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1、临床生化检验反应原理及报告的审核泸州市人民医院检验科 潘庭荣,主要内容,常见的生化反应原理检验报告审核普遍存在的问题检验报告审核的建议总结,终点分析法（平衡法） 连续监测法比浊测定法,一、常见的生化反应原理,终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小，对物质进行定量的一类分析方法。反应混合物进行一定时间反应后，达到平衡终点，即在显色反应处于稳定阶段时，监测其颜色对光的吸收强度，以此计算待测物浓度。分为一点、两点终点法,终点分析法,一点终点法,一点终点法：一点终点法的特点是使用一种或两种试剂。当样品和试剂混合后，待测物与试剂的物理化学反应达到终点时，测定吸光度，计
2、算待测物质的浓度。该法要求试剂本底颜色要深，该法具有代表性的试验有：总蛋白、白蛋白、镁测定,TP反应曲线,Mg反应曲线,二点终点法：一般是用双试剂，是自动化生化分析仪常用的一种方法。该方法的优点是可以消除样品、试剂的颜色、浊度以及一些干扰物质的影响。代表性的试验有葡萄糖等,两点终点法,Cre反应曲线,测定底物的消耗或产物生成的速度的化学方法称为连续监测法（又称动态分析法、速率法或动力学法）。在反应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化。以单位时间酶促反应初速度计算酶活力的大小和代谢物的浓度。,连续监测法,酶促反应进程曲线,酶促反应进程曲线,典型酶联法反应曲线,
3、AMY反应曲线,ALT反应曲线,通过检测物质对光的散射或透射强度来测定物质的方法称比浊法。比浊法可分为化学比浊法和免疫比浊法，免疫比浊法又分为透射比浊和散射比浊。全自动生化仪常用透射比浊法，常用于特种蛋白测定。其工作曲线为抛物线。,比浊测定法,比浊测定法,注意事项：抗原或抗体量（测定物）大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差。应维持反应管中抗体蛋白（底物）始终过剩。 易受到脂血的影响。,二、报告审核中的普遍问题,责任心不强，未对结果进行认真审核对检测仪器或试剂方法学不够了解专业知识欠缺，工作经验不足对仪器检测的结果及室内质控结果过于相信,三、报告审核的建议,结合临床资料审核结合分析项目间的内在
4、联系审核（专业知识）结合影响检验结果因素审核检验项目的方法学和线性检验标本的影响检验仪器性能影响结合当日检验结果总体趋势审核结果,结合临床资料,结合病人的性别、年龄、临床诊断、其他检查结果审核 例：某病人检测的TP为110g/L，该标本没有脂血等影响检测结果的因素 临床诊断：多发性骨髓瘤 另：胰岛素与低血糖、病人输注药物对结果的影响,检验项目间的内在联系,各检测参数间存在大小、比例、逻辑关系例：HDL-C+LDL-CTC、Dbil Tbil CK-MB CK(M+B) -HBDH LDH(H+M) 原发性甲亢：T3、T4 、TSH等,影响检验结果的因素,试剂线性范围： 了解检验项目试剂的线性范
5、围，对超过或低于范围的项目，必须进行相应的减量稀释或增量后重新测定。,线性范围,在实际工作中，用连续监测法会遇到检验结果为0或者负值的情况，此时不能盲目相信该结果低就出具低值报告，应查看其反应曲线例：某病人的尿液AMY检测结果为0U/L 其反应曲线如下图：,AMY反应曲线,AMY反应曲线分析,分析：由于测定物质浓度过高处理：对测定物质进行十倍左右的稀释再测定，直到反应曲线恢复正常结果才可靠,影响检验结果的因素,检测项目的方法学： 要了解该项目试剂采用的方法学： 例：某病人在测定心肌酶谱时，其CK:246U/L、 CK-MB:286U/L，标本无溶血等因素影响 其结果中CK-MBCK,检测项目的
6、方法学,分析：CK是由M和B两类亚基组成的二聚体，其构成为CK-MB(心型)约占0-3%、 CK-MM(肌型)约占97-100%、 CK-BB（脑型）约占0-1%,检测项目的方法学,CK-MB采用的检测方法为免疫抑制法 原理:正常人体中，CK同工酶中CK-MM CK-MB CK-BB,其中CK-BB含量极少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略CK-BB的基础上。采用抗体抑制其M亚基活性，使CK-MM失去活性，而CK-MB失去一半的活性。单测定B亚基的活性，其结果2即为CK-MB活性,检测项目的方法学,原因分析：由于在患轻度或中度脑损伤、脑 血管意外及脑手术后 、新生儿产程窒息造成 脑组织发生实质
7、性损害 的病人中，CK-BB会升高，这时该方法测定的CK-MB的活性相当于是CK-MB+2CK-BB的活性之和，造成 CK-MB活性假性升高,检测项目的方法学,为什么CK-MB 2CK不可能 该测定CK-MB活性=CK-MB+2CK-BB,如果CK-BB CK-MM,结果要乘2，即CK-MB+2CK-BB CK-BB+CK-MB+CK-MM,测定的CK-MB 活性 CK活性，但CK-MB 2CK不可能解决方法：其他方法测定CK-MB的质量,检验标本的影响,标本脂血会使反应浊度增加，透光度下降，吸光度增加，从而造成检验结果不准确。如TP、TG、UA显著增高，GGT显著下降或为0 标本溶血会使K+
8、、ALT、AST、LDH等检验结果显著升高抗凝剂的错误使用,仪器性能影响,仪器老化、故障、清洗管道堵塞、水质不纯等均会对检验结果造成影响光路老化：表现为ALT、AST等项目结果重复性较差水质不纯、反应杯清洗不干净：表现为无机物质结果不准,检验结果的总体趋势,即使质控在控，也要注意当日检验结果的总体的分布趋势如K+的参考区间为3.55.5，中值为4.5，如果当日结果大部分甚至全部低于4.5，即使当日质控在控，任要考虑结果是否偏低，应重新校准、质控后再测定 如在质控中 TC(-1S),HDL (+1S) ,LDL(+1S),虽然在控，如出现大部分HDL+LDL TC，也应考虑重新对三项目校标、质控后再测定,四、总结,不要盲目相信仪器检测的结果一定准确检验人员要增强对报告审核的责任心检验人员应加强对专业知识的学习和掌握,了解仪器的性能及各项目的方法学和反应原理对检验标本的状态要认真确认对有疑问或报警的结果要查看反应曲线加强与临床科室的沟通,谢谢！,
