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1、第六讲 二、三级菌种制作技术,食用菌生产技术课程组,二、三级菌种制作技术,一.二、三级菌种培养基的配制二.二、三级菌种培养基的灭菌三.二、三级菌种的接种四.二、三级菌种的培养五.二、三级菌种的质量鉴定,2,t课件,原种和栽培种的生产技术,原种和栽培种的生产,无论是培养基成分,配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1)原种:是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成,主要用于繁殖栽培种,也可直接用于生产。(母种原种)2)栽培种:由原种作种源扩大而成,只能用于生产。(原种栽培种),3,t课件,二、三级菌种制作流程,配制培养基,灭 菌,二级菌种,培 养,接 种,培 养,接 种,灭 菌,配制培养基,三级菌
2、种,一级菌种,二级菌种,(二、三级菌种制作过程大同小异),4,t课件,原种、栽培种的制作流程 按配方称取原料拌料装瓶(袋)打洞(孔径1cm深至瓶底)灭菌(1.5kgcm2,1.52h)冷却接种(接入黄豆大小一块)培养(25 27)菌丝长满瓶(袋)培养7d8d扩大成栽培种。,5,t课件,一.二、三级菌种培养基的配制,(一)配制总原则 1选择适宜的营养物质。 2营养物质间配制的比例要恰当。 3选择经济实用、来源广泛的原料。 4适宜的pH值和含水量。,6,t课件,培养基(料)配制原则掌握碳氮比例 食用菌对碳和氮的需要有一个比例,简称碳氮比(C)。菌丝体生长阶段:C=201;子实体形成阶段:C=304
3、01;C 过高,菌丝体生长过旺,而子实体小、产量低。,7,t课件, 选好培养材料首先选不含杀菌物质的木屑 杉、松、樟等树种,含酚、酯、精油等杀菌物质,会抑制食用菌生长。要用必须经过处理,如:蒸煮、晒等。 根据食用菌的喜好选木屑 如:培养香菇用桦木屑就比椴木屑好; 培养金针菇用构,楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。,8,t课件, 注意物理性状 培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度,以及持水性能等物理性状。调节酸碱度 各种食用菌需要的pH值不同,配制培养料时,应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值,生产上有时为了控制这类杂菌的发生,往往将pH值适当调高0.5
4、1。,9,t课件,原料选择的注意事项(几点说明)木屑: 树种:除松树、杉树、柏树、樟树、芸香属、按属等树种之外,绝大多数阔叶树和木屑都可以利用。(因其中含有酚、酯、精油等杀菌物质) 粗细:不宜过细,以免培养基过湿或通气不良。,10,t课件,选择:根据食用菌分解能力选择,分解能力较强的食用菌采用硬质阔叶树木屑,反之采用软质树种木屑。如:金针菇分解能力较弱,以含单宁较少木屑为宜,木屑越陈越好;茯苓菌分解能力较强,可采用颗粒粗的松木屑或松木钉。,11,t课件,米糠、麸皮作用作用:补充氮源和维生素。 稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料,含氮量低。如:木屑含氮量0.03%以下。麸皮:含氮量比米糠多,但
5、维生素不如米糠。米糠:含氮量比麸皮少。用量:一般10%20%,过多易引起污染。,12,t课件,加糖的作用初期补充碳源,用量1%5%。诱导胞外酶的产生。 纤维素原料,食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源,促进菌丝快速生长,同时诱导纤维素酶的产生,更好地利用纤维素。,13,t课件,Ca2作用提供食用菌钙离子:原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子;钙不断中和食用菌产生的有机酸;钙还能中和单宁;减少过量K、Mg对菌丝中毒,促进菌丝生长。,14,t课件,1、常用培养料的配方和配制方法,(二)培养基常用的配方,15,t课件,粪草培养基(适用于蘑菇) 稻草或麦秸20kg、粪
6、肥(干)30kg、石膏500g、水适量。方法:稻草切成2cm长粪肥混合发酵石膏调水装瓶灭菌,1、常用培养料的配方和配制方法,16,t课件,稻草麸皮培养基(草菇) 干稻草78%、麸皮或米糠20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、水适量方法:稻草切成2cm长发酵蔗糖麸皮过磷酸钙,17,t课件,木屑米糠培养基(香菇、木耳、猴头、平菇等) 木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水适量。木屑、麸皮、黄豆粉培养基(银耳) 木屑50kg、麸皮15kg、黄豆粉1kg、蔗糖0.75kg、MgSO4 0.25kg、水7075kg。棉籽壳培养基(平菇、猴头、金针菇) 棉籽壳99.7%、蔗糖0.1%、石膏0.2%
