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1、胡萝卜中色素的分离及鉴定,一实验目的1.学习从胡萝卜中提取分离胡萝卜素的原理和方法2.使用色谱柱和纸色谱的实验操作,胡萝卜中含有丰富的天然色素，因其能在黄色到红色的范围内为相关的食品饮料提供红色素。胡萝卜素是橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂。 胡萝卜素有-胡萝卜素，-胡萝卜素，-胡萝卜素，-胡萝卜素，-胡萝卜素，西红柿红素，黄体素等许多异构体。 其中-胡萝卜素在胡萝卜素中分布最广，含量最多。-胡萝卜素在胡萝卜的根里与-胡萝卜素共同存在，含量一般较少。 -胡萝卜素在生物体内的分布则有限。,二实验原理,-胡萝卜素（C40H56）,1. 溶剂浸提法 根据物质
2、的相似相溶原理，使色素物质溶解而进入溶液，这是一种固一液萃取过程，溶剂渗透到原料颗粒内部含有色素的细胞组织内，色素被溶解，再向提取液主体扩散。胡萝卜素这种脂溶性色素多用非极性溶剂如氯仿、石油醚等提取。2. 柱色谱法 在柱色谱装置中，柱内装有“活性”固体（固定相）如氧化铝或硅胶等，液体样品从柱顶加入，流经吸附柱时即被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入洗脱溶剂冲洗，由于固定相对各组分吸附能力不同，以不同速度沿柱下移，形成若干色带。再用溶剂洗脱，吸附能力最弱的部分随溶剂首先流出，分别收集组分。3. 微波提取法 微波萃取采用高频电磁波穿透被萃取物质，从而使得细胞内部温度迅速上升，细胞内部液态水份汽化产生的
3、压力将使细胞膜和细胞壁急剧破裂，形成微小的孔洞，使可溶性物质快速溶出并分散于适当的溶剂中，从而增加被萃取色素的提取率。,提取方法,4. 超声波提取法 超声波提取法的原理是超声波可在液体中产生空穴作用，而空穴作用产生的冲击波和射流可以破坏植物细胞和细胞膜结构，从而增加细胞内容物通过细胞膜的穿透能力，有助于天然色素的释放与溶出。超声波使提取液不断震荡，有助于溶质扩散，同时超声波的热效应使水温升温，对原料有水浴作用。5. 超临界流体萃取法 超临界流体萃取是一种新型的萃取分离技术。该技术是利用流体(溶剂)在临界点附近某一区域(超临界区)内，它与待分离混合物中的溶质具有异常相平衡行为和传递性能、且它对溶
4、质溶解能力随压力和温度改变而在相当宽的范围内变动这一特性而达到溶质分离的一项技术。6. 酶解水提法 利用纤维素酶和果胶酶破坏植物细胞壁提取类胡萝卜素，同时还可以以超声波辅助提取。超声波也能起到帮助破碎细胞壁的作用，以加快提取速度、节省成本。,提取方法,胡萝卜素的理化性质：,(1)橘黄色结晶；,化学性质比较稳定,(2)不溶于水、,微溶于酒精、,易溶于石油醚等有机溶剂,3、实验室提取方法：,萃取法,石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯、四氯化碳,几种水不溶性有机溶剂的沸点：,90-120 77 35 80 76,选择石油醚。石油醚沸点最高，在加热萃取是不易挥发，且对胡萝卜素有较好的溶解性，最适合最溶剂。,主
5、要因素：萃取剂的性质和使用量,原料：颗粒的大小、紧密程度、含水量,环境：温度、时间等,原料颗粒小、水分少、萃取温度高、时间长,效果好,影响萃取的因素,胡萝卜素提取过程,胡萝卜,粉碎,干燥,萃取,过滤,浓缩,胡萝卜素,原料颗粒小，水分少，萃取效果好。,除去萃取液中的不溶物,1、萃取装置2、影响因素,鉴定：纸层析法,实验步骤：原料加工： 取50g新鲜胡萝卜，清水清洗，沥干、粉碎、烘干。原料装填： 将胡萝卜粉与20mL石油醚装入蒸馏瓶。加热萃取： 安装回流冷凝装置，沸水浴加热萃取30min。过滤： 将萃取物过滤，除去固体物，得到萃取液。浓缩： 安装蒸馏装置，加热萃取液，萃取剂挥发，得到胡萝卜素。,注意事项：烘干胡萝卜时，温度过高、时间过长，胡萝卜素会分解。,产品检测,1.纸层析鉴定 点样层析后，若发现在滤纸上出现多个不同高度的色素点样。如果则说明提取到的胡萝卜素含杂质。2. 分光光度法 在200-800nm的波长范围内，以氯仿为空白溶液，对10 g/mL的标准溶液进行吸收度的测定。若发现在430-460nm波长处有最大吸收，则说明产品中含胡萝卜素。,
