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1、猪传染性胸膜肺炎Porcine contagious Pleuropneumonia,1,一、猪传染性胸膜肺炎Porcine contagious Pleuropneumonia,（一）发生与危害（二）主要临床症状（三）流行病学特点（四）诊断方法及应用（五）疫苗防治,2,（一）猪传染性胸膜肺炎的发生与危害,由胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起猪的一种高度接触传染性、致死性呼吸道传染病。急性和亚急性病例以纤维素性出血性胸膜肺炎、慢性病例以纤维素性坏死性胸膜肺炎为主要特征。曾被称为“猪接触性传染性胸膜肺炎”、“猪嗜血杆菌胸膜肺炎”。,3,猪呼吸困难，急性死亡 最急性型的死亡率可高达80-100% 慢性
2、耐过猪生长缓慢 日增重下降约5-33.6%,饲料报酬降低约4.6-25.5%6. 耐过种猪由于细菌存在于扁桃体中，成为潜在的传染源，使本病随种猪扩散。7. 本病易与猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬病、副猪嗜血杆菌病等混合发生，给世界各国的养猪业造成了巨大的经济损失，并已成为当前的主要猪病之一。,4,8. 近年来，该病已遍布全球，在欧、美、亚洲等许多国家和地区均有发生。在美国、加拿大、丹麦和瑞士等主要养猪国家，本病已成为猪的主要传染病。9. 2000、2002、2004年分别在澳、美、德国召开的第16、17、18届国际猪病会以及2003、2005年分别在韩国、菲律宾召开的第1、2届亚洲猪病会上，都设立
3、了猪传染性胸膜肺炎专场研讨会，表明本病已成为国际上猪病研究的热点。,5,猪传染性胸膜肺炎的世界分布,欧洲、 美洲、澳大利亚、亚洲、南非,6,猪传染性胸膜肺炎在我国的流行和分布,自1990年确诊猪传染性胸膜肺炎以来，本病已在我国20多个省市发生和流行, 损失巨大。,7,目前APP有15个血清型 外毒素（RTX）是其主要的毒力因子，其中ApxI和ApxII毒力最强。 所有血清型APP均产生ApxIV且仅在体内产生，因此ApxIV可以用于种特异性诊断及其鉴别诊断。,病原：胸膜肺炎放线杆菌Actinobacillus pleuropneumoniae, APP,8,我国流行的优势血清型,“九.五和十.
4、五”期间, 我们共检测了全国各地送检的100，000多份猪血清，阳性率为53%左右，有的甚至超过了70% 。 我们从湖北、湖南、广东、浙江、上海、河南、山东、广西、福建、江西等10个省（市）出现呼吸道症状猪的肺脏中分离到100余株APP，主要流行的血清型主要为1、2和7型。,9,10,（二）本病主要临床症状,APP只感染猪，不同年龄的猪均可感染，但以25月龄较为易感。主要特征在急性期表现为体温升高，严重的呼吸困难，张口呼吸、呈犬坐姿势，慢性期为阵咳、消瘦。本病的发生受外界因素影响很大，一般无明显季节性，多见于晚秋冬春，气温剧变；潮湿、通风不良、饲养密集；管理不善等条件下发生，尤其是在重新组群，
5、增加应激因素时多发。,11,发病率视各地的管理系统和所采取的预防措施不同，但一般较高，在8.5100。死亡率根据环境和菌株毒力不同，可在0.4100之间。据近几年各地的发病情况分析，哺乳仔猪发病率与死亡率均高，而生长育肥猪死亡率并不高，仅略高于正常死亡率。本病的感染途径是呼吸道，即通过咳嗽、喷嚏而传播。公猪在感染链中可能起一种重要作用。,12,根据病程可分为最急性、急性、亚急性和慢性4种临床发病形式。最急性：突然发病，体温升高到41.5，沉郁、厌食，病猪卧地，无明显呼吸症状。一般12天突然死亡。急性：同圈或不同圈许多猪同时发病，体温40.541，沉郁、拒食、咳嗽、呼吸困难，有时张口呼吸，呈犬坐
