抗核抗体课件.ppt

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1、抗核抗体谱及其临床意义中国医科大学附属第一医院风湿免疫科侯 平,1,常见的结缔组织病（CTD）系统性红斑狼疮SLE类风湿关节炎RA系统性硬化症SSc多发性肌炎/皮肌炎 PM/DM干燥综合征 Sjgren sydrome, SS混合性结缔组织病mixed CTD, MCTD重叠综合征overlapping syndrome,OLS药物性狼疮drug-induced lupus,DIL,2,自身免疫性疾病特点1、患者血中可测到高效价的自身抗体2、自身抗体造成自身组织器官的病理损伤和功 能障碍3、病情转归与自身免疫反应强度密切相关4、多数自身免疫性疾病病情经过呈反复发作与 慢性迁延5、动物实验可复制

2、出病理模型（如狼疮鼠 lupus mice）6、疾病的发生有一定的遗传倾向,3,自身抗体自身抗体是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外 抗原的免疫球蛋白。抗细胞内抗原的抗体： 抗核抗体（ANA） 抗细胞浆成份抗体,如抗中性粒细胞浆抗体(ANCA） 抗细胞表面抗原的抗体,如抗RBC膜抗体(Coombs试验） 抗细胞外抗原的抗体如类风湿因子（RF）,4,自身抗体的检测方法一、间接免疫荧光法(indirect immunifluores-cence, IIF） 用于检测ANA、ANCA、抗核仁抗体等 敏感性较高，特异性较低二、免疫双扩散法（immno diffusion,ID） 用于检测抗ENA抗体等，

3、最为常用。 能直接确定某种抗体，敏感性较强，特异性 较高。,5,三 对流免疫电泳法（counter immunoelec-trophorsesis, CIE） ID的改良方法，是其它检测方法的补充试验四、免疫印迹法（immuno blot test, IBT） 从分子水平测定各种抗体，但不能作滴度测 定五、酶联免疫吸附法（ELISA） 是一种定量检测法，敏感性高，特异性较强,6,抗核抗体（antinuclear antibody,ANA） 抗核抗体（ANA）是指抗细胞核抗原成份的自身抗体的总称。这是针对细胞核内DNA、RNA、蛋白质、脂类、酶类或这些物质的分子复合物的抗体。这些物质并非仅存在细

4、胞核内，也可存在于胞浆和其它细胞器中，因此，ANA的理解已不再局限于抗核成份。 ANA是指抗核酸（nucleic acid）和核蛋白（nucleoprotein）抗体的总称。,7,ANA测定原理和方法 目前常以核质丰富的人喉癌上皮细胞即Hep-2细胞为底物，用间接免疫荧光法（IIF法）检测ANA。,8,IIF法ANA阳性常见荧光染色核型均质型（homegeneous pattern,H型）核质着色均匀一致与抗DNA抗体及抗组蛋白抗体有关斑点型（speckled pattern, S型）核质呈大小不等的颗粒状或斑点状荧光。S型与抗ENA抗体有关。,9,核膜型（membranous Pattern

5、,M型)核周边着荧 光,中央部淡染。M型与抗双链DNA抗体有关核仁型（nudedar pattern,N型）仅核仁着色 荧光且与核仁数目一致。N型在SSc多见着丝点型（centromert pattern） 核内均匀 分布的大小一致的荧光颗粒，无核膜结构。 着丝点型与抗着丝点抗体有关，见于CREST 综合征。,10,ANA阳性核型示意图,11,抗核抗体（ANA）阳性的原因1、CTD:SLE、RA、SSc、PM/DM、SS、MCTD、DIL等2、SLE、SSc、SS的一级亲属中近一半者3、肺疾病：原发性肺纤维化、原发性肺动脉高 压、石棉肺等4、肝脏病：慢性活动性肝炎（CAH）、原发性 胆汁性肝硬

