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1、2022/11/25,荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸,实验化学3-2（仪器分析实验）,2022/11/25,1、实验目的（1）掌握荧光法测定药物中乙酰水杨酸的方法（2）了解Cary Eclipse型荧光光谱仪的基本操作（3）强化称量、移液、配溶液等基本操作,2022/11/25,实验原理,电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量；,激发态停留时间短、返回速度快的途径，发生的几率大，发光强度相对大；荧光：10-710 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级基态；磷光：10-310s；第一激发三重态的最低振动能级基态；,2022/11/25,2022/1
2、1/25,辐射能量传递过程,荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级基态（ 多为 S1 S0跃迁），发射波长为 2的荧光； 10-710 -9 s 。 由图可见，发射荧光的能量比分子吸收的能量小，波长长； 2 2 1 ； 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级基态（ T1 S0跃迁）； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 T1禁阻跃迁） S0 激发振动弛豫内转移系间跨越振动弛豫 T1 发光速度很慢： 10-310 s 。 光照停止后，可持续一段时间。,2022/11/25,溶液浓度与荧光强度的关系,有线性关系：荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率 ： If = Ia
3、由朗-比耳定律： Ia = I0(1-10- l c ) If = I0(1-10- l c ) = I0(1-e-2.3 l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 I0 l c = Kc,2022/11/25,分子产生荧光必须具备的条件1）具有合适的结构；2）具有一定的荧光量子产率。 荧光量子产率（）：,荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数有关，如外转换过程速度快，不出现荧光发射；,2022/11/25,仪器结构流程,测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。,基本流程如图：单色器：
4、选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器；光源：灯和高压汞灯，染料激光器(可见与紫外区)检测器：光电倍增管。,2022/11/25,荧光分析方法,特点1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高24个数量级；为什么？ 检测下限：0.10.1g/cm-3 相对灵敏度：0.05mol/L 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱；3）试样量少 缺点：应用范围小。,2022/11/25,仪器与试剂,仪器：Cary Eclipse荧光光谱仪，石英比色皿，容量瓶，移液管，玻璃注射器，漏斗，量筒，滤纸。试剂：乙酰水杨酸，水杨酸，乙醇，阿司匹林药片。,
5、2022/11/25,实验步骤,1、ASA和SA贮备溶液的配制（1）ASA贮备液的配制：称取0.4000g乙酰水杨酸溶于1醋酸-氯仿溶液中，用 1醋酸氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用；（2）SA贮备液的配制：称取0.750g水杨酸溶于1醋酸氯仿溶液中，用 1醋酸氯仿溶液定容于1000mL容量瓶中，摇匀，备用。2、ASA和SA激发光谱和荧光光谱的绘制将ASA和SA贮备液分别稀释100倍(分二次完成，每次稀释10倍)。用得到的溶液分别扫描ASA和SA的激发光谱和荧光光谱曲线，并分别确定它们的最大激发波长和最大发射波长。3、标准曲线的制作(1) ASA标准曲线的制作 用移液管分别准确移
6、取浓度为4.00 gmL-1的ASA溶液2、4、6、8、10 mL至5只50mL容量瓶中，用1醋酸氯仿溶液稀至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度.(2) SA标准曲线的制作 用移液管分别准确移取浓度为7.5gmL-1 的SA溶液2、4、6、8、l0mL至5只50mL容量瓶中，用 1醋酸氯仿溶液稀释至刻度，摇匀。分别测量它们的荧光强度,2022/11/25,4、阿斯匹林药片中乙酰水杨酸和水杨酸的测定 取5片阿司匹林药片磨成粉末，准确称取0.40mg用1醋酸氯仿溶液溶解，全部转移至100mL容量瓶中，用1醋酸氯仿溶液稀释至刻度。迅速通过定量滤纸干过滤，用该滤液在与标准溶液同样的测定条件下测量SA荧
7、光强度。 将上述滤液稀释1000倍(用三次稀释来完成)，在与标准溶液同样的测定条件下测量ASA荧光强度。,数据处理 1、从绘制的ASA和SA激发光谱和荧光光谱曲线上，确定它们的最大激发波长和最大发射波长。2、分别绘制ASA和SA的标准曲线，从标准曲线上确定试样溶液中ASA和SA的浓度，并计算每片阿斯匹林药片中ASA和SA的含量(mg)，将ASA测定值与说明书上的值比较。,2022/11/25,实验指导,1、溶剂用量控制在600mL，要求提高清洗效率，减少移取溶剂时的损失，以节约试剂，同时保护健康和环境。2、用加长的胶头滴管移取少量的试剂，切忌直接倾倒。3、容量瓶使用25mL，注意相应液体体积的改动4、要保证实验过程无水5、在做标准曲线时，在做每一个点前，一定要用这个点的溶液清洗比色皿至少三次，以保证能作出曲线。6、比色皿的检测面和放入检测腔的位置一定要固定。,
