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1、ABO血型系统疑难定型及配血不合的分析,吉林大学中日联谊医院输血科刘玉洁,前言,临床输血是现代医学中诊治疾病，挽救生命的重要医疗手段。同时，输血可能引起多种不良反应，直接危机到患者生命，稍有不慎将可能发生无法弥补的过失。所以，每个细小环节都必须做到安全、准确、有效。血型鉴定、交叉配血、抗体筛选是输血前的最后一道防线，要求输血科从业人员必须有高度的责任感、严谨的科学作风，确保试验结果准确无误。我们在临床工作中经常遇见血型鉴定、交叉配血、抗体筛查不符及各种干扰情况。下面把在血型血清学临床实践中的一点体会做如下汇报，供大家参考。,ABO正定型必备的试剂及意义,疑难定型中正定血型所用抗血清抗-A及抗-
2、B抗-AB: 确认弱A和弱B抗原, 与弱A及弱B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H: 用于检查亚型等, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测,ABO反定型中必备的试剂及意义,A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下,ABO疑难血型检测项目,正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照型物质检查（唾液）吸收抑制试
3、验放散试验家系调查,吸收抑制试验,原理：本试验用以间接证明红细胞上的抗原。如全凝聚或多凝聚细胞无法用标准血清检查血型，但红细胞加入血清后，若有相应抗原，便吸收血清中抗体。吸收后的血清再用相应红细胞测定效价并与吸收前血清效价比较。当血清效价显著下降或不凝聚相应红细胞时，便可证明受检红细胞含有这一抗原，间接推测受检红细胞的血型,放散试验,原理：抗体与相应的抗原在适合条件下发生凝聚或致敏但这种结合是可逆的，如改变某些物理条件时抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来。通过检测放散出来的抗体，可以证明弱A或弱B抗原的存在。可根据需要决定方法,型ABH物质测定意义,原理：某些血型抗原以可溶解形式存在于血清、血
4、浆、唾液、尿液等体液中，称为可溶性血型物质；有分泌型和非分泌型之分.A型人唾液含A型物质、B型含B物质、AB型含A及B物质。H型在A、B、O、AB四型均存在，但以O型人含量最多。唾液中血型物质为多糖类半抗原，能特异地与相应抗体结合，从而抑制该抗体与相应红细胞发生凝聚。意义：可作为判断血型的辅助依据。可鉴定抗体性质。,O型筛选红细胞的应用,抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型(CDe/Cde); II:O型 (cDE/cDE); III: O型(cde/cde) 用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、病人相配合的血
5、,自身冷凝集血样的ABO定型,正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37温盐水洗涤红细胞45热放散3分钟巯基试剂处理(或2-ME): 破坏IgM,获得性B及多凝集现象,获得性B: 肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面特点：1 、因红细胞上的 类B抗原是获得的，病情好转，类B消失。2 、AB型人血清中一般没有抗体，而类B一般是A型红细胞获得的，所以血清中没有抗B抗体。 3、多凝聚现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体( 多凝集血样中的血清不与自身反应),获得类B解决办法,询问病史：
6、是否有肠道感染用自身血清检查红细胞，获得性类B抗原其血清不凝聚自身红细胞。唾液型物质检测：如是分泌型，其唾液只含有A物质而不含B物质,ABO正反定型不符事例,-A-B-ABAcBcOc自身 - - - - - - -,可能血型: O新生儿或老年人,丙球蛋白缺乏或服用免疫抑制剂解决方案:检查年龄及丙球水平,室温30分钟或4度15分钟,ABO正反定型不符事例,-A-B-ABAcBcOc自身4+ - 4+ 1+ 4+ - -,可能血型: 亚型,可能是A2型有抗-A1解决方案: 使用抗-A1血清鉴定,ABO正反定型不符事例,-A -B-ABAcBcOc自身4+ 4+ 4+ 2+ 2+ 2+ 2+可能血