6、化（PBC）酒精性肝病、自身免 疫性肝炎（AIH）等,12,5、血液病：白血病、骨髓瘤、淋巴瘤、自身免疫性血小板减少性紫癜（ITP）、自身免疫性溶血性贫血(AIHA）等6、慢性感染：结核菌、麻风杆菌、沙门氏菌、克雷白杆菌感染；日本血吸虫、锥虫、曼森氏线虫等7、其他：型糖尿病、Graves病、多发性硬化，终未期肾病等（Practical Rheumatology 1995）,13,抗核抗体谱（ANAs）ANA是自身抗体中的一组抗体。从发现狼疮细胞（lupus erythematosus cell, LEC）迄今，已有半个世纪。人们对ANA的认识逐步深入。目前已发现具有不同临床意义的20余种ANA

7、，形成了抗核抗体谱（antinuclear antibodies, ANAs）。根据细胞内各种成份的理化特性和分布部位，将ANA分为四类。,14,抗核抗体谱（ANAs）一、抗DNA抗体 抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体) 抗单链DNA抗体(抗ss-DNA抗体)二、抗组蛋白抗体（antihistone ntibody,AHA）三、抗非组蛋白抗体 抗ENA抗体 抗着丝点抗体（ACA）四、抗核仁抗体 抗RNA聚合酶-抗体 抗核仁原纤维蛋白抗体 抗PM-Scl抗原复合物抗体,15,抗DNA抗体及其临床意义 抗脱氧核糖核酸抗体 简称抗DNA抗体。分为两种。 (一)抗双链DNA(double-stra

8、nded DNA)抗体即 抗ds-DNA抗体。用马疫锥虫间接免疫荧光方法（TE-IIF），在SLE阳性率40%。临床意义：1、是SLE的标志抗体2、抗体效价的高低与疾病活动程度呈正相关。3、用于观测SLE病情变化及药物治疗效果。4、此抗体阳性易致狼疮性肾炎（LN）,16,（二）抗单链DNA（single-stranded DNA）抗体(抗ss-DNA） 1、对疾病的诊断缺乏特异性：在SLE时，其阳性率为70%，但在其他CTD中（RA、DIL、SSc、PM/DM、SS、MCTD等）呈阳性，且非CTD（如CAH、病毒和细菌感染时）也为阳性。 2、临床实用价值不大，故不用于常规检测。,17,抗组蛋白

9、抗体（AHA）组蛋白是一组与DNA结合的富含赖氨酸和精氨酸的碱性蛋白。组蛋白由五个亚基组成，即H1、H2A、H2B、H3和H4。抗组蛋白抗体（antihistone antibody,AHA）的荧光免疫核型常呈均质型（H型）。,18,临床意义：1、DIL时95%以上为阳性 普鲁卡因酰胺所致的AHA对H2A-H2B复合体起反应 肼苯达嗪所致AHA对 H3和H4起反应2、SLE时约50%为阳性，主要是对H2B、H2A-H2B和H1起反应。3、RA时15%为阳性，且关节外症状较为突出。Felty综合征时其阳性率83%，JRA时血中其他抗体不常见但AHA阳性率可达5070%。4、AHA对DIL诊断可能

10、有帮助，但不能确诊为DIL。,19,抗非组蛋白抗体其中最重要的是抗ENA抗体。可提取性核抗原（extractable nuclear antigen,ENA）是用生理盐水从动物胸腺、肝脾等细胞核中提取的酸性核蛋白。抗可提取性核抗原（ENA）抗体统称为抗ENA抗体。从抗核抗体谱（ANAs）中，看出抗ENA抗体属于非组蛋白抗体，且是一组抗体，故称抗ENA抗体为ANAs的“谱中谱”。,20,抗ENA抗体1、抗Sm抗体2、抗U1RNP抗体3、抗SSA/Ro抗体4、抗SSB/La抗体5、抗Scl-70抗体6、抗Jo-1抗体,7、抗r-RNP抗体8、抗PM-Scl抗体9、抗PCNA抗体10 抗Mi-2抗体

11、、 11 抗RANA抗体12 抗RA33抗体,21,抗ENA抗体及其临床意义1、抗Sm抗体 在名为Smith的SLE患者血中发现故称为抗Sm抗体。是SLE的标志抗体。但与疾病活动与否无关！ 在SLE患者的阳性率为2530%（ID法）IBT法检测时,抗Sm抗体分为四条带，即29KD、 28KD和13.5KD和22KD.其中13.5KD更为特异Sm（+）的SLE者，可能中枢神经系统易受累,22,2、抗U1RNP抗体核糖核蛋白(RNP)中富含尿嘧啶(U)且主要存在于U族小分子RNP的第一组分中，故习称U1RNP，其抗体称为抗U1RNP抗体。高滴度的抗U1RNP抗体是诊断MCTD的重要指标。分三条蛋白

