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1、HPV病毒检测的目的及最佳检测方法,1、HPV检测的目的是什么？2、HPV检查的最佳方法？3、德同产品介绍,2,主要内容, 只是为了查有没有HPV病毒感染？ 是为了查HPV感染型别，检测型别越多越好？ 是为了发现已经存在的CIN2+病变和预CIN2+ 的 风险人群？,3,HPV检测的目的是什么？,专家对HPV检测是否要临床验证如何看待？,HPV检测的目的是什么？,1个HIV/HBV = AIDS/HBV1个HPV CIN或宫颈癌 （80-90%的女性HPV感染是一过性的，可在6-24个月通过自体免疫清除）高危型HPV持续感会导致宫颈癌从HPV感染到宫颈癌，一般需要1020年,高分析敏感度,检测
2、与临床无关的病毒水平（假阳性）,一过性的感染会自身清除,恢复阶段：免疫响应,早期感染会自身清除,Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6,HPV检测的目的是什么？,HPV病毒含量与临床病变的关系,WHO指南对于HPVCutoff有明确推荐检测阳性判断值,6,WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention. World Health Organization 2013,阳性判断值（Cutof
3、f）的设定，在2013年的WHO宫颈癌筛查和管理指南中是有具体建议的，其推荐高危型HPV 检测cut-off 值1.0 pg/ml,HPV检测的目的是什么？,HPV检测的目的是什么？,HPV检测的目的是什么？,7,不再是单纯的病毒检测，而是强调“临床”，不再是制造商说了算，而是临床说了算阳性判断标准是要获得理想临床敏感度和特异度的临界值，制造商不能仅凭简单的病毒检测数据来制定，建议使用ROC曲线的方式进行评估，这需要大量临床检测数据才能最终找到理想的临界值,2015年CFDA针对HPV检测试剂阳性判断值的规定：临床灵敏度特异度的Cutoff值,HPV检测的目的是什么？,8,2015年欧洲IPV
4、大会：宫颈癌筛查HPV检测目的HPV检测不是为了检测病毒，不是一过性感染，而是检测感染病毒后的进展风险HPV检测需要关注临床敏感度，最大化的保护低风险人群，最大化的辨别高风险人群,2015 IPV Conference，Mark. Stoler,2016年CSCCP会议,Greater China Commerical Summit,9,HPV检测不是仅仅为了检出HPV感染，而是为了发现已经存在的CIN2+病变和预测CIN2+的风险；对于HPV检测来说，最重要的是临床灵敏度和阴性预测值,HPV检测的目的是什么？,WHO / IRAC 明确检测13种HPV,Title, Location, Da
5、te,10,从流行病学和致癌机制证据方面，WHO/IRAC 明确检测13种HPV型别：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68,最强的致癌型别，几个致癌位点已经明确,充足流行病学证据证实会导致宫颈癌,缺乏宫颈癌流行病学证据，但从致癌机制上有强的证据支持,2009 WHO IARC Special Report Policy A review of human carcinogens Part B,2015年中国CFDA明确HPV检测型范围,11,HPV检测型别太少的产品如只检测5种型别、2种型别（如HPV16/18）等，将不能再注册,HPV检测的目的是
6、什么？,HPV检测的目的是什么？,Title, Location, Date,12,不能盲目的追求过多的HPV检测型别不建议将低危型HPV检测用于宫颈癌筛查,中国CFDA明确限制低危型HPV检测,2015最新CFDA指导原则以服务临床为最终目的,13,一项检测技术，要想满足以上要求，必须基于长时间大量的临床验证才能实现,2015年CFDA新的指导原则，从临床目的出发，精确注册标准要求,答案： 只是为了查有没有HPV病毒感染？NO 是为了查HPV感染型别，检测型别越多越好？NO 是为了发现已经存在的CIN2+病变和预CIN2+ 的风险 人群？yes,14,HPV检测的目的是什么？,1、HPV检测
7、的目的是什么？2、HPV检查的最佳方法？3、德同产品介绍,15,主要内容,HPV检查的最佳方法,直接核酸检测（无需PCR实验室）杂交捕获技术 （HC2、DH1、DH2、DH3）酶切信号放大法 （Cervista）核酸扩增后检测PCR类技术（需PCR实验室） 膜杂交法 基因芯片法 反向点杂交法 流式荧光杂交法 荧光探针法,HPV DNA检测技术分类,HPV检查的最佳方法杂交捕获技术 （HPV检测的金标准）产品德国凯杰的：HC2杭州德同的：DH2、DH3,17,HPV检查的最佳方法,杂交捕获技术 的三大优势：1、独特的探针技术：14 种全长 8000RNA 探针，避免因 区域片段（如 L1 区）丢
8、失造成的假阴性2、无需DNA提取，无需核酸扩增，有效避免因环境因素造 成的假阳性3、统一的临 床 判 定 标 准1.0pg/ml，避 免 因方法 学灵敏度过高产生的假阳性，结果重复性好，准确可靠。,18,HPV检查的最佳方法,杂交捕获法独特的探针技术,HPV病毒基因组为环状双链DNA，含有8000个碱基对,德同DH系列 HPV 检测“全长鸡尾酒”探针技术,HPV18,8000bp，基于全长，涵盖HPV DNA所有区域212种不同型别探针混合准确，不漏诊,Cobas HPV& Abbott HPV(12+2 Real-time PCR)“寡核苷酸探针”技术,HPV16,HPV18,12种HR通用
