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1、生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的检测,1、实验原理：,（1）斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：由蓝色变成砖红色(沉淀)。斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。葡萄糖、麦芽糖、果糖是还原糖。 （2）苏丹染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色，苏丹染液遇脂肪的颜色反应为红色。（3）蛋白质可与双缩脲试剂产生紫色反应（肽键）。,（一）生物组织中可溶性还原糖的鉴定,1.实验原理 当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。 Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2
2、O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。,RCHO+2Cu(OH)2RCOOH+Cu2O+2H2O,试剂配制 甲液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）斐林试剂 乙液（0.05g/mL的硫酸铜溶液）,甲液乙液等量混合，现用现配，切不可分开滴加，或者久置后才用。,（二）生物组织中蛋白质的鉴定,1 实验原理 在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu 2+作用，形成紫色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应。,试剂配制 A液（0.1g/mL的氢氧化钠溶液）双缩脲试剂 B液（0
3、.01g/mL的硫酸铜溶液）,2、实验目的： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质 3、实验选材（1、材料应富含相关物质，使现象更加明显；2、材料本身应无色，以免对结果产生干扰）（1）做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨，也可用白萝卜替代。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）（2）做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡34小时。（3）做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆(可用豆浆替代）或鸡蛋清。,4、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4
4、溶液）、苏丹或苏丹染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液 B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。,5、方法步骤： （）可溶性还原糖糖的鉴定 （水浴加热）,.实验步骤,（1）制备组织样液（教师制备）,（2）鉴定样液,先在试管中加入2mL组织样液,再加入2mL刚配制的斐林试剂,水浴煮沸2分钟,注意观察整个实验过程中，溶液颜色的变化！,（）脂肪的鉴定 （需要显微镜）,实验步骤,（1）切片制作,去掉花生种皮,用左手的三个手指夹住花生的一片子叶，使花生子叶高于手指之上（为什么？）。右手持刀片，将子叶削去一层，形成平面
5、。,刀口向内，与花生断面平行，以均匀的动作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意要整个臂部用力，而不要腕部用力。）如此连续动作，切下一些薄片。,（2）染色,用毛笔将最 薄的几片材料移至洁净的载玻片的中央滴苏丹溶液2-3滴于花生子叶薄片上2-1min后，吸去染液滴50%的酒精洗去浮色吸去多余酒精再滴1-2滴蒸馏水盖上盖玻片，制成临时装片。,（3）镜检鉴定,在低倍镜下观察，找到花生子叶切片的最薄处（最好只有1-2层细胞），移至视野的中心换用高倍镜观察，调焦至最清晰。可发现细胞内橘黄色的圆形小颗粒，这就是脂肪滴（油滴）。若发现观察物外围也有许多橘黄色小颗粒，则是脂肪跑了出来。,脂肪检测实验的实验
6、结果,若用物理方法如何鉴定脂肪的存在?,烘烤种子后,把子叶放在白纸上用手指挤压,白纸上会出现透明的油迹,说明子叶含有脂肪。,（）蛋白质的鉴定,实验步骤：,（1）制备生物组织样液（教师制备）,（2）鉴定,先加2mL组织样液,再加2mL双缩脲试剂A液,加3-4滴双缩脲试剂B液,蛋白质检测实验的实验结果,6、讨论:,(1)选取富含还原糖的生物材料时,能用甘蔗或者橘子吗?为什么?答:不行.橘子本身富含色素,会掩盖颜色反应的结果;而甘蔗不含还原糖,蔗糖不是还原糖.(2)斐林试剂和双缩脲试剂有哪些区别？a溶液浓度不同:斐林试剂中CuSO4溶液为0.05g/ mL, 双缩脲试剂中CuSO4溶液为0.01g/ mLb使用原理不同:斐林试剂实质是新制Cu(OH)2沉淀, 双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2+c使用方法不同: 斐林试剂使用时,先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合,然后立即使用;双缩脲试剂是先加NaOH溶液,然后再加入3至4滴CuSO4溶液,7、练习与巩固(1)检查尿液中有无葡萄糖,下列试剂中可选用的是( )A.斐林试剂 B.碘液 C.双缩脲试剂 D.二苯胺(2)下列生物材料中，可用于还原糖鉴定的是( )A.柑橘 B.苹果 C.新鲜肝脏 D.甘蔗,A,B,谢谢！,