12、带，即73KD、32KD和17.5KD, 其中73KD更特异。低效价的抗U1RNP可见于SLE、SSc等此抗体阳性时肾炎的发生率极低。,23,3、抗SSA/Ro抗体 该抗体与干燥综合征（Sjgren syndrome,SS）相关，而命名为抗SSA。其抗原是由5种“人细胞浆核糖核酸”（human cytoplasmic RNAs,hYRNAs)即hY1-hY5 RNAs与52KD和60KD的蛋白质组成。属胞浆小分子核糖核蛋白（scRNP）。,24,临床意义 在原发性SS中，抗SSA阳性率为60% 在SLE、RA等也可阳性，60KD的蛋白多肽在SLE中比SS更多见。 此抗体阳性对诊断ANA（+）/

13、抗ds-DNA（一）的SLE有一定价值，且末梢血WBC和PLT降低明显 在亚急性皮肤型红斑狼疮（SCLE），时常阳性而ANA阴性。,25,4、抗SSB/La抗体其抗原分子量为KD48、47KD和45KD，以48KD更具特异性在原发性SS时，此抗体阳性率为40%此抗体阳性时对诊断SS意义比抗SSA更特异抗SSA（+）时，抗SSB可阴性，但抗SSB（+）时抗SSA常阳性。抗SSB（+）的SLE患者，与肾脏损害密切相关。,26,5、抗Scl-70抗体 本抗体的名称取自硬皮病（Scleroderma）字头，70是指该抗体相应的抗原的分子量为70KD。Scl-70抗原是拓朴异构酶(Topoisomera

14、se ),天然分子量为100KD，在降解过程中形成小的多肽，其中最重要的就是70KD的抗原片段。,27,此抗体是SSc的标志性抗体,阳性率为22-40%， 特异性达100%，敏感性40%SSc合并肿瘤时此抗体阳性可高达86%。此抗体阳性的SSc患者，肺纤维化和指骨吸收 较多见。抗Scl-70抗体似乎与心肾受累无关。雷诺病（Raynaud disease）时本抗体为阴性。,28,6、抗Jo-1抗体 本抗体是以病人名字John命名而成,于1980年首次在PM患者血清中出现。其抗原是组氨酰t-RNA合成酶，分子量为55KD。氨基酰t-RNA合成酶催化细胞中游离的氨基酸与相应的t-RNA结合，在mRN

15、A的指导下合成多肽。此抗体是PM/DM的标志抗体，在PM阳性率可达 30%，而在DM为5-10%。本抗体阳性时，常伴有肺间质纤维化。,29,本抗体阳性时患者可出手指桡侧面及掌面的 皮肤高度角化，皲裂并伴色素沉着，即所谓 的“机械工人手”。本抗体阳性有助于诊断“Jo-1综合征”：关节 炎、轻度肌炎和进行性肺间质纤维化为主要 特征，伴有发热、白细胞增高、雷诺现象的 一组临床综合征。 抗Jo-1抗体阳性的患者与阴性相比，发病年 龄轻，病情进展快，疗效差且易复发。,30,7、抗核糖体（ribosome）RNP抗体 简称抗核糖体抗体，即抗rRNP抗体 其抗原由分子量为38KD、16KD和15.5KD的磷

16、酸蛋白组成。 10%的SLE患者，抗r-RNP抗体阳性。 此抗体与抗ds-DNA抗体滴度消长相平行。 此抗体阳性的SLE患者，37.5%伴有中枢神经系统证状。 此抗体阳性而ANA阴性病人,若干年后发展为典型SLE。,31,8、其它抗ENA抗体（1）抗PM-Scl抗体 即PM-1抗体 其抗原复合物PM-Scl位于核仁的颗粒中，分子量110-120KD，此抗体最多出现在PM+SSc的重叠综合征，阳性率为25%，而单独在PM/DM的阳性率为8%，在SSc的阳性率为3%。尤其后者易有皮肤钙化及关节炎，但几乎无内脏损害，予后好。,32,（2）抗Mi-2抗体 1972年在名为Mi的DM患者血清中发现而命名