7、型: AB型，但有缗钱形成(多发骨髓瘤,白蛋白:球蛋白比例失调,血浆蛋白紊乱), 冷自家抗体(AB型有抗-I),解决方案: 洗涤红细胞(盐水替代试验), 自家吸收,ABO正反定型不符事例,-A -B-ABAcBcOc自身4+ - 4+ - 4+ 3+ -,可能血型: A1可能有抗-H解决方案: 使用抗-A1确认A抗原,抗-H验证H抗原,ABO正反定型不符事例,-A -B-ABAcBcOc自身3+ 4+ 4+ 1+ - - -,可能血型: AB亚型, 可能是A2B有抗-A1解决方案: 使用抗-A1,ABO正反定型不符事例,可能血型: A型有获得性B原解决方案: 询问病史, 用酸化的抗-B(pH
8、6.0)检查,ABO正反定型不符事例,可能血型: AB型有同种抗体解决方案: 进行抗体筛选及抗体鉴定,ABO正反定型不符事例,-A-B-ABAcBcOc自身 + + + 4+ 4+ + +,可能血型: O型有问题抗体或有输血反应,引起RBC包被抗体解决方案: 直接抗球蛋白试验及抗体鉴定,定型不一致的原因分析（一） 弱反应或缺失抗体,、新生儿、老人、低球蛋白症的白血病人、低球蛋白的淋巴瘤病人（恶性）、使用免疫抑止药物而导致低球蛋白的病人、先天丙球缺乏的病人、免疫缺陷病人、骨髓移植病人（由于治疗导致球蛋白缺乏 ，且移植入的骨髓制造另一群红细胞、双胞胎嵌合体,弱或缺失抗体导致的正反定型不符,正定型
9、反定型 抗抗 抗 细胞细胞 ：可能血型：（老年人）,定型不一致的原因分析（二） 弱反应或缺失抗原,、亚型、亚型或亚型、白血病导致或抗原减弱、何杰金病（Hodgkins）有时会抑制抗原表达，与白血病类似、由于某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗或抗抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性。通过洗涤红细胞可解决此问题。、获得性 6、抗或抗试剂中存在低频抗原的抗体,白血病人的血型血清定型的典型反应,正定型 反定型 自身 病人血型抗，抗，抗 细胞，细胞，O细胞+ 2+ / ,ABO定型不一致的原因分析（三） 蛋白或血浆不正常引起的正反定型不符,1、某些疾病导致球蛋白水平增高（多发性骨
10、髓瘤、巨球蛋白血症、Hodgkins淋巴瘤）引起缗钱状凝集，纤维蛋白原水平的增高也会引起缗钱状凝集，导致假阳性凝集。（洗涤红细胞）、血浆增溶剂（葡聚糖、PVP）也会引起缗钱状凝集。（洗涤红细胞）,缗钱状假凝集,特点：在显微镜下红细胞膜完整，细胞间界限清洗地成缗钱串聚集。缗钱状假凝集反应不受温度影响，室温与37结果一样。解决方法：被检细胞先用盐水洗涤后再作配血试验,缗钱状凝集引起的正反定型不符,正定型 反定型 自身 抗抗抗 细胞细胞O细胞 2+ ,ABO定型不一致的原因分析（四）其他原因引起的正反定型不符,、多凝集：当病人感染细菌或病毒后，病毒或细菌产生的酶使红细胞上掩蔽的抗原暴露激活，由于正常
11、人血清中都含有抗抗体，因此可与正常人血清产生凝集反应，正定型试验假阳性。（利用植物凝集素解决）、冷自身抗体引起的自家凝集反应：正反定型均可出现假阳性（自身吸收及巯基试剂处理）、存在ABO系统的意外抗体：如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗1，导致反定型试验多出抗体。,ABO定型不一致的原因分析（四）其他原因引起的正反定型不符,、被检者血清中存在ABO系统以外的同种抗体，反定型时出现假阳性反应。（谱细胞鉴定抗体特异性）、非抗及抗的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集。,ABO定型不一致的原因分析（五）技术方面的原因引起的正反定型不符,标准血清方面的原因：血清抗体效价
