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1、,分析两种互补的人巨细胞病毒BECN1/Beclin 1结合蛋白抑制自噬的作用Analysis of the role of autophagy inhibition by two complementary human cytomegalovirus BECN1/Beclin 1-binding proteins,CONTENTS,01,自我介绍,02,文章特色,人巨细胞病毒在感染早期激活自噬，随后抑制自噬，其中两种蛋白质TRS1和IRS1，在抑制自噬方面发挥作用。,本文利用病毒重组技术研究了TRS1和IRS1作为HCMV自噬调控因子的机制。,Impact Factor:11.100,03,
2、内容及观点,自噬,自噬是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜形成自噬体，与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物。自噬主要参与细胞内大分子物质的循环及再利用、受损细胞器的清除，在维护细胞内环境稳态方面起重要作用。,Introduction,人巨细胞病毒(HCMV),人巨细胞病毒（human cytomegalovirus）是一种普遍存在的机会性病原体，为疱疹病毒组DNA病毒。HCMV在我国广泛流行，在大多数免疫正常个体呈无症状感染，而在免疫抑制个体、胎儿和婴幼儿可出现明显病症。,在孕妇中，原发或新的HCMV感染均可引起新生儿宫内感染或围产期感染，导致胎儿畸形，智力低下或发育迟缓等
3、。,真核细胞翻译起始因子 2AK2（EIF2AK2/PKR）,真核细胞翻译起始因子 2AK2 (EIF2AK2)最初发现是一个病原识别分子，其N 末端能和双链RNA 结合诱导 C末端催化区域活化。该蛋白可以限制病毒和细胞的mRNA在培养细胞中的翻译过程。,Introduction,Beclin1 基因也称 BECN1 基因，是酵母自噬基因 ATG6 的同系物，也是哺乳动物参与自噬的特异性基因。BECN1 是目前唯一被证实的哺乳动物“自噬基因”，是自噬的直接执行者。,BECN1基因,Cells and virus,Plasmids,Pharmacological modulators of au
4、tophagy（自噬的药理调节剂）,Antibodies,Materials,Coimmunoprecipitation assays,Immunoblot analysis,Immunofluorescence analysis,Optimized automated quantification of GFP-LC3 dots by high throughput microscopy（优化自动定量的高通量显微镜检测GFP-LC3斑点）,Virus production,Methods,Lentiviral delivery of shRNA,Statistics,01,02,03,04,
5、05,06,07,Results 1_ IRS1和TRS1均抑制饥饿诱导的自噬,Figure 1. Inhibition of starvation-induced autophagy by ectopic expression of TRS1 and IRS1.,Results 2_ IRS1和TRS1独立于EIF2AK2抑制自噬,Figure 2. IRS1 and TRS1 inhibit autophagy independently of EIF2AK2.,Results 3_ IRS1和TRS1通过其N端结构域与BECN1相互作用来抑制自噬,Figure 3. IRS1 inter
6、acts with BECN1 and inhibits autophagy via its N-terminal region.,Results 4_ IRS1和TRS1均参与了感染过程中自噬的控制,Figure 4. IRS1 and TRS1 are involved in the inhibition of autophagy after HCMV infection.,Results 5_ 缺乏BECN1 结合域的TRS1突变病毒不能控制自噬,Figure 5. The BECN1-binding-deficient TRS1 mutant virus does not inhibi
7、t autophagy.,Results 6_TRS1突变的HCMV重组病毒与BECN1结合失效，但不存在生长缺陷,Figure 6. Characterization of a HCMV recombinant virus containing a mutation in TRS1 that abrogates binding to BECN1.,Results 7_自噬的抑制使病毒的产量减少,Figure 7. Autophagy affects HCMV infection.,04,启发与体会,这篇文献证明了HCMV依赖于病毒蛋白的合成可以阻止自噬体的形成和成熟。之前已发现病毒蛋白TRS1具有抗自噬功能，而与TRS1有同源区域的IRS1也可以减少自噬体的积累。根据几个自噬活性的参数，我们证明了饥饿和感染细胞的自噬同时受TRS1和IRS1蛋白抑制。HCMV是否破坏自噬体的形成和成熟以避免某些细胞类型的降解，并利用自噬机制为自己谋利？事实上，最近的研究已经证实，一些DNA病毒利用自噬体或自噬过程来帮助它们的病毒生命周期。有趣的是，现在有研究认为自噬的抑制可用于癌症和神经退行性疾病的治疗。,
