《传染病实验课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《传染病实验课件.ppt（86页珍藏版）》请在三一办公上搜索。
1、,兽医传染病学实验 尹会方 2012.10.12,本学期实验内容：,实验一、消毒、病料的取材送检和免疫接种实验二、猪瘟的实验室诊断实验三、副猪嗜血杆菌病的实验室诊断实验四、鸡新城疫的诊断实验五、猪伪狂犬的实验室诊断实验六、常见细菌性疾病的诊断和分离培养实验七、研究所实习,兽医传染病学实验须知,一、注意个人安全预防避免病原传播 1实验时(接近病畜或进行操作)，必须穿着工作衣帽及口罩，必要时(接触或操作危险材料时)，须穿戴胶靴、围裙、袖套、手套及眼镜。上述衣物使用后应立即就地消毒清洗，必须携回处理时，要包扎严密，保证安全。 2实验进行期间，不得进食、饮水和吸烟，勿以手指或其他器物等接触口唇，眼、鼻
2、及面部。操作时(尤其是危险的操作)，务须严肃认真，聚精会神，不得顾盼言他。手及面部有伤口时，应避免危险的操作，必须操作时应涂碘酒，用胶布包扎，或戴橡皮手套。,3注意危险构料的使用及处理。危险材料以及被其污染的器物不能及时正确地处理，是人畜的严重威胁及发生事故的重要原因。为此，应做到下列各点：,(1)使用危险材料应行无菌操作，盛危险材料的器皿应慢拿轻放，拿牢放稳则不得平放，以防液体流出。(2)实验用过的动物尸体，内脏、血液等废弃病料，以及废弃的病原培养物，生物制品等，须严加消毒(焚烧、煮沸、高压灭菌等)或深埋，严禁到处沾污。用过的棉球、纱布等污物，亦须放入固定的容器内统一处理，不得任意抛弃。(3
3、)被污染的器械应放入一定的器皿中消毒、清洗，不得随处乱放。,(4)万一危险材料滴出或打翻，或发生其他意外，应立即报告指导教师及时处理如手指及皮肤被污染，应立即用23来苏儿(或其他适当的消毒药)洗涤，或用酒精棉球擦拭，若被溅入眼中，应即用5硼酸溶液冲洗，吸入口中的可用10硼酸溶液漱口，必要时立即就医，衣帽被污染，可用5石炭酸、10福尔马林等浸湿消毒，必要时须用碱水煮洗或高压灭菌，桌面，地板或土地被污染时，应用5石炭酸或10福尔马林或其他适当消毒药液蘸湿布片覆盖，经半小时拭去洗净，或倾注多量药液使充分湿透。,二、一般注意事项,1实验前应对实习内容进行预习。明确实习目的，复习有关的基础知识及操作技术
4、，以免实习时计划不周，徒劳忙乱，影响实习效果。2实验时应作记录。事先准备一个专用的笔记本，在实习时就实习的题目、内容、方法和结果等作必要的或详细的记录，以供日后查阅参考。,3遵守实验程序，服从教师指导。4要有谦虚认真、实事求是的科学态度，对任何细微或简单的操作，均不可潦草应付或不动手。 5爱惜药械和仪器。使用药品力求节省，不可浪费。对器械，特别是精密仪器，必须按照教师指导的方法和步骤进行操作，切不可粗心大意，草率从事，以免发生损坏。,实验一 消 毒,目 的：1掌握畜舍、实验室、土壤、粪便等的消毒方法。 2了解检查消毒质量的方法。,一、消毒的器械,喷雾器：用于喷洒消毒液的器具称为喷雾器，拄其原理
5、来说，喷雾器与吸入或压力唧筒相似。喷雾器有两种，一种是手动喷雾器，一种是机动喷雾器。前者有背携式和手压式两种(图11、2、3)，常用于小量消毒；后者有背携式和担架式两种(图14、5)，常用于大面积消毒。,火焰喷灯：是利用汽油或煤油做燃料的一种工业用喷灯(图2)，因喷出的火焰具有很高的温度，所以在兽医实践中常用以消毒各种被病原体污染了的金属制品，如管理家畜用的用具，金属的鼠笼、兔笼，捕鸡笼等。但在消毒时不要喷烧过久，以免将被消毒物品烧坏，在消毒时还应有一定的次序，以免发生遗漏。,二、畜舍的消毒,畜舍的消毒分两个步骤进行，第一步先进行机械清扫，第二步是化学消毒液消毒。机械清扫是搞好畜舍环境卫生最基
6、本的一种方法。据试验，采用清扫方法，可以使鸡舍内的细菌数减少21.5，如果清扫后再用清水冲洗，则鸡舍内细菌数即可减少5460。清扫、冲洗后再用药物喷雾消毒，鸡舍内的细菌数即可减少90。,化学消毒液消毒,用化学消毒液消毒时，消毒液的用量一般是以畜舍内每平方米面积用lL药液。消毒的时候，先喷刷地面，然后墙壁，先由离门远处开始，喷完墙壁后再喷天花板，最后再开门窗通风，用清水刷洗饲槽，将消毒药味除去否则家畜闻到消毒药味不愿吃食。,实行全进全出制度，每栋圈舍畜禽全群移出后，在新进畜禽前，必须对圈舍及用具进行全面彻底的严格消毒。,彻底消毒很重要,涮洗,火碱,清水,卫康,使用,备用,拒病于门外，鞋底是带病概
