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1、当前国际市场水产品药残限量标准及检验技术要求,主要内容,一、国际市场水产品药残限量标准二、兽药残留检验技术,一、国际市场水产品药残限量标准,1、日本“肯定列表制度” 及其限量标准2、欧盟国家水产品药残限量3、美国水产品兽药残留限量,日本“肯定列表制度”限量标准,日本“肯定列表制度”的分析2003年5月30日，日本修改食品卫生法。2003年10月，公布了”临时最大残留限量标准“第一次草案。2004年8月，公布了“临时最大残留限量标准”第二次草案、“统一限量标准”草案 和“豁免物质”草案。2005年6月21日，日本正式向WTO成员通报了“临时最大残留限量标准” 、 “统一限量标准”草案和“豁免物质
2、”最终草案。2005年11月，批准“临时最大残留限量标准” 、“统一限量标准”草案 和“豁免物质”最终草案。2006年5月29日，正式实施“肯定列表制度”。,日本“肯定列表制度”限量标准,肯定列表制度”是日本为加强食品中农业化学品残留管理而采取的一项新举措。在该制度下，日本对所有农业化学品（个别豁免物质除外）在所有食品中的残留均制定了严格的限量要求： 对于日本认为有科学依据的则制定限量要求， 对于无科学依据的物质则采用0.01mg/kg的一律标准。,日本“肯定列表制度”限量标准,对于日本认为有科学依据的具体限量指标，共有数据67140条。其中现行标准10118条；暂定标准56752条；其他标准
3、为270条。日本已制定“暂行标准”而我国没有限量标准的农业化学品492种，33418项 ，涉及食品626种。,日本“肯定列表制度”限量标准,目前，海南出口的水产品主要包括了罗非鱼、冻虾仁、巴町鱼、金枪鱼等等。所涉及到的检测项目包括了氯霉素、硝基呋喃类、喹诺酮类、磺胺类、四环素以及孔雀石绿等。其中，在日本“肯定列表制度”中，氯霉素和硝基呋喃类为不得检出；恩诺沙星的限量残留是0.1 ppm；磺胺类药物异恶唑的残留限量同样为0.1ppm；四环素为0.2ppm；孔雀石绿则是1.0ppb。,欧盟国家水产品药残限量,欧盟发布食品法律绿皮书，于2001年发布食品安全白皮书。欧盟发布关于制定动物源性食品中兽药
4、最高残留限量的共同程序， 现行2005年版限量标准有较大修改，指标更严格。欧盟理事会令2004/41/EC指令和2004/852EC、2004/8523EC、2004/854EC、 2004/882EC等四个新规章，强调了食品安全生产和管理链条的全过程管理,欧盟国家水产品药残限量,由于2000年我国出口至欧盟的冻虾仁中，多次被查出含有欧盟的禁用药品氯霉素，欧盟于2001年11月对我国的“动物及动物源性食品残留监控体系”进行了考察。并于2002年1月23日发布了“欧盟动物及动物源性产品残留监控评估团赴中国考察报告（草案）”，在此报告中，对我国的“监控体系”全盘否定，并于2002年1月31日发布2
5、001/69/EC决议，全面停止中国动物源性食品进口，并对中国已进口的产品全面进行任意项目的检验,欧盟国家水产品药残限量,2002年6月10日欧盟修订2002/69/EC决议（2002/441/EC决议），恢复我国大西洋捕捞的甲壳类、三种进口后来料/进料加工的鱼片、肠衣等进口，但要进行严格的检验，抽检20%至2002年9月,欧盟采取的上述措施已经使我国动物源食品面临着全部退出欧盟市场的危险。此外，韩国、捷克、阿根廷等国也对我国提出了类似的要求,欧盟国家水产品药残限量,2004年7月15日，欧盟常设委员会成员国食品和动物卫生会议批准了IP/04/草案，允许欧盟成员国从中国进口虾、养殖鱼、蜂蜜、蜂
