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1、细菌培养标本采集及注意事项,检验科,细菌培养必须正确采集标本，否则直接影响到培养及鉴定结果。合格的标本，才有可靠的检验结果，可以指导临床诊疗，为临床科学用药和成功的控制感染提供依据，正确、合理使用抗菌药物是患者早日康复。,一、血液培养,当微生物（细菌）侵入血液迅速繁殖,超出免疫系统清除这些微生物(细菌)的能力时形成菌血症。,1、血培养中常见的分离菌： 革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 凝固酶阴性葡萄球菌 肺炎克雷伯菌 肺炎链球菌 阴沟肠杆菌 A群B群链球 产气肠杆菌 肠球菌 伤寒沙门菌 绿脓杆菌 鲍曼不动杆菌,2、采血指征：发热（体温38C）或低温(36C)、寒战、白细胞计
2、数10.0L、CRP、中性粒细胞比率、皮疹、皮肤黏膜出血、昏迷、多器官衰竭、血压降低、血液病患者出现粒细胞减少、血小板减少、当患者出现上述一种或几种体征时，应及时做血培养。 新生儿可疑菌血症，应同时做尿液、脑脊液培养。,3、采血时机：尽量在使用抗菌素之前采血、尽量在寒战和发热初起时采血、如患者已经使用抗菌药物进行治疗，应在下次用药之前采血。,4、血液标本的采集方法： a、75%酒精清洁局部皮肤30s以上。 b、待皮肤干后，再用1%-2.%碘酊作用30s或10%碘伏作用90s以上，从穿刺点中心部位向外画圈消毒，范围不应小于5（直径），且不能用手指触摸消毒后的皮肤。,c、皮肤碘酒干后（约1分），用
3、75%酒精脱碘后，再穿刺采集血液。采血量成人每瓶510ml，婴幼儿15ml。 d、培养瓶消毒程序：70%酒精擦拭血培养橡皮塞，作用60s；用无菌棉签清除橡皮塞表面残余酒精。用注射器采血后立即在床旁接种培养瓶，并迅速轻摇，充分混匀防止凝固，但又不可剧震以防溶血。,5、采血的合适套数：细菌和真菌均一过性存在于血液中，所以单次血培养检测的敏感性是有限，为了保证对菌血症的检出率：每次血培养在不同部位同时或短时间（15分钟）采集两套：成人每套血培养采两瓶：需氧瓶+厌氧瓶。儿童每套1瓶：需氧瓶（绝大多数情况）。当儿童体重13KG时需采集需氧瓶和厌氧瓶。成人采血量20ml，首先注入厌氧瓶.然后再注入需氧瓶。
4、采血量少时要注入需氧瓶。,6、厌氧菌血症培养高危人群：腹腔感染、妇产科疾病、外科手术、创伤、烧伤、肿瘤、免疫抑制、吸入性肺炎、糖尿病、心血管病、慢性口或鼻窦感染、腹部症状、咬伤、破伤风、蜂窝组织炎（尤其是肛周及骶周）脓毒性静脉炎、等。(为什么使用厌氧瓶？它不仅培养厌氧菌，还能提高兼性厌氧菌的检出率。临床常见菌血症：厌氧菌平均约占菌血症4%，而检出更多的是兼性厌氧菌。16%链球菌、17%肠杆菌仅厌氧瓶报阳)。,全自动细菌测定系统,7、送检标本：血液、各种无菌体液（脑脊液、骨髓、胆汁、胸水、腹水、心包穿刺液等等。）,注意事项,a.怀疑菌血症应尽早采血，体温上升（38.5）采血可提高阳性率，但也要防
5、止因等待而延误时机。 b.对已经使用抗菌药物，而又不能停药者，也应在下次用药前采血。 c.切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本，也不能从静脉导管及动脉插管中取血。 d.血液注入血培养基前，更换针头反而易导致污染。,e.每例至少采血两次，间隔0.5-1h，以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。 f.采血，周围静脉为宜。 g.严格执行三步消毒后采血。注入血液时不能将注射器内的空气加入血瓶内。绝对不能超出10 ml。,二、呼吸道标本培养,人体的上呼吸道有常居菌群，下呼吸道是无菌，但下呼吸道分泌物经上呼吸道排出时通常受到正常菌群的污染，故要正确采集标本，并结合临床表现是否有该细菌引起的感染。,1、
6、呼吸道标本（痰）中常见的分离细菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌链球菌（草绿、肺炎、化脓性链球菌） 肺炎克雷伯及其它克雷伯菌葡萄球菌（表皮.金黄色等其它葡萄球菌） 大肠埃希菌及其它肠杆菌、微球菌、肠球菌 沙雷菌、变形杆菌。不动杆菌结核分枝杆菌、酵母样真菌。等等。 铜绿假单胞菌及其它假单胞菌,2、痰：自然咳痰法: 清晨起床后用凉开水漱口多次，以除去口腔内大量杂菌，用力咳出呼吸道深部的脓痰，直接吐入干净、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量要1ml。标本要尽快送检。 咳嗽无力或昏迷，可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸痰及支气管灌洗液送检。,4、痰量极少者可用45 3%-10%的氯化钠溶液
7、约25ml雾化。对于咯痰量少的幼儿,可轻轻压迫胸骨上部的气管，当其咯痰后用无菌棉拭子采集标本。或用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。,5、咽拭子、口腔拭子：（无菌拭子）患者清水漱口后，有检查者将其舌外拉，用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复檫拭数次;化脓性扁桃体炎、口腔念珠菌时直接用棉拭子在病灶部位檫拭。,注意事项,尽可能在使用抗菌素之前采集标本，痰标本的采集以晨痰为佳，采样后应立即送检以免污染。忌送唾液。采咽拭子时，棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液。采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶。,泌尿道标本培养,尿路感染通常有患者
