药品生物检定技术（项目二）ppt课件.ppt

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1、模块七 基因工程药物检测,一、检验岗位 药物检验工二、工作目标 掌握基因工程药物的检测原则和方法。三、操作准备 （一）职业形象：药品检验人员，应从思想上明确不合格药品的危害，不得有丝毫马虎。操作要严格按无菌操作进行。 （二）职场环境：无菌室清洁整齐，定期检查无菌室空气细菌情况 （三）参考资料：中国生物制品规程、中国药品检验标准操作规范、中国药典,模块七 基因工程药物检测,四、检定原则和方法（一）检定原则依据：中国生物制品规程规程对每个制品的检验项目、检验方法和质量指标都有明确的规定，质检人员必须严格按照规程对药物进行检定，以保证人民用药安全、有效。基因工程药物的检定随生产过程需要进行原液检定、

2、半成品检定和成品检定。检定项目可分为理化检定、安全检定和效力检定三个方面。,模块七 基因工程药物检测,（二）检定方法1、理化检定（1）外观检查：通过特定的人工光源检测药物的外观，其颜色、状态和加入蒸馏水后的澄清度应符该药物的规程要求。（2）化学检定：除水分检查项外，按规定加入一定量灭菌注射用水溶解后进行。pH值测定： pH值测定方法（电位法），玻璃电极酸度计测定 用两种标准缓冲溶液校正或核对，误差不得超过0.05 。,H测定仪由传感器和二次表两部分组成。可配三复合或两复合电极，以满足各种使用场所。配上纯水和超纯水电极，可适用于电导率小于3s/cm的水质（如化学补给水、饱和蒸气、凝结水等）的pH

3、值测量。,水分含量确定：用卡尔费休水分测定法，一般水分含量不得高于3.0% 。,其原理是仪器的电解池中的卡氏试剂达到平衡时注入含水的样品，水参与碘、二氧化硫的氧化还原反应，在吡啶和甲醇存在的情况下，生成氢碘酸吡啶和甲基硫酸吡啶，消耗了的碘在阳极电解产生，从而使氧化还原反应不断进行，直至水分全部耗尽为止，依据法拉第电解定律，电解产生碘是同电解时耗用的电量成正比例关系的。,模块七 基因工程药物检测,蛋白质含量测定：微量法 即Folin-酚法测定蛋白质含量 原理：磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应蛋白质中含有代酚基的酪氨酸，故有此反应Folin-酚法的灵敏度是双缩脲法的100

4、倍 纯度检查：非还原型SDS-PAGE法：经扫描仪扫描纯度应符合要求。 高效液相色谱法：波长280nm检测，应呈一个吸收峰，或主峰峰面积不低于总峰面积的百分比纯度规定。,模块七 基因工程药物检测,等电点测定：等点聚焦电泳法 蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的pH环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的正极泳动，在小于其等电点的pH环境中解离成带正由荷的阳离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的pH环境中，即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个有pH梯度的环境中，对各种不同等电点的蛋白质混合样品进行电泳，则在电场作用下，不管这些蛋白质分子的原始分布如何，各种蛋

5、白质分子将按照它们各自的等电点大小在pH梯度中相对应的位置处进行聚焦，经过一定时间的电泳以后，不同等电点的蛋白质分子便分别聚焦于不同的位置 。这种按等电点的大小，生物分子在pH梯度的某一相应位置上进行聚焦的行为就称为“等电聚焦”。等电聚焦的特点就在于它利用了一种称为两性电解质载体的物质在电场中构成连续的pH梯度，使蛋白质或其他具有两性电解质性质的样品进行聚焦，从而达到分离、测定和鉴定的目的 。,模块七 基因工程药物检测,分子量测定：还原型SDS-PAGE法,模块七 基因工程药物检测,电泳槽,SDS-PAGE，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基硫酸钠），SDS会与变性的多肽，并使蛋白带

6、负电荷，由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关，因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关，在达到饱和的状态下，每克多肽可与1.4g去污剂结合。蛋白上样缓冲液(SDS-PAGEloadingbuffer是一种以溴酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电上样缓冲液,用于常规的SDS-PAGE蛋白电泳样品上样。,模块七 基因工程药物检测,外源性DNA残留量测定：固相斑点杂交法或其他敏感方法测定宿主菌蛋白残留量测定：酶联免疫法残余抗生素活性：氨苄青霉素残留量测定法紫外光谱扫描：基因工程药物一般在277-280nm呈特征性最大吸收肽图分析：重组制品

