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1、色谱柱的选择与维护 魏少勇 15920467889,广州菲罗门科学仪器有限公司,色谱柱的选择与维护,公司简介如何选择色谱柱A、固定相的选择B、PH的选择如何维护色谱柱,广州菲罗门科学仪器有限公司,中国全权总代理,广州菲罗门科学仪器有限公司,广州菲罗门科学仪器有限公司,我们的宗旨: 以最真诚和迅速的态度替用户提供优质服务,解决分析的问题和需要,1982 成立于美国加州,提供一系列非常完整的色谱柱,极少数专门提供色谱耗材公司-液相和气相,免费提供超过10000应用谱图,免费提供技术支持,免费提供技术资料,2004 Labvision HPLC Column Report,2004年一月到六月Lab
2、vision调查美国1200实验室结果,使用柱子数量的比例Phenomenex25%W22.5%A7.7%S7.6%其他 5% 以下,如何选择适当的色谱柱,理想的柱子,可以适用于分析所有的化合物,永远不会坏理想分离度,决定峰分离度的三个要素,峰保留时间,选择性(出峰的顺序),柱效,如何得到最理想的分析结果,流动相,被分析物,和固定相三者之间的作用影响峰保留时间和峰分离性.峰保留时间短一般峰型较好,但分离可能不理想.所以为了调节最理想的分析结果,可以改变下列的一项或数项条件: 流动相 固定相 pH 温度,固定相的选择,疏水性的选择,极性的选择,苯基的选择,固定相疏水性考虑的要素,键合相的种类 (
3、C18, C8, Phenyl, etc),表面积,键合相的键合率,Luna C18(2) 月神,品质可靠,世界畅销的 C18 柱,重复性高 可以同时提供 3个不同的批次的柱子,Luna C18(2),Ginseng RootColumn:Luna 5 m C18 / ODS (2)Dimensions:150 x 4.6 mm IDElution Type:GradientEluent A:Acetonitrile/water (15:85)Eluent B:Acetonitrile/water (80:20)Flow Rate:1.5 mL/minTemperature:25 CDetec
4、tion:UV-Vis Abs. Variable Wave. 205 nm,App ID 1125,Luna C8(2) & C5,减少疏水性化合物的保留时间,减少分析的时间,Synergi Max-RP,疏水性和 C18柱类似 但这是一支C12柱,提供比C18柱更尖的柱峰,尤其是分析碱性化合物,Synergi Max-RP,Basic Drugs at Neutral pH,疏水性的比较,C18 phases,C8 phase,300 C18 phase,极性选择性的考虑,首先考虑 固定相的极性封尾,封端基团 分析物的极性官能基 之间的作用,极性选择性,如何增加极性的选择性 极性基团封端
5、极性基团镶嵌 苯基,极性选择性,Columns: Luna 5m C18(2)YMC-Pack 5m Pro C18Synergi 4m Polar-RP (Ether-linked Phenyl)150 x4.6mmMobile phase:75:25 Methanol:waterFlow rate:1 mL/minComponents:1. Estrone2. Estradiol,极性选择性,Synergi Max-RP - C12Synergi Hydro-RP - C18Synergi Fusion-RP C18Synergi Polar-RP Phenyl,Synergi,Silic
6、a Advantage Balancing Efficiency & Backpressure,Linear Velocity (mm/sec),Plate Height (H),5,4,3,Flow Rate (mL/min),Pressure Drop (Bar),higher efficiencies,lower backpressures,Synergi,Synergi,Synergi Max-RP,与C18柱性能类似的C12柱,Synergi Polar-RP,保留极性和苯基化合物,100% 水溶液稳定,增加极性的选择性,Synergi Hydro-RP,疏水性非常强.,极性封端10
7、0%水溶性稳定,增进极性的选择性,Synergi Hydro-RP VS. Luna C18(2),Synergi Hydro-RP,Synergi Hydro-RP,Synergi Max-RP,Mobile Phase:A: 20mM KH2PO4, pH 4.6B: AcetonitrileGradient: A/B (95:5) to A/B (65:35) in 15 minFlow rate: 1.5 mL/minSample:1. Morphine2. Hydromorphone3. Codeine4. Nalorphine5. Oxycodone,Synergi Hydro-R
8、P,Synergi Fusion-RP,增加极性的选择性同时减少疏水性的分析时间,在水溶液中100%稳定 在LC-MS下面基本无流失,Running Conditions,Mobile phase: 75:25 20mM Potassium phosphate pH 2.5: AcetonitrileFlow rate: 1.5 ml/minTemperature: AmbientDetection: 210nmInjection: 1. Maleic acid2. Chlorpheniramine 3. Triprolidine 4. Diphenhydramine,Synergi Fusi
9、on-RP 4 80,一般的 C18柱,极性增大,疏水性减少,苯基的选择性影响,被分析物和固定相之间产生的作用,LunaPhenyl-Hexyl,使用甲醇可以增加作用效果,Luna Phenyl-Hexyl,具有疏水性和苯基双重的选择性,重复性高和稳定的苯基固定相,Luna Phenyl-Hexyl,Green Tea(绿茶)Column: Luna 5u Phenyl-HexylDimensions: 250 x 4.6mmMobile Phase A:0.2% Acetic acid in Water/Acetonitrile (91:9)B:Water/Acetonitrile (20:
