生物传感器: 如尿素传感器,它的感应膜是含有脲酶的膜,而转换器是一平面pH玻璃电极。酶膜是紧贴在透氨或透二氧化碳膜上再覆盖在玻璃电极上,构成生物传感器。当尿素渗入感应器而遇到脲酶时,立即被分解为氨,这种新生的氨通过透氨膜到达pH电极的表面, 引起玻璃膜电位的变化,从而pH 上升的幅度,可以求出尿素的浓度。,小结: 电位型生物传感

19、器,BIOSENSORS, 抗原和抗体制备的免疫传感器属于电位型传感器: 将绒毛促性腺激素的抗体用化学结合法固定于经溴化氰处理过的二氧化钛电极的表面,构成生物传感器。原理是抗原和抗体本省都带有正电或负电荷,当抗原遇到抗体时,就立即发生结合反应,而是电性中和,从而引起电位的变化,指示抗原或抗体的浓度。,小结: 电位型生物传感器,电化学生物传感器中采用电流型电极为信号转换器的趋势日益增加,这是因为这类电极和电位型电极相比有以下优点: 电极输出直接和被测物浓度呈线性关系,不像电位型电极那样和被测物浓度的对数呈线性关系。 电极输出值的读数误差所对应的待测物浓度的相对误差比电位型电极的小。 电极的灵敏度

20、比电位型电极的高。,电流型生物传感器,BIOSENSORS,电流型生物传感器,第一种氧化反应模式:氧电极 有不少酶特别是各种氧化酶和加氧酶在催化底物反应时要用溶解氧为辅助试剂,反应中所消耗的氧量就用氧电极来测定。目前用得最多的氧电极是电解式的Clark氧电极,Clark氧电极是由铂阴极、Ag/AgCl阳极、KCl电解质和透气膜所构成。当将氧电极插入含有溶解氧的溶液后,溶液中的O2将扩散,透过透气膜到达铂阴极表面被还原,还原电流值与溶解氧的量有关。,BIOSENSORS,2. 第二种氧化反应模式:媒介体 为了替代氧,使用电子转移试剂作为氧化剂。此电子转移试剂是可逆的,有合适的氧化电位并且它的浓度

21、是可以控制的,为此一般采用过渡金属阳离子和它们的络合物,此类材料通常称为媒介体。许多媒介体都是基于铁离子或离子的络和物。最成功的媒介体是二茂铁。 Fe()+ e - Fe(),电流型生物传感器,BIOSENSORS,媒介体应具备的因素,应能与酶发生反应。显示出可逆(即快速)电子转移动力学。对再生应有低的超电压。与pH值无关。不管是氧化型还是还原型都是稳定的。与氧不发生反应。应是无毒的。,BIOSENSORS,利用包含氧化还原核心的酶,使它像电线那样连接到玻璃状碳电极,通过一种氧化还原聚合物在玻璃电极上进行原位聚合使酶固定在玻璃电极上。,电流型生物传感器,BIOSENSORS,3. 第三种模式:

22、直接偶联酶电极,胆固醇: 胆固醇通常作为酯存在于血液中,因此需要预先经过水解反应。胆固醇酯酶可以促使此水解过程的进行,胆固醇酯酶与氧化酶,胆固醇氧化酶相联合,以起到催化氧化作用使之成为胆甾烯酮。例如,利用氧,氧首先转变成为过氧化氢,然后后者再经过氧化酶和二茂铁偶联作为电极。,电流型生物传感器实例1,BIOSENSORS,应用氧(转变为H2O2)、过氧化酶和二茂铁分析胆固醇的生物传感器途径, 胆固醇酯酶 胆固醇脱氢酶,b) 乙醇 乙醇也是一种重要的分析质,应用生物传感器可以用来监测血液中醇的含量。例如,利用醇脱氢酶(ADH),经烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)和Fe()-Fe() 偶联到电极上。,