7、肽图分析法分为酶切肽图分析法和化学裂解肽图分析法。N末端氨基酸序列测定：氨基酸序列分析仪测定。鉴别试验：分斑点免疫法和免疫印迹法。鉴别试验应为阳性。,模块七 基因工程药物检测,模块七 基因工程药物检测,氨基酸序列分析仪,紫外光谱仪,模块七 基因工程药物检测,2、安全检定无菌试验：A项细菌及真菌检查法。结果判断：无杂菌生长判为合格；发现杂菌生长可复试，复试样品应加倍。复试无杂菌生长判为合格，若仍有杂菌生长判为不合格。细菌内毒素检定：鲎（hu）试剂与细菌内毒素产生凝结反应的原理。 鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋

8、白原，能够准确、快速地定性或定量检测样品中是否含有细菌内毒素和（1,3）-葡聚糖激。目前，鲎试剂广泛用于制药、临床以及科研等领域，用于细菌内毒素和真菌葡聚糖检测。 将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180时，管内凝胶不变形，不从管壁脱落者为阳性，凝胶不能保持完整并从管壁滑落者为阴性。,异常毒性检测：小鼠试验项进行。热原质检测：将一定剂量的供试品静脉注射家兔，在规定期间内观察家兔体内体温升高情况。,模块七 基因工程药物检测,模块七 基因工程药物检测,3、效力检测效价检测： 效价：指某一物质引起生物反应的功效单位,可用理化方法检测,也可用生物检测方法测定。 生物制品活性（数量）高低的标志，通常采用生

9、物学方法测定。 用国家标准品校准确定校价，除个别品种外，一般校价应为标示量 的80%150%。比活性测定：按规程要求测定，应不低于各品种规定标准。 比活性：每个质量单位所含活性单位的数目。如每毫克蛋白质所含酶单位数。 标记分子中标记放射性的相对强度或非放射性标记物(如酶标记物)相对活性的表示方法。一般以单位质量所含放射性核素量(如所测得的放射性记数率)或酶的活性单位(如 U)等表示。,模块七 基因工程药物检测,（三）、检定注意事项：所用试剂均需分析纯卡尔费休水分测定法：Fischer试剂很不稳定，配置后应放置一周后再使用，所有操作在干燥环境中进行纯度测定：用SDS-PAGE法加样量应不低于5g

10、（银染法）或10g（考马斯亮蓝R-250染色）。分子量测定：除品种另有规定外，加样量应不低于1g。肽图分析：至少每半年检查一次。N末端氨基酸序列测定：至少每年检查一次。无菌试验：无菌试验用的培养基应先检查其本身的灵敏度，否者可能造成假阴性。细菌内毒素含量测定热原质试验,模块七 基因工程药物检测,五、基础知识1、基因工程药物：将生物体内生理活性物质的基因，利用重组DNA技术加以改 造，然后使其在细菌、酵母、动物细胞中大量表达的新型药物。2、基因工程药物的分类主要包括重组蛋白多肽药物和核酸类药物（1）重组蛋白多肽药物：重组细胞因子、重组人生长激素、重组人胰岛素、重组溶血酸药物、基因工程血液代用品、

11、重组可溶性受体等。重组人胰岛素 为重组DNA技术生产的由51个氨基酸残基组成的蛋白质，宿主细胞为大肠杆菌。按干燥品计算，每1mg含重组人胰岛素不得少于27.5单位。重组人胰岛素中残余宿主DNA和宿主细胞蛋白质为与生产过程相关的、潜在的特异性杂质，必须在生产过程中严格控制，其限度应符合有关规定。,人胰岛素的生产方法:,A. 化学合成法制人胰岛素 根据人胰岛素A链和B链的序列，由单个氨基酸从头合成。技术可行，但其生产成本奇高。,B. 化学转型法制人胰岛素 猪胰岛素与人胰岛素只在B链的C末端有一个氨基酸的差异，猪的为Ala，人的为Thr，可将猪胰岛素在体外酶促转化为人胰岛素。但工艺复杂，产品的价格不