6、姿势，初为鼻、耳、腿部皮肤，继而全身皮肤发绀，常出现心脏衰竭，病程依据肺部病变或开始治疗时间而不同，可发生死亡，也可能转为亚急性或慢性。,13,3.亚急性或慢性：常由急性转为而成，体温不升高或略有升高，食欲不振，阵咳或间断性咳嗽，增重率降低。在慢性感染群中，常有很多隐性感染猪，当受到其它病原微生物侵害时(如肺炎霉形体、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌)，则临床症状可能加剧。,14,剖检病变：剖检主要病变为肺炎和胸膜炎，肺炎大部分为两侧性，涉及心叶及尖叶和部分隔叶，隔叶上的病灶常常是局部的，而且界线分明，肺炎区色暗，坚实、切面脆弱。急性：以出血性纤维素性胸膜肺炎为特征，胸腔内有血液样液体。在急
7、性死亡病例、气管和支气管充满泡沫状血样粘性渗出物。,15,2.慢性：以纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征，在大部分慢性病例，大小不同的结节，这些脓肿样结节被一层厚结缔组织膜包裹，有些区域胸膜粘连。在许多病例肺部病变消失，只残留局灶性胸膜粘连。3.在自然病例中常见胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌协同作用混合感染形成复杂的呼吸道病综合征。,16,急性：呼吸困难急性死亡心包积液,17,纤维素性化脓性坏死性胸膜炎、肺炎,18,纤维素性、出血性、坏死性肺炎,19,淋巴结肿大,20,APP血清7型菌接种小鼠的死亡情况,2108CFU组,2109CFU组,6109CFU组,21,APP-1型（弱毒株Shope40
8、71)以108菌量气管内注射19h，死亡，从口、鼻腔流出大量血水样渗出物,22,感染发病幸存猪，两个月后转为慢性，生长迟慢、僵化，毛粗、皮无光泽。,23,人工接种APP血清1型12h内死亡病理变化,24,人工接种APP-1型菌后7天肺病变,化脓灶,化脓灶,25,人工接种APP-1型菌后7天喉头和肺病变,喉头的化脓性灶,胸腺体出血,肺的大体外观,26,滴鼻接种APP-1型菌后2天(背部皮肤变红),27,APP人工感染急性死亡病例(接种后36小时死亡),28,APP人工感染急性死亡病例(接种后36小时死亡),肺脏充血、化脓灶,29,APP人工感染急性死亡病例(接种后36小时死亡),喉头出现脓性灶,
9、30,APP人工感染急性死亡病例(接种后36小时死亡),脾脏边缘出血性梗死,鼻粘膜肿胀,充血,31,APP人工感染急性死亡病例(接种后36小时死亡),肠道的病理剖解变化,32,APP人工感染急性死亡病例(接种后36小时死亡),急性型死亡猪的外观:皮肤发紫,心包积液,粘连,33,（三）诊断方法,根据临床症状和剖检病变可对本病作出初步诊断，确诊需借助病原分离鉴定和血清学诊断方法。病原学诊断方法 （1）病原分离鉴定,34,(2)PCR诊断方法 华中农业大学自1996年以来，已建立了ApxI、ApxII、ApxIII、 ApxIV、omlA(外膜蛋白)、tfb(转铁结合蛋白)PCR诊断方法。由于Apx
