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1、,枯草芽孢杆菌生长习性 及其培养,主要内容,1.枯草芽孢杆菌的特性2适应生殖条件3.作用机理4.应用范围5. 斜面培养6.无菌操作,枯草芽孢杆菌特性,芽孢杆菌（Bacillaceae），细菌的一科，能形成芽孢（内生孢子）的杆菌或球菌。包括芽孢杆菌属、芽孢乳杆菌属、梭菌属、脱硫肠状菌属和芽孢八叠球菌属等。它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。芽孢杆菌bacillus 杆菌科的一属细菌。为好氧或兼性厌氧的杆菌，一般为革兰氏染色阳性。在某种环境下，菌体内的结构发生变化，经过前孢子阶段，形成一个完整的芽孢。芽孢对热、放射线和化学物质等有很强的抵抗力。,枯草芽孢杆菌：
2、,枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.70.823微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.60.91.01.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。,菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。,菌落,成份含量：,枯草芽孢杆菌及生物酶、维生素、微量元素等辅助剂，活菌数250亿/克。形状：浅黄色粉末,适应生长条件,相关试验结果
3、表明：该株枯草芽孢杆菌具有良好 的耐高温、耐酸性和耐胆盐能力，在90 水浴中处理10 min后其存活率接近80 %在pH等于2的人工胃液中处理6 h后存活率仍超过76 %在质量浓度为0.3 %的猪胆盐溶液中处理4 h后存活率超过90 %在含猪胆盐的培养基中，仍可以生长增殖。为微生物添加剂产品的开发提供了优良的菌种。,将枯草芽孢杆菌在90 水浴中处理10 min后其存活率接近80 %，说明枯草芽孢杆菌具有较好的耐高温性能。,当培养基初始pH为2和3时，枯草芽孢杆菌培养液OD600值始终约为0.3，当初始pH为4、5、6和7时，在培养12 h后OD600值接近。这说明，枯草芽孢杆菌在强酸性条件下生
4、长性能较差，在弱酸性和中性环境中生长旺盛。,OD600 测量细菌培养液在600nm处的吸光值，得到的OD600的数值如果在0.6-0.8之间，表明细菌处于旺盛生长的对数生长期，OD6003表明细菌已经饱和等。细菌的生长情况,可以通过测OD600来监测。细菌的生长比较好的时期是在OD600为1时,枯草芽孢杆菌在0.03 %0.3 %猪胆盐溶液中存活率均超过90 %，这说明，枯草芽孢杆菌对胆盐具有良好的耐受性。在不同质量浓度猪胆盐液体培养基中，枯草芽孢杆菌均得到了增殖，但增殖幅度不大，说明猪胆盐对枯草芽孢杆菌的增殖具有抑制作用，当猪胆盐质量浓度为0.3 %时，其抑制作用明显增加。,作用机理：,1枯
5、草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用2枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长3刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力4枯草芽孢杆菌菌体自身合成-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用5能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体内干扰素和巨噬细胞的活性。,6.枯草
6、芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。7.枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长。8.刺激动物免疫器官的生长发育，激活T、B淋巴细胞，提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力。枯草芽孢杆菌不仅在饲料中应该比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应用也相当广泛，是一种多功能的微生物。,应用范围：,枯草芽孢杆菌不仅在饲料中应用比较广泛，在污水处理及生物肥发酵或发酵床制作中应
7、用也相当广泛,是一种多功能的微生物.1 市政和工业污水处理，工业循环水处理，腐化槽、化粪池等处理，畜牧养殖动物废料、臭味处理，粪便处理系统，垃圾、粪坑、粪池等处理；2畜牧、家禽、特种动物及宠物养殖，水产养殖；3可以与多种菌种混配，在农业生产中具有重要作用。,注意事项：,1可与低浓度抗生素同时使用，不得与杀菌剂、消毒剂、化学药品、农药等同时存放使用。2若使用过量不会对动物造成任何伤害。初次使用时，环境突变时，动物患病时加倍使用。3包装开启后最好一次性用完，未用完密封保存。,菌种培养,斜面培养法菌种枯草芽孢杆菌培养基营养琼脂 33g/L，自然pH值仪器设备控温摇床、高压蒸气灭菌锅、电子天平、pH测
8、定仪、无菌操作台和紫外分光光度计。,制备培养基称取33g营养琼脂，蒸馏水1000ml，121灭菌30min。分装 按照实验要求，可将配置的培养基分装入试管内或三角瓶中。液体分装：分装的高度以试管高度的1/4左右为宜；分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶的一半为宜。固体分装：分装于试管中的应不超过试管的1/5，灭菌后制成斜面；分装三角瓶的量以不超过一半为宜。,加塞 培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，外边再用一道麻绳扎好。用记号笔注明
9、培养基名称，组别，配制日期。三角瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结扎好，使用时容易解开，同样注明。,灭菌将配置好且包扎完毕的固体、液体培养基及本实验涉及的试管、三角瓶等及400ml纯水于高压灭菌器中以0.14Mpa，121条件下高压蒸汽灭菌20分钟。斜面搁置将培养基冷却至50左右时放置斜面，斜面在试管的1/2处为宜，待斜面凝固后，放置于冰箱中待用。,接种接种到斜面培养基中，标注上日期等信息。放入恒温培养箱中培养作为一级种子。保藏斜面置于37的培养箱中，培养23天，观察菌种长势好坏，若菌种长势好则将其放入冰箱中保藏，若长势不好则需多次斜面转接。,无菌操作培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接
10、种环和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品，菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的接种必须是无菌操作。实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。,空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养器皿的时间应尽量短。 用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。 然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。 不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。,