23、电流型生物传感器实例2,BIOSENSORS,利用醇脱氢酶(ADH)和烟酰胺嘌呤二核苷酸(NAD)、具有Fe()-Fe() 媒介体的生物传感器对乙醇分析的反应途径,NAD,NAD +,2.3 生物传感器的分类,根据生物传感器的输出信号方式分类 a生物亲合型传感器(Bioaffinity sensors) 被测物质与分子识别元件上的敏感物质具有生物亲合作用(bioaffinity binding) ,同时造成生物分子形状改变与/或引起诸如荷电、厚度、质量、热量或光学等物理量的变化。 反应式可表示为: S(底物)+R(受体) = SR,BIOSENSORS,b生物催化型感应器( (Biocatal

24、ytic biosensors) 底物(被测物)与分子识别元件上的敏感物质相作用并生成产物,信号转换器将底物的消耗或产物的增加转变为输出信号,这类传感器称为代谢型或催化型传感器,其反应形式可表示为: S(底物) R(受体) = SRP(生成物),2.3 生物传感器的分类,BIOSENSORS,(2) 根据生物传感器中分子识别元件上的敏感物质分类 生物传感器中分子识别元件上所用的敏感物质有酶、微生物、动植物组织、细胞器、抗原和抗体等。根据所用的敏感物质可将生物传感器分为酶传感器、微生物传感器、组织传感器、细胞器传感器、免疫传感器等。,2.3 生物传感器的分类,BIOSENSORS,(3)根据生物

25、传感器的信号转换器分类 生物传感器的信号转换器有:电化学电极、离子敏场效应晶体管、热敏电阻、光电转换器等据此又将生物传感器分为电化学生物传感器、半导体生物传感器、测热型生物传感器、测光型生传感器、测声型生物传感器等 以上后两种分类方法之间还可互相交叉,因而生物传感器的类别就更加增多,例如酶传感器又分为酶电极、酶热敏电阻、酶FET、酶光极等,2.3 生物传感器的分类,BIOSENSORS,2.3 生物传感器的分类,BIOSENSORS,酶传感器 (Enzyme Sensor) 利用酶在生化反应中特殊的催化作用,可使糖类,醇类,有机酸,氨基酸,激素,三磷酸腺苷等生物分子,在常温下迅速被分解或氧化。

26、反应过程中消耗或产生的化学物质即可转变成为电信号再记录下来。,几种主要的生物传感器,BIOSENSORS,酶传感器的结构,酶传感器 (Enzyme Sensor),BIOSENSORS,优点:酶易被分离,贮存较稳定,所以目前被广泛的应用。缺点:1.酶的特异性不高,如它不能区分结构上稍有差异的沙林与梭曼。 2.酶在测试的过程中因被消耗而需要不断的更换。,酶传感器的特点:,BIOSENSORS,The structure of sarin (GB) and soman (GD), 组织传感器 (Tissue Sensor),组织传感器是利用天然组织中酶的催化作用,其实也是一种酶传感器。因为酶都是从

27、动植物的器官、组织中提取出来的,经过纯化成为单一的酶。,几种主要的生物传感器,BIOSENSORS,组织传感器 (Tissue Sensor),BIOSENSORS,由于存在于天然动植物组织内的酶,得到其他生物分子的协同作用,因而十分稳定,制备成的传感器寿命也较长。另外,人工提取后纯化的酶,不仅价格异常昂贵,而且酶蛋白分子一旦离开了天然的生物环境,它的寿命也就大大缩短。到目前为止,只有少数如葡萄糖氧化酶等比较稳定,可以长期的在一定的低温下保存。因此,如用动植物组织代替酶,则取材容易,宜于推广应用。,组织传感器的特点:,BIOSENSORS,(a) 利用微生物在同化底物时消耗氧的呼吸作用。好氧性

28、微生物在繁殖时需要消耗大量的氧,因而可以从氧浓度的变化来观察微生物与底物的反应情况; (b) 利用不同的微生物含有不同的酶,把它作为酶源。,几种主要的生物传感器,BIOSENSORS, 微生物传感器 (Microorganism Sensor),定义:在有氧条件下,好氧微生物氧化分解单位体积水中有机物所消耗的游离氧的数量,单位为氧的毫克/升(O2,mg/L)。BOD是环境监测中一个非常重要的指标。通过用微生物代谢作用所消耗的溶解氧量来间接表示水体被有机物污染程度。BOD值愈大,水体的污染愈严重。常规方法测定一次BOD值需要5d, 而用BOD传感器测定一半只需15min.,微生物传感器,BIOS