9、探针,约200bp，仅基于L1片断， 非全长仅3种探针混合病毒基因缺失、突变会造成漏诊,其他国产PCR方法“ 寡核苷酸探针”技术,13种HR通用探针,约100-150bp，仅基于L1片断， 非全长仅1种通用探针病毒基因缺失、突变会造成漏诊,HPV16,12种HR通用探针,德同DH系列HPV 检测“全长鸡尾酒”探针技术,Title, Location, Date,Cobas HPV& Abbott HPV(12+2 Real-time PCR)“寡核苷酸探针”技术,其他国产PCR方法 “寡核苷酸探针”技术,PCR和HC2的临床敏感性比较：综合1999-2005年间的主要研究 基于CIN2/3/癌
10、症的病例数1,500,%,“L1片段的缺失并不普遍，但是任何变异或缺失都会造成PCR的检测结果为阴性” Unger et al JHC 1998, 46(4): 535-540,“L1片段是病毒衣壳蛋白，在HPV病毒引发的肿瘤进展过程中是不必要的，因此很可能在HPV整合过程会导致L1片段的缺失” Capone et al, Clin Cancer Research 2000, 6:4171-4175,“5%的癌症和CIN3会因为HPV L1片段的缺失而无法被检测出来” Lorincz (Methods for HPV Detection) ; Emerging Issues on HPV In
11、fections: From Science to Practice, Monsonego 2006,HPV 病毒基因L1片段缺失,PCR中-球蛋白的竞争,反应过程中的竞争会导致假阴性结果,“-球蛋白和HPV以共同引物L1片段进行扩增，这样会降低HPV检测的敏感度”Coutlee et al. JCM 2002; 40(3): 902-907,PCR导致假阴性的原因,不同HPV型别扩增效率不同如果L1片段缺失，检测失败 (整合型HPV)通用引物会和低危型HPV结合，抑制了目标高危型别的扩增内指控（Beta-globin）会抑制HPV扩增样本抑制 (有5的样品丢失因出现抑制而无法扩増),PCR检
12、测可能导致假阳性结果,检测与临床不相关的感染样本间的污染,缺乏统一的判定标准结果受主观因素影响,杂交捕获,PCR,经临床验证的同一判定标准1.0pg/ml仪器判读、结果客观可靠,统一的判定标准,HPV检查的最佳方法,为何要明确“临床灵敏度和临床特异度的Cutoff值”？,26,2015 IPV Conference，Mark. Stoler,参考2015年世界IPV大会：理想的临床灵敏度和特异度的临界值（Cutoff），即及能够保证对CIN2的病人具有非常高的检出率的同时，又可以避免因分析敏感度过高而造成的假阳性临床敏感度与疾病进展风险挂钩分析敏感度与是否存在病毒感染挂钩：PCR过于敏感的分析
13、敏感度，会将病毒含量的人判断为阳性,HPV检查的最佳方法,Adapted from Snijders et al. Journal of Pathology 2003; 201:1-6,分HPV检查的最佳方法析敏感度与临床敏感度,杂交捕获 HPV DNA检测为阴性时并不代表体内没有HPV，表明样品中HPV含量不足5000拷贝.杂交捕获 HPV DNA检测为阳性时（高于以上标准）可以预测未来8-10内患CIN2/3或者进展为更高级别病变的风险短暂及一过性的感染会通过自身免疫力清除PCR 方法检测HPV的分析敏感度可能 10 拷贝,区别：分析敏感度与临床敏感度,分析敏感度,PCR 方法的分析敏感度
14、达到10个拷贝/ml,阳性结果：可能没有临床相关性,临床敏感度,杂交捕获的分析阈值经临床验证为 5,000 个拷贝/ml,经临床证实：高度的阴性预测值,样本中能检测出的病毒最低水平 也被称作检测极限 (LOD) 统计学意义：检测结果与零的区分,以临床病变为终点指征，检测出高度病变的敏感度 (CIN3+ / SCC) 初筛时，能够检测出CIN2或宫颈癌的比例 分析阈值必须得到严格的验证,HPV检查的最佳方法杂交捕获技术 （HPV检测的金标准）产品德国凯杰的：HC2杭州德同的：DH2、DH3,29,HPV检查的最佳方法,1、HPV检测的目的是什么？2、HPV检查的最佳方法？3、德同产品介绍,30,
15、主要内容,杭州德同DH系列产品,利用基因杂交、化学发光、信号放大的原理在分子水平检测WHO认可的14种高危型-HPV 病毒DNA 最新“2+12型”检测设计(HPV16/ 18 与其他12种型别检测),德同产品原理-新一代杂交捕获技术,杭州德同DH系列产品,具有48T、96T两种规格,半自动检测仪器,全自动检测仪器,杭州德同DH系列产品检测仪器,DH产品与HC2的临床比对,孙小伟等，中华肿瘤防治杂志 2016年2月 第23卷 第3期 137-140,河南新密“两癌”筛查项目,DH2对CIN2+的检出率显著高于巴氏涂片和VIA/VILI,临床试验显示：DH3具有与Cobas相同预测高级别病变的效
16、能,浙江龙游10669名健康妇女接受Cobas和DH3筛查结果比对,临床试验显示：DH3与Cobas预测高级别的效能相似,浙江龙游10669名健康妇女HPV16/18分型检测用于宫颈癌初筛Cobas/DH3效能的比较,保留了HPV检测“金标准”杂交捕获技术的特点 全长探针减少“漏诊” 阈值（cutoff值）1pg/ml确保检测“病变”，而不是检测“病毒” 无核酸扩增无需实验室特殊要求及人员资质 储运条件：2-8新添加最新的设计 系列产品：DH2:14种高危HPV DH3:2+12分型检测 满足不同筛查需求 符合宫颈癌筛查最新理念 全自动检测 减轻人员负担 减少操作污染,德同DH系列产品特点,谢 谢！,
