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1、实验一 果酒中还原糖和总糖含量的测定,一、目的,1、掌握用直接滴定法测定还原糖的原理和方法；2、掌握用酸水解法测定葡萄酒中总糖含量的原理和方法；3、了解测定总糖含量的意义；4、了解葡萄酒国家标准。,二、原理,利用费林溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜沉淀的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的费林溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色，以示终点。根据样品消耗量求得总糖或还原糖的含量。,三、试剂,盐酸溶液（11）；费林溶液；标准葡萄糖溶液 2.5 gL；次甲基蓝指示液 10gL；氢氧化钠溶液：200 gL。,四、测定步骤,1、试样的制备 测总糖用试样：准确吸
2、取一定量的样品（V1）于100mL容量瓶中，使之所含总糖量为 0.20.4 g，加 5 mL盐酸溶液（11）.加水至 20 mL，摇匀。于 681水浴上水解 15 min，取出，冷却。用200 gL氢氧化钠溶液中和至中性，调温至 20，加水定容至刻度（V2）。测还原糖用试样：准确吸取一定量的样品（V1）于 100 mL容量瓶中，使之所含还原糖量为 0.20.4g，加水定容至刻度。,2 、 样品测定以试样代替葡萄糖标准溶液，参照费林试剂标定同样操作，记录消耗试样的体积（V3），结果按式（4）计算。测定干葡萄酒样品时，加入一定量样品水解液，正式滴定需用葡萄糖标准溶液滴定至终点。,五、计算,式中：X
3、总糖或还原糖的含量，gL；F费林溶液、各 5 mL相当于葡萄糖的克数，g；V1吸取的样品体积，mL；V2样品稀释后或水解定容的体积，mL；V3消耗试样的体积，mL；G葡萄糖标准溶液的准确浓度，gmL；V消耗葡萄糖标准溶液的体积，mL。,六、注意事项,1葡萄糖与斐林试剂的反应特别复杂，且随反应条件而变化，因此，不能根据化学反应方程式直接计算，而是用已知浓度的葡萄糖标准溶液标定的方法进行计算，或按编制的还原糖检索表来计算。在测定过程中要严格按照所规定的操作条件，如三角瓶规格、加热时间、滴定速度等。,2斐林试剂甲、乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜配合物长期在碱性条件下，会缓慢分解。,六、
4、注意事项,3滴定时必须在沸腾条件下进行，其原因：一是可加快还原糖与Cu2+的 反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧后又变为氧化型的蓝色。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。,六、注意事项,4滴定时不能随意摇动三角瓶，更不能把三角瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应液中。,六、注意事项,六、注意事项,5样品溶液预测的目的：一是本法对样品中还原糖浓度有一定要求，测定时样品溶液的消耗体积应与标定葡萄糖标准溶液时消耗的体积接近。通过预测可了解样品浓度是否合适，浓度过大或过小，应加以调整，才能提高测定结果的准确性；二是通过预测可知道样液大概消耗量，以便在正式测定时，预先加入比实际用量少1ml左右的样液，只留下1ml左右样液在后滴定时加入，以保证在1分钟内完成后滴定工作，提高测定的准确度。,七、思考题,1、根据测定步骤，正确完成实验的操作要点是什么？2、为什么滴定过程要保持沸腾？3、为什么对样品要进行预备滴定？,