12、菲。,C. 基因工程法制人胰岛素 1982年，美国Ely LiLi公司首先使用重组大肠杆菌生产人胰岛素，成为世界上第一个上市的基因工程药物。由基因工程菌合成的重组人胰岛素在体外胰岛素受体结合性能、降血糖作用、血浆药代动力学等指标上均与天然胰岛素没有任何区别。,模块七 基因工程药物检测,（2）核酸药物反义核酸药物 反义核酸是指能与特定mRNA精确互补、特异阻断其翻译的RNA或DNA分子。利用反义核酸特异地封闭某些基因表达，使之低表达或不表达，这种技术即为反义核酸技术。它包括反义RNA、反义DNA和核酶三大技术。反义核酶作为一种基因下向调节作用因子，在抑制一些有害基因的表达和失控基因的过度表达上发

13、挥着重要作用。 反义核酸药物是能根据碱基互补原则抑制、封闭或破坏靶基因，从而抑制一些有害基因的表达和失控基因的过度表达的反义核酸。,模块七 基因工程药物检测,非反义核酸药物 分为免疫调节剂CpG、DNA和诱饵核酸等 CpG表示核苷酸对，其中G在DNA链中紧随C后。CpG对很少出现在人类基因中。然而，在许多基因的启动子或转录起始位点区域周围，甲基化经常被抑制。这些区域包含浓度相对较高的CpG对，与染色体一起称作CpG岛，其长度通常在几百到几千核苷酸的长度内变化。 CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值。基因疫苗 即一些病原体基因，将其导入机体后刺激机体产

14、生特异的免疫力，以抵抗这些病原体的侵袭。将DNA表达质粒注入体内，通过表达相应编码蛋白而诱导机体产生特异性免疫应答。,模块七 基因工程药物检测,基因药物 基因工程药物是先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质，然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来，经过一系列基因操作，最后将该基因放入可以大量生产的受体细胞中去，这些受体细胞包括细菌、酵母菌、动物或动物细胞、植物或植物细胞，在受体细胞不断繁殖过程中，大规模生产具有预防和治疗这些疾病的蛋白质，即基因疫苗或药物。 在医学和兽医学中应用正逐步推广。,模块七 基因工程药物检测,3、基因工程药物的优点 可以克服利用天然生物材料生产药物的潜在危险可以大规模

15、生产满足临床需要利用基因工程技术可以改造内源生理活性物质，进一步提高其生物活性。可以降低药物成本，让更多的病人受益。可以生产体内不存在的生物大分子，扩大药物来源。,模块七 基因工程药物检测,模块七 基因工程药物检测,以干扰素为例： 当人或动物受到某种病毒感染时，体内会产生一种物质，它会阻止或干扰人体再次受到病毒感染，故人们把此种物质称为干扰素（Interfero,简称IFN），是1957年英国科学家多萨克斯和林德曼在研究流感病毒干扰现象时发现的。干扰素具有广谱抗病毒的效能，是一种治疗乙肝的有效药物，国际上批准治疗丙型病毒性肝炎的药物只有它。但是，通常情况下人体内干扰素基因处于“睡眠”状态，因而

16、血中一般测不到干扰素。只有在发生病毒感染或受到干扰素诱导物的诱导时，人体内的干扰素基因才会“苏醒”，开始产生干扰素，但其数量微乎其微。即使经过诱导，从人血中提取1mg干扰素，需要人血8000ml，其成本高得惊人。据计算：要获取1磅（453g）纯干扰素，其成本高达200亿美元。使大多数病人没有使用干扰素的能力。1980年后，干扰素与乙肝疫苗一样，采用基因工程进行生产，其基本原理及操作流程与乙肝疫苗十分类似。现在要获取1磅（453g）纯干扰素，其成本不到1亿美元。,模块七 基因工程药物检测,（二）常见基因工程药物介绍1、重组人干扰素（IFN）系列：干扰素是一类具有抗病毒、抑制细胞增值和免疫调节等生

