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1、1,需氧芽孢杆菌,2,需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种 与医学有关5个种 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（B.cereus） 蕈状芽胞杆菌（B.mycoides） 巨大芽胞杆菌（B.megaterium） 苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis）,3,需氧芽孢杆菌,一、临床意义 炭疽是人畜共患的急性传染病 主要是牛、羊等食草类动物的传染病，人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染 皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等， 并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎,4,需氧芽孢杆菌,荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子,5,需氧芽孢杆菌,炭
2、疽病：传染源：患病食草动物及其制品或被污染物传播途径：接触皮肤炭疽 食用肠炭疽 吸入肺炭疽可并发败血症，死亡率极高,6,乙类传染病发生肺炭疽按甲类处理,病后可获得持久免疫力,7,形态染色:致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状有毒株可有明显荚膜,二、 微生物特性,炭疽芽胞杆菌 亚甲基蓝染色 1000,革兰染色 1000,8,芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央多在有氧条件下形成，2530，在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中，都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞，尸 体严禁解剖,9,培养特性：需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温 度3035普通培养基扁平、粗糙、不透明、灰
3、白色、 无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边 缘呈卷发状,10,BAP：1215h不溶血，1824h轻微溶血其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,11,肉汤絮状沉淀生长明胶371824h表面液化成漏斗状，由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。NaHCO3BAP： -有毒株5%CO2、372448h、产生荚膜 呈黏液型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴别要点) -无毒株粗糙型菌落,12,需氧芽孢杆菌,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气水解淀粉、还原硝酸盐不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不 分解尿素在牛乳中生长24天牛乳凝固缓慢胨化触酶
4、（+）、卵磷脂酶弱（+）,13,抗原构造：菌体多糖抗原： -与毒力无关，耐热、耐腐败，长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应（Ascoli热沉淀反应）。 -特异性不高，能与其他需氧芽胞杆菌、14型肺炎链球菌、人A血型抗原发生交叉反应。,14,荚膜多肽抗原： -与毒力有关，有抗吞噬作用，有利于细 菌生长和扩散 -荚膜肿胀试验，对本菌鉴定有意义芽胞抗原： 有免疫原性和血清学诊断价值,15,炭疽毒素：-保护性抗原（PA)、致死因子（LF）、水肿 因子（EF）三个组分-单独皆无致病性，与PA结合才显示出致病性-具有抗吞噬和免疫原性,16,需氧芽孢杆菌,-芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140
5、3h才能杀灭-在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致 病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数 十年-生物武器,17,-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一，对碘和氧化 剂较敏感，常用以下方法杀菌： 1：2500碘 10min、 3%H2O2 1h、 4%高锰酸钾 15min、 0.5%过氧乙酸 10min -对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、 氯酶素均敏感,18,要求快速检出、分离鉴定病原菌，以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,三、微生物学检验,19,需氧芽孢杆菌,皮肤炭疽：病灶深部标本肺炭疽：痰和血液肠炭疽：粪、呕吐物脑膜炭疽：CSF、血液死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消 毒皮
6、肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局 限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。,20,无杂菌污染标本：直接接种肉汤增菌或固体培养基污染杂菌固体标本：加10倍量生理盐水充分浸泡，振 荡1015min 、静置10min，取悬液65水浴30min或 855min杀死杂菌，保留芽胞活性，再增菌和培养污染杂菌液体标本：离心 ，弃上清液后，加0.5%洗涤 剂振荡1015min ，离心取沉淀物增菌和分离培养,21,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,荚膜肿胀试验,22,23,涂片染色：-G染色、荚膜染色、芽胞染色初步报告-荚膜荧光抗体染色核酸检测：核酸杂交分离培养：-BAP、戊烷脒多粘菌素B平板-2%兔血清
7、肉汤增菌分离培养,24,鉴定试验：形态和菌落特征生化试验:表11-1串珠试验:-接种于含青霉素(0.050.5U/ml)的肉汤 中，37 6h，大而均匀成串的圆球状菌体-与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关-类炭疽无此现象,25,青霉素抑制试验：接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板，3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验：,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,26,噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验： 接种于含0.5%NaHCO3和10%马血清的平板， 10%CO2、37、2448h 有毒株形成荚膜黏液型菌落 无毒株不形成荚膜粗糙型菌落 动物试验：
8、小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,27,植物凝集素试验：Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断,28,需氧芽孢杆菌,29,需氧芽孢杆菌,食物中毒含菌量达105/g以上呕吐型耐热肠毒素腹泻型不耐热肠毒素全眼球炎（外伤后）心内膜炎、败血症和脑膜炎,30,夏、秋季多见食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等，大多为加热烹调过的熟食在米饭中极易繁殖，由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见中毒食物大多无腐败、变质现象，感官性状正常，应引起注意,31,形态与染色：- G+大杆菌-生长6h后即形成圆形芽胞、位于 菌体中心或次末端、不突出菌体-菌体两端平截，多数呈链状排列-引起食物中毒的菌株多有周鞭 毛、无荚膜,
9、需氧芽孢杆菌,32,培养特性：需氧或兼性厌氧营养要求不高最适温度3035普通琼脂平板：菌落较大， 灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽,33,BAP 有溶血 卵黄平板生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应,34,生化反应：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊 精，产酸不产气能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂 酶（+） 多次传代后生化特性常可改变,35,抵抗力：耐热，肉汤中细菌需10020min才能杀死，食物中毒菌株的游离芽胞耐受10030min、干热12060min才能杀死对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感，对青霉素、磺胺、呋喃类耐药,36,需氧芽孢杆菌,标本采集： 可疑食物、粪便、呕吐物，因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。,37,需氧芽孢杆菌,从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本菌活跃生长，构成潜在危险从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或)呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,38,39,检验方法：直接镜检分离培养与活菌计数 普通琼脂平板、BAP、卵黄平板鉴定与分型： 根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定 生化分型、血清分型、噬菌体分型，肠毒素检测,