10、IV只在体内表达而在体外不表达， ApxIV-PCR可作为鉴别诊断，结合当前我国用得最多商品化灭活疫苗， 可以区分灭活疫苗免疫猪和野毒感染猪，达到净化并最终根除猪传染性胸膜肺炎。,35,ApxIV-PCR 扩增特异性试验结果,M DNA marker 2000 + 阳性对照 1-13，14: APP血清1-13和15型标准株 15: TM/SN液体培养基 16: PPLO液体培养基 17: 猪副嗜血杆菌 18 多杀性巴氏杆菌 19: 支气管败血波氏杆菌 20: 大肠杆菌 21 葡萄球菌22: 链球菌 23阴性对照 (无菌水),36,ApxIV-PCR 扩增灵敏性试验结果,M：DNA marke
11、r 2000 1-10： APP（109-100） CFU/ml+ 阳性对照 - 阴性对照,37,ApxIV-PCR扩增临床样品试验结果,38,3、血清学诊断快速玻片凝集(RSA)试验试管凝集(TA)试验2-巯基乙醇试管凝集(2-ME-TA)试验乳胶凝集(LAT)试验环状沉淀(RP)试验协同凝集(Co-A)试验补体结合反应(CF)间接血凝(1HA)试验免疫荧光(1F)试验酶联免疫吸附试验(ELISA)： ApxI-、ApxII-、ApxIII-、ApxIV-ELISA,39,（1）目前比较常用的诊断方法：间接血凝试验(IHA) 和酶联免疫吸附试验(ELISA)。 （2）本实验室建立ApxI-、
12、ApxII-、ApxIII-、ApxIV-ELISA诊断方法，已将ApxII- -ELISA 、ApxIV-ELISA研制成试剂盒。试剂盒灵敏度高，特异好，而且ApxIV-ELISA配套灭活疫苗使用，还具有鉴别诊断特点，目前已在临床上大量使用。,40,APP ELISA诊断试剂盒,41,近几年来APP耐药性现象越来越常见，常用的药物对该病已无明显的疗效。本实验室已经测定了分离的100多个APP菌株对14种药物的敏感性，结果发现这些菌株只对先锋霉素、庆大霉素和氯霉素敏感，其它11种药物无效。随着人们对无药物残留、绿色食品需求的期望越来越高，那么抗生素在动物饲料中应用的限制也越来越严格。抗生素在本
13、病预防和控制等方面的应用必将受到严格限制和逐步禁止。 因此，疫苗接种已成为预防和控制该病的主要措施。,（四）疫苗免疫预防,42,灭活疫苗,目前，临床应用的主要是亚单位疫苗和灭活疫苗。在我国，商品化疫苗有亚单位疫苗。由于亚单位疫苗成分单一，免疫保护十分有限，也不能给异源APP血清型感染提供交叉保护；另外，通过物理或化学方法提取、纯化蛋白来制备亚单位疫苗生物活性差、成本高，而且需要多次注射。,43,灭活疫苗可降低同种血清型菌感染造成的死亡率，具有安全、不散毒，不返祖、返强，便于贮存和运输等优点。因此，应用最多的还是灭活疫苗。由于猪胸膜肺炎放线杆菌血清型多种，不同血清型之间的交叉免疫保护率又不高，所
14、以不同来源灭活疫苗的效果也各不相同，因此要根据病原流行情况及其菌种的毒力、免疫原性来确定生产用菌种。,44,流行病学调查结果表明,我国流行的胸膜肺炎放线杆菌血清型主要是1、2和7型。华中农业大学动物传染病研究室对从自行分离鉴定的1、2和7型胸膜肺炎放线杆菌菌株，按血清型分为三组,同一血清型不同菌株间进行了各种形态、生化、毒力和免疫原性试验，选择毒力强、免疫原性好、组成均一、性质稳定的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型（JL9901株）、血清2型（XT9904株）和血清7型（GZ9903株）作为生产用菌种，成功研制出了1、2、7型三价灭活疫苗。疫苗安全性好、产生抗体水平高，免疫猪完全能够抵抗各种血清型菌