6、王浆、兔肉以及一系列其他动物源性产品，仍然保留对中国禽产品进口禁令,2003年欧盟食品兽医办公室专家对中国的残留监控体系进行了考察，欧盟专家认为中国已经采取了一系列食品安全质量控制措施，在食品安全质量控制方面取得了很大进步，兽药残留监控体系得到了进一步完善，食品安全能够符合欧盟的安全标准,欧盟水产品兽药残留限量指标,美国水产品兽药残留限量,美国的兽药残留管理机构主要由农业部（USDA）、 食品药品管理局（FDA）国家环境保护局（EPA）共同组成。农业部（USDA）负责肉、奶、禽、蛋和水产品兽药残留的监控。食品药品管理局（FDA）负责水果、蔬菜和海产品中 兽药残留的监控国家环境保护局（EPA）兽
7、药残留监控，负责兽药使用的登记、 注册和认可。,美国水产品兽药残留限量,2005年我国对美出口达28.38亿，近年来，因输美产品屡次出现药残超标问题，美官 方对我国农产品采用严格的检测措施，并数次考察我国动物疫病 及药物残留状况。2006年上半年，我输美水产品虾、罗非鱼、鳗鱼等产品数次被美方检出 有氯霉素、呋喃唑酮、孔雀石绿等禁用药物。,二、兽药残留技术,分析方法要求,灵敏度 检测低限准确度 精密度回收率抗干扰 避免假阳性和假阴性分析速度,二、兽药残留技术,常用分析方法,1、试剂盒方法优点 : 分析速度快，灵敏度高缺点 : 不能准确定性，常有假阳性干扰，难以排除适用范围 : 筛选方法2、液相方
8、法优点 : 分析范围广缺点 : 定性能力还有欠缺适用范围 : 确证方法3、液质联用方法优点 : 分析范围广，可同时分析多组分，定性准确缺点 : 昂贵适用范围 : 确证方法,兽药残留技术,1、氯霉素2、硝基呋喃类3、孔雀石绿和结晶紫4、喹喏酮类抗生素5、四环素族抗生素,重要的兽药,1、氯霉素,作用用途,氯霉素 Chloramphenicol作用机理：影响蛋白质的合成。抗生素类药。有广谱抑菌作用，尤其对伤寒，副伤寒感菌作用更强临床主要用于伤寒，副伤寒，也用于其它敏感菌的感染。饲料添加剂，动物疾病治疗。,1、氯霉素,代谢动力学和毒性,代谢动力学主要在肝脏中降解。主要排泄途径:在猪和牛为肾。存在在全部
9、可食组织中，以及牛奶和蛋中 ，在内脏中浓度最高。毒性具胎儿毒性引起粒细胞缺乏症及血小板减少。再生障碍性贫血（与浓度无关，不可逆）,1、氯霉素,有关规定,FAO/WHO在1994年的第四十二届食品添加剂联合专家委员会会 议上作出“由氯霉素引起的再生障碍性贫血与剂量无关，因此不可能通过制定最高残留限量来加以限制。”因此是“不设定”美国和加拿大不容许氯霉素用于最终为人类食用的动物身上；仅批准用于宠养动物疾病的治疗，如猫、狗和马欧盟的96/23(EEC)指令中把氯霉素列入禁用药日本规定所有最终为人类所食用的动物源性食品中氯霉素残留的容许量必须为零。中国在2000版的兽药典中已将氯霉素撤销，并于2002
10、年5月15日起全面禁止作为兽药使用,1、氯霉素,分析方法,筛选方法 ELISA GC/MS, LC/MS确证方法 GC/MS LC/MS-MS 测定低限至少要达到: 0.3 g/kg or L,1、氯霉素,检测方法,1、氯霉素,LC-MS/MS标准谱图,2、硝基呋喃类,作用性质,硝基呋喃类 Nitrofurans合成抗菌药用于治疗沙门氏菌病和大肠（杆）菌的感染可诱导有机体突变禁止用于食用动物中主要残留于肌肉中,2、硝基呋喃类,相关情况,2002年3月:泰国、越南、印尼、印度、孟加拉，77个样品中有16个含量超标。荷兰和英国水产品中检出。 牛、猪和鸡饲养中，作为饲料添加剂广泛使用，用于治疗肠和胃
11、的传染病。 欧盟指令96/23/EC: 硝基呋喃类药物是A类禁用药。中国 : 2002.5起禁止使用。海南 : 呋喃西林和呋喃唑酮常检出。,2、硝基呋喃类,毒理学,呋喃唑酮、硝呋氨氧腙 -诱导有机体突变的物质 -致癌物质代谢物: AOZ致突变其他硝基呋喃类 -缺少数据 -被EMEA(欧洲药品评估局）分类在 Annex IV (Juy 1993),2、硝基呋喃类,药物(代谢)动力学,迅速代谢,半衰期不超过几个小时。以母体形式迅速排泄。用14C-标记呋喃唑酮研究，残留物是以同蛋白质结合状态存在。,2、硝基呋喃类,测定方法,饲料测定原药: HPLC LC-MS/MS组织中测定代谢物 LC-MS/MS
