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1、不同方法测定单宁(tannin)含量,的比较研究,测定单宁含量的方法,一、比色法 二、EDTA络合滴定法 三、高锰酸钾滴定法 三种方法的比较,方法一、 比色法,一、 实验目的 了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法二、实验原理 样品中的单宁在碱性溶液中将磷钨钼酸还原,生成深蓝色化合物,其颜色的深浅与单宁的含量成正比,可与标准进行比较定量。三、材料、仪器与试剂 1、材料: 香蕉(未熟透)50g 2、仪器: 天平 组织捣碎机 烧杯 移液管 分光光度计 容量瓶 恒温箱 (30) 3、试剂 :, 标准单宁酸溶液(0.5mg/mL):准确称取标准单宁 酸50 mg,溶解后用水稀释至100 mL,用时
2、现配。 F-D( Folin-Donis)试剂:称取钨酸钠(Na2WO4H2O) 50g、磷钼酸10g,置于500mL锥形瓶中,加375mL水溶解, 再加磷酸25mL,连接冷凝管,在沸水浴上加热回流2h,冷却 后用水稀释至500mL。 60g/L 偏磷酸溶液。 1 mol/L碳酸钠溶液:称取无水碳酸钠53g,加水溶解并稀释至500mL。 95%和75%乙醇溶液。 四、实验步骤 1、标准曲线的绘制 按下表编号,分别加入试剂 于50mL容量瓶,加完后,剧 烈 振摇,以蒸馏水稀释至刻度,充分混合,于30恒温箱中放置 , 1.5h后,用分光光度计在波长680处测定吸光值,并 绘制标准曲线。,2、样品测
3、定 果实去皮,迅速称取50g,加入95%乙醇 50mL、偏磷酸50mL、水50mL,置于高速组织捣碎机中打浆1min(或在研钵中研磨成浆状)。称取匀浆20于100容量瓶中,加75%乙醇40mL,在沸水浴中加热20min,冷却后用75%乙醇稀释至刻度。充分混合,以慢速定量滤纸过滤,弃去初滤液。 吸取上述滤液2置于已盛有25mL蒸馏水、2.5mLF-D试剂的50mL容量瓶中,然后加入,剧烈振摇后,以水稀释至刻度,充分摇匀(此时溶液的蓝色逐渐产生)。同时做空白试验。 于30 恒温箱中放置后,用分光光度计在波长处,以试剂空白调零,测定吸光值。,四、结果计算式中: x样品中单宁的质量分数,%; c 比色
4、用样品溶液中单宁的含量(由标准曲线查得 ),g; m 样品质量,g; K 稀释倍数,如按上述方法取样50时,K=(20/200)(2/100)=1/500 五、注意事项 1、样品处理时要尽快进行,以免单宁氧化而造成误差。 2、维生素C也能与F-D试剂作用产生蓝色,因此当样品含有维生素C时需要进行校正,1维生素C相当于0.8单宁酸。,方法二、EDTA络合滴定法,一、 实验目的 了解单宁的性质及熟练掌握单宁含量的测定方法二、实验原理 根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质,在样品提取液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液,待反应完全后,再用EDTA标准溶液滴定剩余的,根据EDTA标准溶液的消耗量
5、,可计算出样品中单宁的含量。 三、材料、仪器与试剂 1、材料: 香蕉(未熟透)5g 2、仪器:容量瓶 电子天平 研钵 碱式滴定管,3、试剂:1.000 mol/L醋酸锌标准溶液:准确称取Zn(Ac)2H2 O 21.95g,用水溶解后定容至100mL。0.0500 mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA)标准溶液:准确称取乙二胺四乙酸二钠9.306g,溶解于水,并用水稀释至500mL.pH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液:称取54gNH4Cl 加水溶解后加入浓氨水350mL,用水定容至1000mL。铬黑T指示剂:称取0.59铬黑T,溶于10mL pH=10的NH3-NH4Cl缓冲溶液中,用95