17、物学活性的细胞因子。2、重组白细胞介素(IL)系列：白细胞介素是一类免疫调节因子。3、重组集落刺激因子（CSF）系列：集落刺激因子是一类刺激造血细胞集落形成的生长因子。4、重组促红细胞生成素（EPO）：促红细胞生成素是促进红细胞系列的增殖、分化和成熟的主要激素。5、重组碱性成纤维细胞因子（bFGF）：成纤维细胞因子是广谱的有丝分裂原，是形态发生和分化的诱导因子。6、重组生长激素（hGH）：生长激素是由垂体前叶分泌的刺激机体线性生长的激素。7、基因工程胰岛素（insulin）：胰岛素具有非常广泛的调节细胞代谢的生物学功能，是维持人体代谢正常和生存所必须的激素。,模块七 基因工程药物检测,8、基因

18、工程降钙素（CT）：降钙素是由哺乳动物甲状腺滤泡旁细胞或非哺乳动物的后腮体产生的、调节钙磷代谢、维持内环境稳定的激素。9、重组链激酶（rSK）：链激酶是一种抢救急性心肌梗死等疾病的特效药。10、重组组织纤溶酶原激活剂（t-PA）：组织纤溶酶原激活剂是一种高效特异性溶血栓药物。六、法规依据中国药典2010年版（二部）附录。附录XI D 热原检查法详见模板十法规依据附录XI E 细菌内毒素检查法详见模板十法规依据。附录XI H 无菌检查法详见模块四法规依据。,一、检验岗位：药物检验工二、工作目标：通过空气中浮游菌、沉降菌的测试，学会检测GMP（药品生产质量管理规范）中空气洁净度的微生物检测技术。

19、浮游菌：用计数浓度法收集悬浮在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。 沉降菌：用沉降法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。,模块八 GMP中的微生物检查,三、操作准备（一）职业形象：无菌操作，减少不必要的走动（二）职场环境：无菌室（三）检测材料 培养皿、培养基（普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可培养基）（四）器材、设备 浮游菌采样器、真空抽气泵、恒温培养箱（五）参考资料 中国药典、中国药品检验标准操作规范,模块八 GMP中的微生物检查,四、操作过程（一）采样计划和采样位置的确定1.制定采样计划的关键因素（1）关键区

20、域要比非产品接触区域有较多的监督。（2）对人员活动频繁处要进行严格的监督。（3）非肠道使用药瓶装置运作区域，主要为瓶塞碗中瓶塞的装置，药瓶灌装线上瓶子的补充、人员常规操作涉及的瓶子的消毒等，应加以监督。（4）采样频率应由该控制区域的重要性以及药品加工步骤所决定。（5）建立定期的微生物学监督程序。应特别注意对工作人员接触产品可能性增大的区域、无菌产品的无菌操作过程、终端灭菌产品等的定期监督。,模块八 GMP中的微生物检查,2.确定采样位置的因素 我国对医药工业洁净室和控制区中的浮游菌测试有国家标准（GB/T16293-1996和GB/T16294-1996）。在这两个标准测试方法中，制定了测试规

21、则，包括测试状态、测试人员要求、测试时间、采样点数量及布置、最少采样点的数目及采样次数都有明确规定。浮游菌最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况，具体要求见表。 在满足最少测点数的同时，还应满足最少培养皿数，见表。 洁净区采样点布置要考虑工作区测点位置离地0.81.5m。送风口测点位置离送风面30cm左右。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。,模块八 GMP中的微生物检查,（二）洁净厂房环境中微生物数测定方法和设备1.常见的几种空气采样设备（1）撞击式空气微生物采样器 安德森采样器较为典型，它由6个撞击器组合成一体，每一级实际是一个单级撞击器（圆盘），圆盘下放琼脂平皿，每圆盘间有密

22、封胶圈，再通过3个弹簧卡子把圆盘牢固地连在一起。 标准采样量：1ft3/min（英尺3/分）=28.3L/min1m31000L =1000dm3 捕获粒子范围：第一级7.0um、第二级4.77.0um、第三级3.3um4.7um、第四级2.1um3.3um、第五级1.12.1um、第六级0.65um1.1um,模块八 GMP中的微生物检查,模块八 GMP中的微生物检查,（2）离心式空气微生物采样器 离心式空气微生物采样器采用螺旋桨或者涡轮吸引空气进入仪器，是连续、强制采样，它几乎不受外界因素的影响，性能稳定，加上该仪器基于冲击原理，能定量地收集空气中的微生物，还能采到物体表面上的微生物，是代