12、 -呋喃唑酮 (AOZ) -呋喃西林 (SEM ) -呋喃它酮 (AMOZ) -呋喃妥因 (AHD) 测定低限至少要达到: 0.5g/kg or L,2、硝基呋喃类,测定步骤,1、称样 称取5.000克样品2、衍生 加水，盐酸，衍生剂，内标，37反应16小时3、提取 加K2HPO4和NaOH调节至中性，加乙酸乙酯4、浓缩 氮气吹干5、定容 流动相定容，过0.2m滤膜6、检测 LC-MS/MS检测，内标法定量,2、硝基呋喃类,标准谱图,3、孔雀石绿和结晶紫,孔雀石绿的基本性质,用途预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等为了延长鱼生存的时间、鱼死亡后颜色较为鲜亮 毒性高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变
13、等副作用 法规许多国家都将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物我国于2002年5月将孔雀石绿列入食品动物禁用的兽药及其化合物清单中，禁止用于所有食品动物,3、孔雀石绿和结晶紫,检测方法,代谢 孔雀石绿和结晶紫在体内内会代谢成不溶于水的隐性孔雀石绿和隐性结晶紫，因此，在检测时要同时检测母体和代谢产物。 孔雀石绿和结晶紫及其代谢产物均容易氧化，在强光环境中降解很快，因此，检测时要避光，加入抗氧化剂来防止降解。 分析方法HPLC LOD 0.52ppb ；母体，紫外；代谢物，荧光。 HPLC / MS/MS LOD 0.5ppb ； 试剂盒方法 。,3、孔雀石绿和结晶紫,液相检测方法/液质确证方法,称样：称
14、取5.000g样品 提取：15mL乙腈提取 酸化：加2mL柠檬酸/盐酸羟胺混合溶液 净化：过MCX小柱，甲醇洗涤 定容：乙酸铵甲醇溶液1.5mL洗脱，盐酸羟胺溶液 定容至2.0mL检测：LC-FLD/UV检测，外标法定量确证：对阳性样品，以LC-MS/MS确证,3、孔雀石绿和结晶紫,标准谱图,4、喹诺酮类抗生素,性质,相对新的合成抗生素 治疗尿路感染 广谱性 第一代:萘啶酸, 恶喹酸(人口服较多) 第二代: 氟喹喏酮类 (更有效)监控药物恶喹酸恩诺沙星、 环丙沙星、丹诺沙星、沙拉沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、 氟甲喹 分析: HPLC + 紫外 / 荧光检测器； LC-MS/MS LOD：5g/k
15、g,4、喹诺酮类抗生素,液相检测方法/液质确证方法,称样 称取5.000克样品提取 10mL乙腈提取净化 10mL正己烷除酯浓缩 加1mL异丙醇，氮气吹干定容 柠檬酸乙酸铵缓冲盐定容测定 LC-FLD测定，外标法定量确证 对阳性样品，进行LC-MS/MS确证,4、喹诺酮类抗生素,标准谱图,5、四环素族抗生素,四环素族Tetracyclines兽医上 65 % 使用的抗生素治疗呼吸道疾病广谱性靶组织:骨骼 (给药后数月乃可发现) 监控药物:土霉素，金霉素，四环素，强力霉素测定方法：HPLC-UV 或HPCL-MS/MS，5g/kg,5、四环素族抗生素,称样 称取5.000克样品提取 用Melljzme缓冲液提取净化 提取液过OASIS小柱，5%甲醇洗涤浓缩 甲醇洗脱，氮气吹干定容 用50%甲醇定容检测 LC-UV检测，外标法定量确证 LC-MS/MS确证,液相检测方法,5、四环素族抗生素,标准谱图,谢谢Thanks,