15、攻击。,45,猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗,46,目前国内唯一获农业部批准的商品化传胸疫苗兽药生字（2006）170041060,47,国家九五、十五科技攻关成果目前国内唯一获得批准文号的传胸疫苗国内分离的优势菌株，覆盖国内流行的主要血清型，针对性强免疫原性好，免疫保护率高含有天然毒素、保护更全面先进的发酵工艺、新型浓缩与乳化工艺,猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的主要特点,48,细菌发酵罐系统,49,电脑自动记录数据,50,结果1：疫苗对最小使用日龄仔猪、不同接种途径的一次单剂量接种的安全性,灭活疫苗分别以2ml分别通过接种35-40日龄断奶仔猪后，仔猪无临床症状，包括呼吸情况、精神状况、食欲等
16、正常，未见异常变化。同时，作为TSB培养基接种的对照猪，体温也未升高（P0.05），疫苗安全性很好 。,1、安全性,51,结果2：对仔猪单剂量重复接种的安全性,疫苗分别通过颈部肌肉以2ml剂量重复接种的35-40日龄断奶仔猪以及注射2ml TSB培养基的对照猪在整个观察期间没有出现猪胸膜肺炎临床症状，体温也没有升高情况。,52,结果3：疫苗对35-40日龄仔猪单剂量重复接种的安全性,53,结果4：疫苗对妊娠90天母猪安全性,在整个观察期内均没有出现不良反应，且最后的产仔成绩也相当，试验组和对照组均没有出现流产、死胎、木乃伊胎或弱仔。此外，疫苗对母猪的繁殖性能无影响。说明三价灭活疫苗对妊娠90天
17、的母猪是安全的。,54,结果5：妊娠母猪接种疫苗后产仔成绩统计,55,仔猪免疫后4周，分别用检测多血清型的IHA试验和分别检测1、2和7型的琼脂扩散试验检测免疫猪与对照猪的抗体水平。结果表明：疫苗在免疫仔猪后4周，间接血凝试验抗体水平都在1:16以上，达到保护性IHA抗体水平。琼脂扩散试验检测血清1、2和7型型特异性抗体，抗体都转阳性，且在1:4-1:16之间。具体结果如下：,2、抗体水平,56,结果1：仔猪免疫后4周的间接血凝抗体水平,疫苗在免疫仔猪后4周，间接血凝试验抗体水平都在1:16以，达到保护性IHA抗体水平。,57,结果2：仔猪免疫后4周的抗体水平（血清1型琼脂扩散试验）,58,结
18、果3：仔猪免疫后4周的抗体水平（血清2型琼脂扩散试验）,59,结果4：仔猪免疫后4周的抗体水平（血清7型琼脂扩散试验）,60,结果5：仔猪免疫后间接血凝抗体消长情况,从表可以看出，疫苗在免疫后2周，抗体转阳，效价达1:16左右，4周后达保护线水平，以后逐渐上升，60-120天处于抗体水平高峰，持续至免疫后180天。,61,35-40日龄仔猪免疫不同时间的抗体水平和攻毒结果,3、免疫保护率,62,疫苗免疫仔猪后，检测间接血凝抗体1：16以上，28天用APP-1、APP-2、APP-7攻毒，疫苗免疫猪均获得了保护。在对照组中，用APP-1攻毒，猪全部死亡；而APP-2、APP-7攻毒对照组全部发病
19、。具体效果如下：,63,结果1：疫苗免疫后28天攻毒（APP-1攻毒）,64,血清1型菌攻毒后,对照猪呼吸困难,血清1型菌攻毒（10亿）后，对照猪12h内4/4急性死亡,65,结果2：疫苗免疫后28天攻毒情况（APP-2攻毒）,66,血清2型菌气管攻毒后(72小时内死亡后剖解)，肺脏和喉头的化脓灶,喉头出现化脓灶,肺脏典型化脓灶,67,结果3：疫苗免疫后28天攻毒（APP-7攻毒）,、,68,APP-7攻毒对照组死亡3/4,一头发病,69,肌肉注射2ml：各种年龄的猪推荐免疫程序为：仔猪35-40日龄进行第1次免疫接种，首免后3-4周进行第2次免疫母猪在产前6周和2周各注射1次，以后每半年加强免疫1次种公猪一年2次,猪传染性胸膜肺炎三价灭活疫苗的使用,70,GMP车间侧景,谢谢,71,