23、替平皿沉降法的理想仪器。 优点：体积小、重量轻、噪声低、捕获率高、性能稳定、操作简单、便于携带、应用范围广使用方面突出的6条特点： 1)不同环境交替采样，不会造成交叉污染，即两次采样之间不必更换消毒蜗壳和叶轮 2）不仅能采到空气中的，还能采到固液体表面上的微生物； 3）采样方向灵活，可以任意方向采样 4）交、直流两用（用1号电池4节，也可用6V稳压电源） 5）噪声低，采样无干扰 6）采样时间短（最短0.5min）,模块八 GMP中的微生物检查,LWC-2,LWC-1,模块八 GMP中的微生物检查,（3）狭缝式采样器 它由附加的真空抽气泵抽气，通过采样器的缝隙式平板，将采集的空气喷射并撞击到缓慢

24、旋转的平板培养基表面上，附着的活微生物粒子培养后形成菌落，予以计数。,模块八 GMP中的微生物检查,狭缝式采样器,2.表面取样法（1）沉降法 把经过灭菌的琼脂培养基作为捕集用具搁置一定时间，捕集落在上面的微生物粒子，然后进行培养，计算其形成菌落。 特点：能直接测出落下菌引起的污染，不需专门的设备和电源。在某个范围内测量，可测出一定范围内的污染过程，优于其他任何一种悬浮粒子浓度测定设备。灵敏度优于9cm平板法。（2）扁盒法 将琼脂培养基紧压在检测表面上，使微生物粘附在培养基上，经培养计算菌落。该法把培养基注入容器内，并且一定要填满。使用时将培养基紧贴在被测部位的表面。对不规则表面，使用棉签法，它

25、适用于大小2430cm 的模板区域。培养基经一定温度和时间培养，检查活菌数。 棉签法:棉签涂擦采样,模块八 GMP中的微生物检查,3.浮游菌测试方法（1）测试规则 依据我国国家标准医药工业洁净室浮游菌的测试方法(GB/T 16293-1996)（2）测试方法 本方法采用计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基上，经规定时间的培养，在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落，然后进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室的洁净度。（3）测试状态 测试前，室温、湿度必须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内；浮游菌测试前，被测洁净室

26、已经经过消毒；测试状态有动态和静态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。,模块八 GMP中的微生物检查,（4）测试人员 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服；静态测试，室内测试人员不得多于2个。（5）测试时间 对单向流测试应再净化空调系统正常运行不少于10min开始；对非单向流，测试应再净化空调系统正常运行不少于30min后开始。（6）采样次数 每个取样点一般取样一次。（7）采样注意事项 对于单向流或送风口，采样器采样口应正对气流方向；非单向流，采样管口向上；布置采样点时，至少应离开尘粒教集中的回风口1m以上；采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。（8）记录 测试报告

27、中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态,模块八 GMP中的微生物检查,五、结果处理1.结果计算（1）用计数方法得出各个培养皿的菌落数（2）每个测点的浮游菌平均浓度的计算见下式 平均浓度（个/m3）=菌落数/采样量例1.某测点采样量为400L，菌落数为1，则平均浓度=1/0.4=2.5个/m32.结果评定 用浮游菌平均浓度判断洁净室空气中的微生物1）每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定的评定标准中关于细菌浓度的界限。2）若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新采样两次，两次测试结果必须合格。,模块八 GMP中的微生物检查,六、可变范围沉降菌的测试方法如下：1.