10、80)Gradient: 100%A to t=25min, (68:32) t=25min to t=35min, hold 100%B for 10 min.Flow Rate: 1ml/minTemperature: 350C,App ID 14436,苯基的影响,Columns: Luna 5m C18(2) 150 x4.6mmLuna5m Phenyl-Hexyl 150 x4.6mmSynergi 4mm Polar-RP150 x4.6mmMobile phase:50:50 Acetonitrile:20mM Potassium phosphate pH 2.5Flow ra
11、te:1.0 mL/minComponents:Acidic, aromatic compounds 1. Indoprofen2. Ethyl paraben3. Naproxen4. Diflunisal5. Indomethacin6. Ibuprofen,C18(2)Phenyl-HexylPolar-RP,苯基的影响,H的影响,当选择流动相的pH时,我们必需考虑到pH对分析物和柱子两者的影响,H对柱子的影响,即使键合完美,封端完好,硅胶表面还是会存在Si-O-H的微酸游离基 pKa3.5,如果流动相的pH是4以上,此 Si-O-H的游离基会脱氢, 成为带负电的Si-O-(这会造成和分
12、析物之间的极性反应,而造成峰拖尾),如果流动相的pH是8(或10)以上,硅胶会被破坏,造成柱子损害,H对分析物的影响,基本上,反相柱的峰保留时间长短,主要归因于疏水性的非极性反应.所以要增长峰保留时间,必需选择流动相的pH能够让分析物保持中性,对酸性分析物(pKa3-6),基本选择pH在 pKa以下,对碱性分析物(pKa9-11),基本选择pH在 pKa以上,对碱性分析物的分析建议,多数硅胶柱没法于高pH条件下稳定,所以一般分析碱性化合物时,会选择于pH1.5-3下进行分析.在此pH条件下,硅胶表面的游离Si-O-H会保持中性,减少离子间的二极反应,因而减少峰拖尾,峰型较好,但是在低pH条件下
13、,碱性化合物的极性增加,疏水性减少,如果要增加峰保留时间,流动相的有机溶剂比率必需减少,对碱性分析物的分析建议,在高pH条件下,碱性化合物可以保持中性,疏水性因而增加,但是如果峰保留时间太长,可以将流动相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间.增加选择分析条件的弹性,流动相的有机溶剂比率增加,以缩短保留时间外,并可以增进峰型(尖),但是问题是:如何在高pH (8以上)条件下分析?,高pH对碱性分析物的分析选择,使用高分子柱,使用最新技术突破的 双子星柱(GEMINI),Gemini C18 双子星柱,Gemini C18 双子星柱,在pH 1-12范围内很稳定,适用于酸,中,碱性化合物,特别是 分
14、析中,碱性化合物很理想,可以更有弹性的调节pH以得到合适的分析条件,Particle Technology,Polymer Silica Twin,Gemini C18,流动相pH的影响,pH 1 12 Stability,Gemini C18,pKa,pKa,总结,将固定相和被分析物之间的疏水性,极性,和苯基关系密切考虑以选择适当的柱子和分析pH范围,C18 phase,Phenyl phase,固定相的影响,Hydrophobicity Ranking,Phase Description & Column Fingerprint,Sorbent Characteristics & Appl
15、ication Use,选择柱子的绝佳参考资料,方法开发的绝佳参考资料,如何保护柱子和延长柱子的壽命,使用保护柱,柱子使用完后,立刻冲洗,样品前处理-过滤,固态萃取,尽可能每一种分析方法使用一支专门柱,5% 原理 C18 柱的基本冲洗方法,使用柱体积10倍的以下溶液冲洗,以0.1-0.2ml/min流速95/5 = 水:乙晴5/95=水:乙晴梯度冲洗-于分析结束后由5%乙晴增加到95%乙晴,保护柱套和柱芯,为何要使用保护柱,将样品中的颗粒和死吸附的 杂质拦截以保护昂贵的分析柱,可以增加柱子的寿命和保持柱效,一般的保护柱有何缺点,增加系统的死体积,峰变宽,保留时间改变,我们的保护柱套有何不同,通
16、用-适用于所有的柱子,直接与柱子连接几乎体积同时不改变峰保留,绝对不与流动相作用,使用容易,价格合理,SecurityGuard 适用于任何柱子,接头通用,使用容易,不会改变保留时间,十大应该试试我们产品的理由,柱子产品种类多,可选择性广,柱子重复性好,可同时提供不同批次柱子分析,每支柱子一律单独品管测试,保证质量,我们有保证退货政策,密切和用户合作,迅速解答客户问题,增进效率,色譜柱是我们的生命,我们必需比仪器厂家做的更好,于多数欧美国家销售第一,世界认可,有利出口检验,会根据客户需要,选择最适当的柱子,可以有条件的试用,价位合理,联络方法:,广州总部: 020-38785061/62/63
17、 上海代表处: 021-51611275/76北京代表处：010-64468935/36成都代表处：028-85194097/79华中办事处：027-87668497网站: ; ,谢谢,YMC Pack is a trademark of YMC, Inc. Xterra is a registered trademark of Waters Corporation. Synergi, Gemini, Luna, Prodigy and Jupiter are trademarks of Phenomenex Inc. Polar-RP is a registered trademark of Phenomenex,Inc. Phenomenex is in no way affiliated with YMC Inc. or Waters Corp.,