6、%乙醇定容至100mL。四、实验步骤 1.样品处理 称取切碎混匀的样品510g,置于研钵中,加少许石英砂研磨成浆状(干样品经磨碎过筛后,准确称取12g),转入150mL锥形瓶中,用50mL水分多次洗净研钵,洗液一并转入锥形瓶中,振动、提取1015min.2.络合沉淀 在100mL容量瓶中,准确加入Zn(Ac)2标准溶液5mL、浓氨水3.5mL,摇匀(开始有白色沉淀产生,摇动使沉淀溶解)。慢慢将提取物转入容量瓶中,不断振摇,在35水浴中保温,2030min.冷却,用水定容至100mL,充分混匀,静置、过滤 (处滤液弃去)。 3.滴定 准确吸取滤液10mL,置于150mL锥形瓶中。加水40mL、N
7、H3-NH4Cl缓冲溶液12.5mL、铬黑T指示剂10滴,混匀。用0.0500mol/L的标准溶液滴定,溶液由酒红色变为纯蓝色金额为终点。,四、注意事项1.单宁遇Fe3+会发生颜色反应,因此处理样品时,不能与分歧接触,切碎样品应采用不锈钢刀。2.单宁容易被氧化,样品处理后应立即进行测定。同时要注意控制加热温度,加热过程中要加些摇动数次,意识反应完全。,结果计算,式中: 样品中单宁的质量分数,()标准溶液的浓度,吸取()标准溶液的体积,mLEDTA标准溶液的浓度, V2滴定时消耗标准溶液的体积, mL0.1556由实验得出的比例常数,样品质量, 10分取倍数,及样品络合沉淀后定容至100mL,吸
8、取其中的1/10进行滴定。,方法三、高锰酸钾法,一、目的 了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法 二、原理 作为多酚,单宁是一种强还原剂,极易被氧化剂氧化,还可被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂,根据样品中单宁可以被活性炭吸附,测定样品液用活性碳吸附前后的氧化值之差,计算单宁物质的含量。 三、材料、仪器与试剂 1、材料:香蕉(未熟透) 2、仪器 :天平 研钵 烧杯(50、100mL) 漏斗 滤纸(15)2张 刻度试管(5、10mL),三角瓶(100mL) 量筒10mL 25mL碱式滴定管 容量瓶 100mL 恒温水浴锅50 3 、试剂 0.01 mol/L KMnO4 标准溶液:称取约1
9、.60g KMnO4溶于1000mL蒸馏水中,盖上表面皿,加热至沸并保持微沸状态约1h。冷却后,放暗处约一周后用垂熔玻璃漏斗或玻璃丝过滤。将滤液转至棕色瓶内暗处保存。用NaC2O4标定KMnO4 。 2.5 mol/L硫酸溶液:取138.8mL浓硫酸稀释至1000mL。 活性炭 四、操作步骤 1、称取5g样品在研钵中研磨成匀浆,用漏斗转移容量瓶定容至 100mL,混匀后用干燥滤过滤,保留滤液。2、吸取样品滤液5.0mL,于100mL三角瓶中,加10mL水和5mL 2.5 mol/L H2SO4,混匀,微热(50)5min后用0.01 mol/L KMnO4 标准溶液滴定至淡粉色维持30s不褪色
10、即为终点,记下消耗的体积V1,重复一次做两个平行样。3、吸取样品滤液5.0mL,于100mL烧杯中,并加3g活性炭,加热搅拌10min,过滤用少量的热蒸馏水冲洗残渣,收集的滤液中加2.5 mol/L硫酸5mL,同样用0.01 mol/L KMnO4 标准溶液滴定至终点,记下消耗的体积V2,重复一次做两个平行样。,式中: CKMnO4 摩尔浓度,mol/L V1滴定样品消耗KMnO4 的毫升数,mL V2活性碳吸附单宁后所消耗的KMnO4的毫升数,mL W样品克数,g 0.04161mL 0.01 mol/L KMnO4 溶液相当于单宁的毫克数,mg,六、记录实验结果,七、注意事项,1、过滤时由于溶液粘度大,过滤缓慢,只保留接下来的10mL滤液,以部分代整体。且过滤时要用干燥滤纸。2、开始滴定时反应速度慢,待溶液中产生了Mn2+后,由于Mn2+的催化作用,加快了反应速率,故能顺利地滴定到呈现稳定的淡粉色为终点,因而此反应称为自动催化反应,稍过量的滴定剂本身是紫红色即显示终点。,单宁(tannin)是涩味(acerbity)的重要代表物,食品化学分析中有多种测定单宁含量的方法。,