12、过低、保存不当细菌污染、试验器皿不干净等。操作方面的原因：红细胞浓度、血清与红细胞的比例不当、离心过度或离心不足。错误的记录。,抗原活化引起正反定型不符,正定型 反定型 自身抗抗抗细胞 细胞 O细胞 ：可能血型：在人的红细胞上有一种不活动的T抗原，血清中又存在一种抗T抗体，正常时不会发生凝聚。但某些细菌或细菌酶污染红细胞后，能激活原来不活动的T抗原，使成为有活性的T抗原，此时遇到抗T抗体，便与任何人的血清都能凝聚，所有把被激活的T抗原细胞叫全凝集细胞。,自身冷抗体引起的正反定型不符,正定型反定型 自身抗抗抗细胞细胞O细胞 ：可能是型,自身温抗体或输血反应引起细胞 包被抗体导致的正反定型不符,正
13、定型反定型自身抗抗抗细胞细胞O细胞 ：可能血型,亚型抗体引起的正反定型不符,正定型反定型自身抗抗抗细胞细胞O细胞 ：可能血型A2B 抗A1抗体,疑难配血及原因分析,常规配血技术,选择的技术不仅要能检查出不配合的IgM抗体，还必须能检查出尽可能多的不配合的IgG抗体。最大限度的减少抗体的漏检。 立即离心技术配血法：用于检查ABO的不配合及室温反应活性抗体引起的不配合。 抗人球蛋白配血法：用于检查不规则抗体(IgG)引起的交叉配血不配合。,特殊配血技术,预温配血技术：主要用于解决室温反应活性的无临床意义的抗体引起的交叉配血不配合。 冷型自家溶贫病人的配血试验，用于解决自身冷凝集引起的配血困难。 温
14、型自家溶贫病人的配血试验，用于解决自身温抗体引起的配血困难。 纤原未完全析出的血样，如肾透析、凝血功能差的病人，在配血时引起假阳性。, ,主侧交叉配血不相合的原因,病人或供血者ABO定型不正确，或二者的ABO血型不配合。病人血清中存在同种抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。病人血清中存在自身抗体，与供血者红细胞上的相应抗原反应。,主侧交叉配血不相合的原因,供血者红细胞上已经包被了抗体，导致抗球蛋白试验阳性。病人血清不正常，如白蛋白球蛋白比例不正常引起缗钱状假凝集，血清中存在高分子聚合物的血浆扩容剂引起假阳性（用盐水添加试验来解决）。试验系统被污染。,次测交叉配血不相合的原因（一）,供血者血浆
15、中存在针对病人红细胞抗原的抗体。病人与供血者的ABO血型不相合。病人的红细胞已经包被了抗体，直接抗人球蛋白试验阳性。,主侧配血不相符原因分析（一）,现象 可能原因 解决方案主侧：病人或供血者ABO错误 重新定型 自身： 病人血清可能含ABO抗体 检查病人亚型、输血/移植史 抗体筛选： 病人血清中有抗体，但筛选对病人血清进行抗体鉴定 细胞上无相应抗原 供血者红细胞直接抗球蛋白 检查供血者直接抗球蛋白试验试验阳性,主侧配血不相合原因的分析（二）,温型自家溶贫病人的配血,对WAIHA病人最好避免输血，必须输血时，应给以维持足够携氧能力的最少量的红细胞。由于找不到血清学配合的血液，确实存在着由伴随的同
16、种抗体引起严重的溶血性输血反应的危险。因此除非病人的生命处在危险中，否则应该尽量避免输血。在交叉配血时应该遵循下列规程：用单特异性的抗IgG与抗C3抗人球蛋白确定WAIHA是补体还是IgG引起。如果存在IgG引起的WAIHA，则应该用试剂谱细胞鉴定抗体的特异性（包括自身抗体及同种抗体）。如果能鉴定出同种抗体或自身抗体的特异性，则用缺少相应抗原的献血员红细胞作交叉配血。如果同种抗体被排除而所有交叉配血是不相合的，则选择凝集反应强度弱于自身对照的血液供输血使用。,冷型自家溶贫病人的配血,使用预温间接抗人球蛋白方法配血如果冷自身抗体效价很高，则需要对病人的血清进行处理，用处理后血清配血：自身抗体吸收
17、法：用自身红细胞吸收自身抗体巯基试剂处理法,抗体筛选和交叉配血结果分析,抗体筛选阴性，抗人球蛋白交叉配血不合献血者红细胞DAT阳性（约1/10000）。患者抗体弱，献血者红细胞抗原性很强，表现为抗人球蛋白试验阳性。针对低频抗原的抗体。,抗体筛检阴性盐水交叉配血不相容,献血者红细胞是ABO血型不相容。抗A1存在于A2或A2B个体血清中。 存在在室温反应的同种异体抗体。献血者的红细胞时多凝集红细胞。,抗体筛选和交叉配血结果分析,抗体筛选阴性，交叉配血相容 见于临床上绝大多数标本。抗体筛选阴性，血清中仍有可能含有临床有意义的抗体（方法或筛选细胞）。盐水介质试验作配血可能漏检有意义的IgG类抗体。只有用非盐水介质交叉配血，才能保证待输的血和受者相合。,抗体筛选和交叉配血结果分析,抗体筛选阳性，交叉配血不合同种抗体、自身抗体、试剂问题、缗钱状凝集，应在输血前查明原因。 必须进行包括抗人球蛋白试验在内的交叉配血。紧急情况下无法找到血清学配合的血液时，输血科人员应告之主管医生此种情况下输血存在的可能危险。,谢谢,
