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1、血涂片制备、染色及白细胞形态观察,医学技术学院 胡淼联系电话：13409204917,实验内容1.血涂片制备 2.血涂片染色3.正常白细胞形态观察,目的：掌握血涂片的制备方法、瑞吉氏染色方 法，观察正常白细胞形态。染色原理：根据不同种类细胞及细胞的不同成分 ，对酸性及碱性染料结合能力不同， 而使各种细胞呈现各自的特点。器材：载玻片、推片、染架、吸耳球、显微镜、 微量吸管、拭镜纸。试剂：瑞吉氏染液、磷酸盐缓冲液、香柏油、 乙醇-乙醚溶液。标本：抗凝血。,左手持载玻片，右手持推片，将推片置血滴前方，向后移动到接触血滴，使血滴沿推片边缘展开成线状。,1. 血 涂 片 制 备,血液充分抗凝。,微量吸管
2、虹吸取血7-8l，置血滴于载玻片一端。,推片与载片呈3040角，向另一端匀速地推出。,血 涂 片 制 备,血 涂 片 制 备,推片,载玻片,血液,将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。,一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾,涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号,李四,B 1 2 3,2. 血 涂 片 染 色,再加瑞氏染色液5-8滴，液和液充分混匀静置5分钟,直接在无血膜处流水冲洗3-5分钟,血涂片干燥后用油镜分类计数200个白细胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆盖整个血膜1分钟,1.玻片清洗：新玻片常有游离碱质,因此应用 清洗液或10%盐酸浸泡24h,然后
3、再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水煮沸20min,再用热水将肥皂和血膜洗去,自来水反复冲洗,必要时再置95%乙醇中浸泡1h,然后擦干或烤干备用。2.使用玻片：只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面,以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。,注 意 事 项 玻片,3.良好的血涂片,厚薄适宜,头体尾分明,分布均匀,边缘整齐, 两侧留有空隙。 血滴越大，角度越大，速度越大，血膜越厚。4.血涂片干透后方可染色，否则染色过程中血膜容易脱落。血涂片制好后最好立即固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变。,注 意 事 项 推片,5.H+影响细胞染色,配制染液必须用优质甲醇,稀释染液必须用缓冲液,近中性水冲洗,否则各
4、种细胞染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误。6.染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染液越淡、室温越低、细胞越多,染色时间越长或适当增加染液量。7.染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血涂片上难冲洗干净。流水冲去染液,不能先倒掉染液,以免染料沉着于血涂片上。冲洗时间不宜过久，以防脱色。,注 意 事 项 染色,3. 血涂片的观察,低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。,李四123,中性杆状核粒细胞,中性分叶核粒细胞,单核细胞,嗜酸性粒细胞,嗜碱性粒细胞,淋巴细胞,中性杆状核粒细胞,正 常
5、 细 胞 形 态,胞体：圆形，直径 10-15m。胞核：核形不一，呈S形、U形等，核凹陷程度大于核直径的1/2，核最窄径大于最宽径的1/3。核色质粗糙成块。 胞浆：胞质量丰富，充满浅红色中性颗粒。,中性分叶核粒细胞,体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分2-5叶。直径10-12m 。,嗜酸性粒细胞,略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成桔红色。直径10-15 m 。,嗜碱性粒细胞,体积略小于嗜酸性白细胞，细胞中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11 m 。,单核细胞,体积最大，细胞圆形。
6、胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20 m 。,淋巴细胞,小淋巴细胞：与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成 深紫色。周围细胞质嗜碱性，染成淡蓝。大淋巴细胞：较大，核圆形。直径6-8 m 。,细胞 形态 胞质着色 胞质内颗粒 细胞核型,中性杆 圆形 粉红色 量多 细小 均匀 紫红色 杆状,中性叶 圆形 粉红色 量多 细小 均匀 紫红色 2-5叶,嗜酸 圆形 不清 粗大整齐均匀橘黄色 2叶眼镜形,嗜碱 圆形 不清 量少 排列紊乱 不均紫黑色 覆盖核上 核形不清,单核 圆 椭圆 灰蓝色 细小尘土样紫红色 肾型 马蹄形,淋巴 圆 椭圆 透明 淡蓝色 多无 大细胞可有少量 圆 椭圆 肾形,红细胞,淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8m。,血小板,形状不规则，一般呈圆形，比红细胞和白细胞小得多，无细胞核，有质膜。血小板在长期内被看作是血液中无功能的细胞碎片。,1. 本次实验的关键环节是什么？ 2. 同一标本不同组分类是否一致，原因分析。3. 5种白细胞形态绘图。,Thank you for your attention !,
