《仪分实验 荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量ppt课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《仪分实验 荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量ppt课件.ppt（13页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、,2022/11/18,实验报告格式,1、实验目的（简单）2、实验原理（详细）3、试剂仪器（简单）4、实验步骤（简单）5、数据处理（详细，表格，图）6、结果讨论（重点） 、回答思考题的问题 、讨论引入误差的原因 、实验操作中的注意事项及减小误差的方法,荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量,实验二,维生素B2,2022/11/18,维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。稀释后有强烈荧光，维生素B2溶液在430440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为525 nm。,一、实验原理,2022/11/18,（1）定量依据：维生素B2在水中是强
2、的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与维生素B2浓度呈正比： If = kc,（2）定量方法（标准曲线法）：测定一系列已如浓度的维生素B2的荧光强度，然后以荧光强度对维生素B2浓度作标准曲线，再测定未知浓度维生素B2的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。,If = kc,荧光强度 vs.浓度标准曲线,荧光强度,核黄素浓度,样本,二、实验仪器,2022/11/18,测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。,三、实验步骤及注意事项,移液管的使用,常见移液管：标有温度和容量(注意是否标有吹)用途：准确移取一定体积
3、的液体操作：洗涤(蒸馏水)、润洗(3次)、移液、洗涤干净,注意事项：1、整个操作过程中，保持移液管的垂直；2、读数时视线与凹液面平齐,溶液下端1-2cm,1. 打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。2. 仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：确定激发波长和发射波长。3. 样品测定。4. 退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。,基本操作,四、数据处理,2022/11/18,1.原始数据,2.标准曲线的绘制和未知样品的浓度计算,五、实验注意事项,1.实验过程中，注意使用石英比色池时必须保持四面干净，拿稳棱角注意不要摔落;2.实验完毕，注意检查仪器是否运行正常，关闭程序是否正确。3.试剂取后，得放回原处，保持试验台整洁。,2022/11/18,1.为什么荧光光度法较吸收光度法灵敏度高？2.维生素B2在pH = 67时荧光最强，本实验为何在酸性溶液中测定？3.如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？4.哪些因素可能影响维生素B2的荧光强度？,2022/11/18,六、实验思考题,
