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1、实验二 细菌的革兰氏染色法 细菌的芽孢染色法,革兰氏染色,一、目的和要求 1.了解革兰氏染色法原理及其在细菌分类鉴定 中的重要性。 2. 掌握革兰氏染色的基本步骤。,二、原理 G+、G-细菌的细胞壁成分和结构不同。 G+的CW主要有肽聚糖形成的网状结构组成，在染色过程中，当用95%乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，细胞壁通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞壁内而不易脱色，因此呈蓝紫色。 G-的细胞壁中肽聚糖含量低，脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物容易被乙醇抽提出来而脱色，然后又被染上了复染剂的颜色，因此呈现红色。,四、操作
2、,三、 菌种： 大肠杆菌Esherichia coli 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 染液：革兰氏染液，,具体步骤 制片 固定 初染（结晶紫染液）1-2min 水洗 媒染（碘液）1min 水洗 脱色（95%乙醇至无色） 水洗 复染（番红复染6-8 min/或复红染液1-2 min ） 水洗 干燥 镜检 五、实验报告简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。,革兰氏染色的关键环节 涂片不宜过厚，以免脱色不完全，造成假阳性。 乙醇脱色时间 菌龄：应选择活跃生长期的幼培养物作革兰氏染 色。培养时间过长，或死亡及部分自溶，改变 了细菌细胞壁的通透性，造成阳性菌的假阴性反应。 火焰
3、固定不宜过热 媒染剂的作用 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或 吸附力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使之 不易脱落。,芽孢染色法 一、目的和要求 1.学习并掌握芽孢染色的基本原理 2. 初步了解芽孢杆菌的形态特征,二、原理 用着色力强的染色剂孔雀绿在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可以进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而进入芽孢一经着色则很难被水洗脱色。当用复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更容易区分。,三、 菌种： 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis培养物 染液：孔雀绿水溶液、番红水溶液,四、操作步骤 常规制片 孔雀绿经微波炉加热染色25秒 水洗 番红复染3-5 min 水洗 镜检五、实验报告 绘图示枯草芽孢杆菌的形态特征,革兰氏染色：制片 固定 初染（结晶紫染液）1-2min 水洗 媒染（碘液）1min 水洗 脱色（95%乙醇至无色）水洗复染（番红复染6-8 min/或齐氏复红染液1-2 min ） 水洗干燥 镜检 简述各菌株的染色结果，并分别绘图示其形态特征。 大肠杆菌Esherichia coli , 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 芽孢染色：常规制片 孔雀绿经微波炉加热染色25秒 水洗 复染(番红水溶液）6-8 min 水洗 镜检,
