《实验大肠杆菌的培养和分离课件.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验大肠杆菌的培养和分离课件.pptx（39页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、实验大肠杆菌的培养和分离,什么是培养基？,三角瓶,培养皿,试管,液体培养基:扩大培养,工业生产。固体培养基:分离纯化,鉴定菌种,计数,保藏。,凝固剂:琼脂,培养基的配制,提供碳元素:主要是糖类,提供氮元素:蛋白胨、牛肉膏、尿素,维生素、氨基酸和含氮碱基,H2O,良好的溶剂,NaCl:维持一定的渗透压,LB 培养基的配制,LB固体培养基:蛋白胨 0、5g,酵母提取物 0、25g,氯化钠 0、5g,加水50 mL,琼脂 1g。调节pH 至7、6。,封口膜,菌落:单细菌的克隆,菌落:在固体培养基上,由单个细菌繁殖而来的一个肉眼可见的具有特定形状的子细胞群体。,霉菌,大肠杆菌,菌落的作用:鉴定菌种的重
2、要依据,菌落特征:菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等。,大肠杆菌,大肠杆菌:革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。,如何无菌操作？,高压蒸汽灭菌:培养皿、试管、三角瓶、枪头、玻璃三角刮刀、接种环、镊子。在121下灭菌15 min。,高压蒸汽灭菌锅,培养皿,三角瓶,玻璃三角刮刀,接种环,微量移液器,枪头,棉花塞、封口膜、牛皮纸或旧报纸、橡皮筋,不能用脱脂棉:易吸水,容易引起污染。,酒精灯和酒精棉球,灭菌:杀死所有微生物。消毒:杀死部分微生物(不包括芽孢和孢子)。,超净工作台,打开紫外灯和过滤风,灭菌30 min。点燃酒精灯酒精棉擦拭桌面酒精棉球擦手。,酒精灯火焰附近旁进行,灼烧灭菌,防止杂菌污染,用细
3、菌过滤器除菌:尿素加热会分解,用G6玻璃砂漏斗过滤。,什么是倒平板？,将灭菌后的固体培养基倒入已灭菌的培养皿中,冷却凝固后制成的培养基。,Step1:培养基的配制和灭菌,将50 mL LB液体培养基、50 mL LB固体培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌。,无菌水,培养皿用牛皮纸包扎,Step2:倒平板,在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基(冷却到60)倒入灭菌的培养皿中,置于水平放置上,并轻轻晃动,待凝固后形成平面。,超净台,Step3:接种后扩大培养,将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37摇床培养12 h 。,恒温摇床,Step4:平板划线分离,用接种环在培养大肠杆菌
4、的三角瓶中蘸取菌液一次,在固体培养基的平板上连续划线。将培养皿倒置,放在37 恒温箱中培养1224 h。,如何在平板上划线？,1次,2次,3次,4次,连续划线法,分区划线法,原因:随着划线次数的增加,菌数越来越少,最终在划线的末端出现由一个细菌繁殖而来的单个菌落。,为什么通过划线分离可得到单菌落？,原因:既能够使培养基表面的水分更好地挥发,又能够防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。,恒温培养时培养皿倒置,培养皿倒置,皿盖,皿底,恒温培养箱,Step5:菌种的斜面保存,将接种环将单菌落取出,用划线法接种在斜面培养基上,37培养24 h后,置于4冰箱中保存。,斜面培养基,试管斜面培养基的制作,方
5、法:将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中,灭菌后将试管斜放,令其冷却,固体培养基即成为斜面。,平板划线分离法,灼烧接种环,外焰,先灼烧后冷却:以免接种环温度太高,杀死菌种。,接种环冷却后,蘸取带菌培养物,在近火焰处,让带菌接种环在固体培养 基上划线,恒温培养箱中倒置培养,分区划线法,每次划线之前都要灼烧接种环。总是从上一次划线的末端开始划线。,稀释涂布分离法,用无菌吸管吸取1mL细菌培养液加入另一个盛有9mL无菌水的试管中,混合均匀,以此制成10-1倍的稀释液。,梯度稀释菌液:10-510-7倍,滴加菌液,用无菌吸管取0、1mL稀释度不同的菌液,加在培养皿的固体培养基上。,用玻璃刮刀涂布,玻璃
6、涂棒,将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧,待玻璃刮刀冷却后,在酒精灯旁打开培养皿,将菌液涂布到整个培养基表面。,将培养皿倒置,在37恒温箱中培养2448 h。,恒温培养箱中培养,恒温培养箱,结果:以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,倒平板,平板划线分离,练一练,识一识,稀释涂布分离,接种环,玻璃刮刀,例题:要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种,一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养,并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题:(1)对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养,一般用LB培养基,在培养基中为微生物
7、提供碳源、氮源和能源的物质主要是,为调节渗透压,要加入一定量的。为进行大肠杆菌的分离,还要加入 配制成固体培养基,并进行倒平板的操作。,蛋白胨和酵母提取物,氯化钠,琼脂,(2)获得纯净微生物培养物的关键是,为此,必须对培养器皿、接种用具和培养基进行严格灭菌。培养器皿和培养基一般采纳 法灭菌,接种环采纳灼烧法灭菌。同时在接种或倒平板操作时,除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着、手和实验空间进行严格清洁和消毒外,还必须 以防止空气中的杂菌污染。(3)大肠杆菌菌种的扩大培养一般采纳液体培养基,接种后将培养基置于37摇床振荡条件下培养12 h。菌种的分离一般在固体培养基上采纳法,并将培养皿以状态放置于适宜温度的恒温箱中,培养1224 h后,接种于固体斜面培养基上,37培养24 h后,得到的纯化菌种在条件下保存。,防止被杂菌污染,高压蒸汽灭菌,保证操作过程在酒精灯火焰旁进行,划线分离,倒置,将单菌落用接种环取出,4,感谢您的聆听！,