28、测试规则依据我国国家标准医药工业洁净室沉降菌测试方法（GB/T16294-1996）。2.测试状态、测试人员、测试时间3、采样点布置 采样点的布置可以同悬浮粒子测试点。1）工作区采样点的位置离地0.81.5m（略高于工作面）2）可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。4.记录测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差和测试状态,模块八 GMP中的微生物检查,5、结果计算1）用计数方法得出各个培养皿的菌落数2）平均菌落数的计算，见下式平均菌落数M=(M1+M2+Mn)/n 式中， M表示平均菌落数，M1表示1号培养皿菌落数， M2表示2号培养皿菌落数， Mn表示n号培养皿菌落数, n表示培养皿

29、总数。6.结果评定用平均菌落数判断洁净空气中的微生物1）洁净室内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准2）若某洁净室内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，两次测试结果均须合格。,模块八 GMP中的微生物检查,七、基础知识（一）空气洁净度 在制药工业的生产环境中，一般认为微粒少的洁净室，微生物含量也较少。因此，制药工业为减少微生物污染，各工序、各品种采用了不同的洁净级别。国内外有代表性的通用空气洁净度级别有三种制度。1.英制（粒/ft3），2.公制（粒/L），3.国际公制（粒/m3）4.我国的级别标准我国药品生产洁净室的空气洁净度标准由国家食品药品监督管理局于19

30、99年8月1日发布实施，见表。,模块八 GMP中的微生物检查,（二）洁净环境中微生物学警告水平和行动水平的建立 许多制药厂在实行GMP中，依据经验资料积累，对洁净环境中微生物污染监督参数使用两个水平，即警告水平和行动水平。 警告水平是依据各个净化厂房或生产步骤得到的经验和资料，一个合适的数值是95%置信度。它的意义是生产中净化厂房和生产步骤情况发生变化，但还未造成直接影响时发出警告。超过警告水平限度要及时监督调查，找出微生物数量增加的原因，但不必进行校正工作。 行动水平是批准产品的发放水平。超过此限度表示用这样生产步骤的药品微生物质量不能得到保证，超过水平必须立即调查，并进行校正。行动水平对于

31、不同的设备及不同生产的控制环境都应该是相同的，这样就可以保证控制环境的一致性。,模块八 GMP中的微生物检查,（三）模拟生产操作步骤微生物学评估 模拟生产操作步骤微生物学评估可采用培养基灌封试。必须在无菌生产批结束时立即进行，以证明批生产中无菌保证条件的状况。 培养基灌封试验经过3次模拟运转合格，该洁净室或控制环境的生产线微生物状况就算合格。 一般采用大豆消化酪素肉汤培养基进行灌封试验。 培养基无菌操作，灌封容器在20-25及30-35 ，各培养7天。 洁净室最重要的污染源是人员，污染率取决于无菌操作区操作者的操作活动。,模块八 GMP中的微生物检查,（四）微生物环境控制程序设计及影响执行程序

32、的关键因素1.微生物环境控制程序设计 药品生产企业应建立对洁净环境中微生物监督的程序，以便及时发现不利因素，采用有效的改正措施。2.影响控制程序的因素（1）对不同设施与环境应有相应的控制程序（2）培养的时间和温度 典型培养温度在22.52.5和32.52.5，培养时间4872h，时间和温度取决于占优势微生物菌丛或典型培养基的选择。（3）培养基灭菌方法 验证灭菌周期，无菌性及促生长性。（4）其他 一个适当黄精控制程序也应该包括适当的环境取样方法、取样位置的验证，对技术人员进行专门培训。取样器取样装置在任何方式中应不干扰无菌区域。充分远离产品，以便取样技术、取样装置、操作人员手臂产生的涡流不影响洁

33、净生产线或区域单向空气层流。,模块八 GMP中的微生物检查,（五）取样或微生物定量使用培养基和稀释液类型 用于洁净室和控制环境取样或微生物定量的培养基的类型有液体或固体的，选择哪一种取决于使用的检测方法和一起设备，通常用于一般性检测的固体培养基是大豆消化酪素培养基。对改良培养基，其效果必须经过验证，商品干燥培养基同样也必须对其效果经过验证。（六）洁净环境污染微生物的鉴别 用于监控洁净状态的采样检测，除了活菌计数外，也包括了对微生物的鉴别。从鉴别污染微生物可了解洁净室清洁、消毒步骤的有效性，特别是对消毒剂有效性评估有所帮助。微生物鉴别的结果也对调查污染源有用。 应重点检测洁净室关键区的微生污染情况。 无论用手工还是半手工，微生物自动鉴别系统、鉴别方法必须经过验证，并用标准指示微生物验证。,模块八 GMP中的微生物检查,