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1、,酶联免疫分析法、基本原理和应用y,基本要求:了解免疫分析发展史,掌握抗原、抗体和免疫反应的原理,了解免疫分析法的分类,熟悉酶标记免疫分析法中使用的酶,熟悉 ELISA的原理,掌握 ELISA的固相载体、包被与封闭、稀释液、洗涤液、酶反应终止液及 ELISA法常用酶的底物系统,掌握 ELISA的酶联方法和试验方法,熟悉 ELISA反应条件的选择,掌握ELISA的定量计算,了解 ELISA的灵敏度提高途径熟悉 ELISA放大系统。了解化学发光分折的原理熟悉化学发光剂的种类,熟悉化学发光酶联免分析常用的标记酶和发光增强剂,熟恶生物发光酶联疫分析常用的生物发光反应体系,第七章酶联免疫分析法第一节酶联
2、免疫分析概述第二节光度酶联免疫分析第三节发光酶联免疫分析,第一节酶联免疫分析概述兔疫分析1、免疫分析发展史免疫分析( Immunoassay,IA)是利用待测物质(抗原或抗体)与其相对应物质(抗体或抗原)之间专一特异性反应而建立起来的一种高选择性分析方法。免疫分析主要基于用抗体(或抗原)作为选择性化学试剂以分析测定抗原(或抗体)及半抗原。宋代人工痘苗预防烈性传染病天花1971年第一届国际免疫学会议将免爱学与微生物分开发展成一门独立的学科。,第一节酶联免疫分析概述兔疫( Immunity)”一词源于 immunitas,原意是免除税赋和差役。研究早期免疫学多集中在抗体抗感染能力研究。20世纪中期
3、以后,人们逐渐开始对各种抗原、微生物的作用进行研究,发展出基础免疫学、临床免疫学、免疫学检测、医学免疫学等多个分支。现代免疫学将“免疫”定义为:机体对“自己”和异己”识别、应答过程中所产生的生物学效应的总和正常情况下是维持内环境稳定的y种生理性功y,第一节酶联免疫分析概述2、抗原、抗体与免疫反应抗原是能够引起免疫反应的分子免疫原性( ImmunogenicIty)指诱导刺激兔疫系统产生抗体或致敏淋巴细胞的能力。具有免疫原性的物质称为兔疫原( Immunogen)。免疫反应原性( Immunoreactivity)或抗原性(antigenIcity),指能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合,
4、引起免疫反应的性能。具备上述两种特性的物质为完全抗凉级具有免疫反应性的物质被称为半抗原( hapten,第一节酶联免疫分析概述抗体是能与抗原发生特异性结合的兔疫球蛋白。所有的抗体都是免疫球蛋白,但并非所有的免疫球蛋白都是抗体。例如无免疫活性的免疫球蛋白(如骨髓瘤蛋白)就不是抗体,尽管其结构与抗体相似。抗体主要存在于血清内,但在其他体液及外分泌液中也有存在抗原抗体分子之间存在着结构互补性和亲和性,使得抗原与相应抗体之间极易发生结合反应)种取应具有高特异性(即专一性)和可逆性。y,第一节酶联免疫分析概述抗原、抗体发生如下免疫反应Ag+Ab Ag-Ab该兔疫反应遵循可逆生物大分子相互作用的热动力学基
5、本原理,其反应式为AbAgI Ki二KAbelAg式中:Ab为游离的抗体结合位点的浓度;Ag为游离的抗原结合位点的浓度;AbAg为抗原体复合物的浓度;k为正反应速率常数为负反趣速塞常数;K为反应平衡常数(亲和常数yBy,第一节酶联免疫分析概述这种抗原-抗体反应既可发生于体内(iWvo),也可发生于体外( in vitro)。抗体主要存在于血清中,在抗原、抗体的检测中多采用血清做试验,所以体外抗原-抗体反应也称为血清学反应( serologic reaction)基于抗原-抗体反应的检测技术主要应用于以下几个方面:用已知抗原检测未知抗体用已知抗体检测未知抗原定性或定量检测体内各种大分子物9用已知抗体检测某些药物、激素等告种抗意物威,第一节酶联免疫分析概述酶标记免疫分析法及常用标记酶1、免疫分析法分类y,