7、、水适量。,1、常用培养料的配方和配制方法,18,t课件,(三)培养基配制步骤,称料,拌料,调节pH值,分装培养料,清洁(洗或擦)瓶、袋外壁,封口,1.不溶性主、辅料混拌均匀,2.可溶性辅料溶于水后拌入主辅料,3.注意检查含水量(手测法等),比实际要求的pH值调高1左右,容器:菌种瓶、菌种袋,要求:上紧下松,外紧内松,中间一个洞,19,t课件,二.二、三级菌种培养基的灭菌,1灭菌方法及要求 高压蒸汽灭菌:压力1.5kg/cm2,温度126-128,时间1-2h(谷粒和经过堆制发酵的粪草培养基应达到2-2.5h)。 常压蒸汽灭菌:100,保持10-12h,卧式高压蒸汽灭菌锅,20,t课件,2灭菌
8、效果检验 随机取几瓶(袋)置于25-30温度下空白培养4-6天,会出现以下情况: 全部感杂 少数感杂 全部没有杂菌 3、高压蒸汽灭菌锅的使用方法 按照仪器操作说明操作!,分析原因,?,21,t课件,三.二、三级菌种的接种,概念:菌种移至新培养基上的过程关键:无菌操作,接种,接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快、准、稳,无菌操作要点,22,t课件,注意:1、严格挑选待接的菌种质量; 2、勿接入表面老菌丝及老种块。,23,t课件,四.二、三级菌种的培养,菌种的培养实际就是对菌丝体的培养,培养条件,场所清洁,空气清新,光线暗,温度约2
9、5,空气湿度60%70%,24,t课件,培养方法,勿堆放过挤,及时剔除污染瓶(袋),栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧,控制菌龄(菌丝长满7-10天后使用),25,t课件,五.二、三级菌种的质量鉴定,菌丝白(或呈该菌种应有的颜色)均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快,无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象,菌种出售必须贴有菌种质量合格标签,标明菌种种类、级别、品种、生产单位和接种日期。,合格菌种,26,t课件,杂菌检查(菌种检查) 接种后的原种,一般在3d5d左右菌丝恢复生长,应每天全面检查杂菌情况,如有污染及时剔除。(正常为白色,若混有其它色泽,应及时处理);如发现接种块无新菌丝萌发,则认为
10、是死菌,应及时补种。 正常:菌丝白色 杂菌:黄、红、绿、黑 死菌:补种,27,t课件,菌种制作过程中,只要做到,选择正确的配方和优质原料,严格灭菌,优良的二、三级菌种,严格无菌操作,科学培育,选择优良菌种,28,t课件,六、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理细菌污染底部取菌:可根据细菌只发生在培养基表面,而真菌菌丝能穿透到培养基内部的特点,用无菌操作法敲破试管取出培养基,在培养基的底部挑取一小块带有菌丝的培养基,移植到另一试管中培养,可得到纯正的母种。,29,t课件,1、母种污染处理细菌污染覆盖培养:将熔化培养基冷却到40,倒在已污染细菌的斜面上,使之形成厚约20 cm的覆盖层
11、,当食用菌菌丝透过培养基形成新的菌落时,即可挑取转管纯化。,30,t课件,1、母种污染处理真菌污染 若污染的是青霉、黄霉、木霉等真菌,只要母种菌丝与这些杂菌没有相联或尚有一部分菌丝没有相联,并且这些杂菌的菌丝还没有产生孢子时,可以用无菌方法仔细挑取没有相联的一部分菌丝,移植到另外的试管中继续培育,就能得到纯正的母种。,31,t课件,2、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些?怎样鉴别? 根据杂菌开始发生的部位,大致有以下几种污染原因:若杂菌同时在培养基的上、中、下部位发生,主要是由于培养基灭菌不彻底造成的。若杂菌开始发生在接种块上,这很可能是母种或原种已经感染了杂菌;或者是由于接种工具不严格(消毒
12、),把杂菌带入。,32,t课件,2、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些?怎样鉴别?若杂菌先在培养基表面发生,这是由于接种过程中无菌操作不严而引起的。若杂菌是在接种后若干天才发生的,而且是发生在瓶口往下挂的,这说明杂菌是从棉花塞侵入培养基的。引起的原因是培养室湿度过大、棉塞受潮,造成霉菌滋生所致。,33,t课件,3、为什么母种不能多次转管移植? 母种转管次数多了会削弱菌丝的生活力,降低出菇率,甚至造成菌丝不孕而不能形成子实体。因此母种培育可以一次多培育几支试管,不要反复多次分离转管,以确保菌丝旺盛的生活力。(发生变异),34,t课件,4、优良菌种的标准是什么? 各种食用菌菌种,既有特定的质量标准
13、,也有共同的质量标准。这些共同的质量标准主要是纯、壮两条。纯:除银耳菌种,其余各种栽培食用菌均是一种菌丝体的纯培养物,不得混入杂菌或纯培养物以外的其它菌种。例如:香菇7925菌种,只能是7925菌株菌丝体的纯培养。,35,t课件,复习思考题,1简述二、三级菌种的制作流程。 2根据实际操作说明如何测定培养基的含水量和pH值。 3. 分装培养料时,为何要在料中打一个孔? 4. 简述二、三级培养基的灭菌方法及要求。 5. 如何检验二、三级菌种培养基的灭菌效果? 6. 简述一级菌种转接二级菌种,二级菌种转接三级菌种的过程。 7. 合格的培养室有什么要求? 8试述二、三级菌种的培养方法? 9如何检查二、三级菌种质量? 10请你以一个菌种厂厂长或技术员的身份,谈谈如何搞好菌种生产。,36,t课件,再见,37,t课件,