17、。在凝胶免疫扩散中，其抗体形成两条沉淀线而称为抗Mi-1和Mi-2抗体。抗Mi-1不只存在于PM血中，故特异性差，已被弃用。,33,Mi-2抗原分子量为218KD。抗Mi-2抗体几乎仅存在于DM中，而被认为是DM的特异性抗体。在DM阳性率为15-20%,且95%患者出现典型的颈部“V”形皮疹或“披肩形”皮疹,88%有Gottron氏斑。在PM患者阳性率为8%。虽然临床表现较严重，但比起抗Jo-1抗体阳性病人来说，抗Mi-2抗体阳性者对激素反应好。,34,（3）抗PCNA抗体 即抗增殖细胞核抗原（proliterating cell nuclear antigen）抗体。其抗原为分子量35KD的

18、DNA聚合酶副蛋白。约3%的SLE患者抗PCNA抗体阳性,其它CTD阴性。 （4）抗RANA（rheumatoid arthritis-nuclear antigen）抗体， 即抗类风湿关节炎相关核抗原抗体 在RA的阳性率为40%，正常人约5%阳性。RANA存在于EB病毒感染的B淋巴细胞内，故该抗体阳性与EB病毒感染有关。,35,（5）抗RA33抗体 抗原是分子量为33KD的核酸结合蛋白，在RA病人血中检出，故名。抗RA33抗体在RA阳性率为35.8%,是早期诊断RA的指标之一。此抗体尚可见于SLE和MCTD患者。,36,非组蛋白抗体中的“抗着丝点抗体” 抗着丝点抗体（anticentrome

19、ric antibody, ACA）：其抗原分子量为80KD。该抗体荧光核型呈着丝点型。临床意义：1、80%以上的CREST综合征，ACA为阳性。国外 称之为CREST综合征的标志抗体。2、10%-20%的SSc病人，ACA(+),但脏器受累轻。3、ACA与抗Scl-70抗体,在SSc病人中不同时出现。,37,抗核仁抗体抗核仁抗体常出现在硬皮病（SSc）中。1、RNA聚合酶，分子量210211KD,该抗原是 参与编码核糖体RNA的核仁基因转录过程的 酶 抗RNA聚合酶抗体在SSc阳性率为4%， 患者的肌腱和关节受累重。2、核仁原纤维蛋白,分子量34KD,是U3RNP的组 成成分。抗核仁原纤维蛋

20、白抗体在SSc阳性 率为8%3、PM-Scl抗原复合物（参见抗PM-1抗体）,38,狼疮细胞与抗DNP抗体 1948年美国学者在SLE患者的胸水中发现了狼疮细胞（LEC），并认识到这是由于其体内存在LE因子的缘故。 LE因子就是抗脱氧核糖核蛋白抗体即抗DNP抗体。患者血清中存在这种抗体时，与轻微受损伤的白细胞核内的DNP结合，在补体作用下，细胞核膨胀，染色质结构不清，形成所谓“包涵体” 。细胞破裂溶解后，包涵体再被中性粒细胞吞噬且将细胞核挤于一侧，形成LEC。,39,LEC在初治活动期的SLE中，阳性率为5080%，在其它CTD（如SS、MCTD）也可出现，在非CTD（如CAH、Tb、肾炎、白血病、药物过敏性疾病等）也可见到，即LEC特异性差，敏感性低，1994年美国明确指出废弃此项检查，用ANA（抗DNP抗体、抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体）等替代。,40,小 结一、抗核抗体（ANA）的概念及意义二、抗核抗体谱（ANAs）的分类三、抗ds-DNA抗体的临床意义SLE标志抗体四、抗ENA抗体（谱中谱）分类及意义 1.抗Sm抗体SLE标志抗体 2.抗U1 RNP抗体高滴度时诊断MCTD 3.抗SSA/抗SSB对SS之诊断有帮助 4.抗Scl-70抗体SSc的标志抗体 5.抗Jo-1抗体PM/DM的标志抗体,41,