8、自身的常居菌上行至膀胱所致。1.尿中常见分离菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌血浆凝固酶阴性葡萄球菌 克雷伯菌属肠球菌 变形杆菌属A群链球菌 淋病奈瑟菌结核分枝杆菌 肠杆菌属念珠菌 假单胞菌属 沙雷菌属 动杆菌属,3、中段尿 （1）采集方法 女性 采样前用肥皂水或0.1%的高锰酸钾溶液冲洗外阴，用手指将阴唇分开排尿，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿2-3ml于无菌管内。 男性用肥皂水清洗尿道口，或0.1%的碘伏溶液消毒尿道口，上翻包皮，灭菌纱布擦干，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿2-3ml于无菌管内。,采集标本以晨起第一次尿液为佳 留置导尿者采集法拔去闭式引流的集尿袋
9、，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液2-3ml送检。不可从集尿袋下端留取标本。,2、泌尿系统临床诊断为：患者出现尿频、尿急、尿痛等尿路刺激症状，或有下腹触痛、肾区叩痛、伴或不伴发热，并具有下列情况之一：,a、尿检白细胞男性5个/高倍视野，女性10个/高倍视野。 b、有典型的尿路感染症状 c、有肉眼可见脓尿或血尿 d、尿分析白细胞和或亚硝酸盐阳性 e、不明原因的发热而无其他局部症状 f、留置导尿管的病人出现发热 g、膀胱排空功能受损 h、泌尿系统疾病手术前,注意事项,a.若细菌培养结果为两种或两种以上细菌，需考虑污染可能，建议重新留取标本送检。 b.尿液中不得加入防腐剂，消毒剂否则影响阳性
10、检出率。,脓液及病灶分泌物,微生物（细菌）存在于周围环境中，也存在于皮肤、粘膜表面，它们通过破坏的皮肤或粘膜进入通常无菌的组织引起感染，在一个或多个解剖部位形成小脓庖或包裹性脓肿。细菌和真菌（条件致病菌或致病菌）都可导致炎性渗出，渗出物由白细胞、侵入病原体(细菌)、体液及纤维蛋白混合组成，即：脓液。,1、伤口： 表面伤口拭子采集方法 皮肤与皮下组织，包括手术切口、褥疮溃疡、新生儿脐炎、婴儿脓疮病。 用无菌生理盐水或75%的酒精擦去病灶表面渗液； 用无菌棉拭子抹去及较深部的脓液分泌物或组织送检； 采集褥疮溃疡标本时应采集褥疮边缘的脓性分泌物，拭子放在运送培养基中立即送检。注意事项：不要采集创口表
11、面的渗液。,2.伤口、脓肿、窦道、坏疽组织采集方法及注意事项 闭锁性脓肿用碘酒和酒精消毒皮肤后，用灭菌注射器穿刺抽取全部脓液送检。 伤口处若有脓及渗出物要用无菌棉签深入各种窦道中擦拭，用小刀刮取，穿刺抽吸或手术切除获得深处伤口标本； 当创伤出血时，敷有药物在2h以内及烧伤在12h内均不应采集标本，此时获得阳性结果机会甚少。,3.烧伤创面 烧伤创面需要脓性分泌物，焦痂迅速分离变棕黑、黑或紫罗兰色，烧伤边缘水肿。患者发烧38或低体温36，合并低血压。 用无菌生理盐水冲洗伤口创面。由于创面部位不同，细菌种类也不尽相同，要用灭菌棉拭子采集多个部位的炎症区送检。,胃肠道标本培养,正常人的肠道栖居大量的不
12、同种类的微生物（细菌），具有维护健康的重要作用。疾病时致腹泻。,1、粪便培养检查的送检指征： a、粪便涂片镜检白细胞5HP. b.重症腹泻. c.体温 38.5. d.血便. e.便中有脓液. f.未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者. g.来自疫区的患者。,2、粪便采集:a.选取脓血、黏液粪便2-3g，液体粪便取絮状物1-2ml。盛于干净干燥盒中及时送检。,肛拭子在无法获得粪便的情况下，可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛拭子插入肛门4-5cm（幼儿2-3cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。,注意事项,标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳性检出率； 切忌粪尿混合； 标本在
13、病理早期或治疗前采集； 一般认为用抗菌药三天后，标本培养病原菌阴性。 采集标本时忌用吸水性物品采集或送检。（如棉签、或尿不湿、卫生纸、等。）,脑脊液,1、采集方法：无菌方法收集脑脊液3-5ml，置于无菌试管或注射器中立即送检。 2、注意事项 （1）采集标本后立即送检，因脑膜炎奈瑟菌离体后迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌也易死亡； （2）疑为上述细菌感染时，应注意保温。,穿刺液标本,穿刺液：包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液。 1、采集方法：胸腹水采集5-10ml,心包液、关节液收集2-5ml，置于无菌试管或注射器中，立即送检。,注意事项,标本采集应在患者用药之前或停止用药1-2天后进行； 疑为淋病性关节炎患者的关节液，采集后立即送检。 不能用棉拭子浸蘸标本送检。 注明标本名称：如、胸水或腹水、关节液等等。,