29、ENSORS,生化需氧量(Biochemical Oxygen Demand , BOD):, 免疫传感器,几种主要的生物传感器,BIOSENSORS,利用抗体和抗原特异性的免疫反应而制成的传感器。抗体中有对抗原进行特殊识别、结合的部分,当免疫系统细胞在抗原中时,抗体和对应的抗原进行高度专一性的可逆结合,反应结果转换成其它信号输出。特点:由于抗原与抗体的结合具有很高的特异性,非特异性干扰较少,准确性较高,检测范围也很大。,离子敏场效应晶体管生物传感器 (Ion Sensitive Field-Effect Transistors Sensors):,几种主要的生物传感器,BIOSENSORS,

30、是将生物技术和晶体管工业结合的第三代生物传感器。场效应晶体管:是利用电场效应来控制输出电流大小的半导体器件。场效应管生物传感器主要由感受器和场效应管两部分构成,感受器是固定着具有分子识别功能的生物物质的敏感膜,而场效应管则起信号转换的作用。,离子敏场效应晶体管( ISFET)生物传感器,特点:(l)小型化,便于携带,易于使用,非专业人员也能操作。(2)响应快,可应用于微小区域,象生物细胞内成分的测定。(3)能同时完成多种成分测定。(4)能够直接连接在计算机的输入端。(5)输出阻抗低,可避免外界感应以及下级电路的干扰。,生物传感器在当前的主要应用领域,1.发酵工业:,因为发酵过程中常存在对酶的干

31、扰物质,并且发酵液往往不是清澈透明的,不适用于光谱等方法测定。而应用微生物传感器则极有可能消除干扰,并且不受发酵液混浊程度的限制。同时,由于发酵工业是大规模的生产,微生物传感器其成本低设备简单的特点使其具有极大的优势。所以具有成本低、设备简单、不受发酵液混浊程度的限制、能消除发酵过程中干扰物质的干扰的微生物传感器发酵工业中得到了广泛的应用。,生物传感在线分析系统,为发酵自动控制提供了新的基础平台。,发酵罐,主机,计算机,2.食品工业 生物传感器可以用来检测食品中营养成分和有害成分的含量、食品的新鲜程度等。如已经开发出来的酶电极型生物传感器可用来分析白酒、苹果汁、果酱和蜂蜜中的葡萄糖含量,从而衡

32、量水果的成熟度。采用亚硫酸盐氧化酶为敏感材料制成的电流型二氧化硫酶电极可用于测定食品中的亚硫酸含量。此外,也有用生物传感器测定色素和乳化剂的应用。,主要应用领域,BIOSENSORS,快速葡萄糖(glucose)分析仪,3.医学领域 生物传感器在医学领域也发挥着越来越大的作用:临床上用免疫传感器等生物传感器来检测体液中的各种化学成分,为医生的诊断提供依据;在军事医学中,对生物毒素的及时快速检测是防御生物武器的有效措施。生物传感器已应用于监测多种细菌、病毒及其毒素。生物传感器还可以用来测量乙酸、乳酸、乳糖、尿酸、尿素、抗生素、谷氨酸等各种氨基酸,以及各种致癌和致变物质。,主要应用领域,BIOSENSORS,德国研发的环境废水BOD分析仪,4.环境监测 环保问题已经引起了全球性的广泛关注,用于环境监测的专业仪器市场也越来越大,目前已经有相当数量的生物传感器投入到大气和水中各种污染物质含量的监测中去,在发达国家如英国、法国、德国、西班牙和瑞典,在水质检测过程都采用了生物冷光型的生物传感器。生物传感器因其具有快速,连续在线监测的优点,相信在未来,还会有更广泛的应用。,主要应用领域,BIOSENSORS,一种血糖乳酸自动分析仪,

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