7、率最大的，我们的猪场经常为传染病而苦恼，可你可知道，我们常常在不知不觉中将病源菌带入您的养殖场,1畜舍的预防消毒：畜舍预防消毒在一般情况下，每年可进行两次(春秋各一次)。在进行畜舍预防消毒的同时，凡是家畜停留过的处所都需进行消毒。在采取“全进全出”管理方法的机械化养畜场，应在全出后进行消毒。产房的消毒，在产仔前应进行一次，产仔高峰时进行多次，产仔结束后再进行一次。畜舍预防消毒时常用的液体消毒剂有1020的石灰乳和10的漂白粉溶液，消毒方法如上。,畜舍预防消毒也可应用气体消毒。药品是福尔马林和高锰酸钾。方法是按照畜舍面积计算所需用的福尔马林与高锰酸钾量，其比例是：每立方米的空间，应用福尔马林25
8、ml，水12.5ml，高锰酸钾25g(或以生石灰代替)。计算好用量以后将水与福尔马林混合。,三、地面土壤的消毒,病畜的排泄物(粪、尿)和分泌物(鼻汁、唾液、奶汁和阴道分泌物等)内常常含有病原微生物，可污染地面、土壤，因此应对地面、土壤进行消毒，以防传染病继续发生和蔓延。消毒土壤表面可用含2.5有效氯的漂白粉溶液、4福尔马林或10氢氧化钠溶液。,四、粪便的消毒,1焚烧法：此种方法是消灭一切病原微生物最有效的方法，故用于消毒最危险的传染病病畜的粪便(如炭疽、马脑脊髓炎、牛瘟等),2化学药品消毒法：消毒粪便用的化学药品有含25有效氯的漂白粉溶液、20石灰乳。,3生物热消毒法：这是一种最常用的粪便消毒
9、法 (1)发酵池法： (2) 堆粪法：,五、污水的消毒,兽医院、牧场、产房、隔离室、病厩以及农村屠宰家畜的地方，经常有病原体污染的污水排出，如果这种污水不经处理任意外流，很容易使疫病散布出去，而给邻近的农牧场和居民造成很大的威胁。因此对污水的处理是很重要的。污水的处理方法有沉淀法、过滤法、化学药品处理法等。,六、皮革原料和羊毛的消毒,患炭疽、口蹄疫、猪瘟、猪丹毒、传染性贫血、传染性脑脊髓炎、布氏杆菌病、羊痘及坏死杆菌病的家畜皮毛均应消毒。,常用于皮毛消毒的药品和方法，是用福尔马林气体在密闭室中蒸熏。但此法可损坏皮毛品质，且穿透力低，较深层的物品难于达到消毒目的。目前广泛利用环氧乙烷(C2H40
10、)气体来进行消毒。此法对细菌、病毒、立克次氏体及霉菌均有良好的消毒作用，对皮毛等畜产品中的炭疽芽胞也有较好的消毒效果。 环氧乙烷的用量，如消毒病原体繁殖型，每立方米用300400mg，作用8小时；如消毒芽胞和霉菌，每立方米用700950mg左右，作用24小时。,七、消毒质量的检查,1房舍机械清除效果检查： 2消毒药剂选择正确性的检查： 3消毒对象的细菌学检查： 4粪便生物热消毒效果的检查： (1)测温法： (2)细菌学方法：,实验二 传染病病畜尸体的处理,目 的:掌握动物尸体的运送及处理办法。内 容 及 方 法:一、动物尸体的运送动物尸体运送前，所有参加人员均应穿戴工作服、口罩、风镜、胶鞋及手
11、套。运送尸体应用特制的运尸车(此车内壁衬钉有铁皮，可以防止漏水)运送。,装车前应将动物尸体各天然孔用蘸有消毒药液的湿纱布、棉花严密填塞，以免流出粪便、分泌物、血液等污染周围环境。在尸体躺过的地方应铲去表层土，连同尸体一起运走，并以消毒药液喷撤消毒。运送过尸体的用具、车辆应严加消毒，工作人员被污染的手套、衣物、胶鞋等亦应进行消毒。,二、处理动物尸体的方法:1掩埋法： 2焚烧法： 3化制法： 4发酵法：,实验三 免疫接种,目 的1.掌握免疫接种的方法与步骤。2.熟悉兽医生物制品的保存、运送和用前检查方法。,内 容 及 方 法,一、免疫按种的方法:免疫接种的方法很多，主要有注射免疫法、经口免疫法，气
12、雾免疫法等数种。注射免疫法中又可分为皮下接种、皮内接种、肌肉接种及静脉接种等四种。,1皮下接种法：对马、牛等大家畜皮下接种时，一律采用颈侧部位，猪在耳根后方，家禽在胸部、大腿内侧。根据药液的浓度和家畜的大小而异，一般用1620号针头，长约1.22.5cm。家禽则应采用针孔直径小于20号的针头。皮下接种的优点是操作简单，吸收较皮内接种为快，缺点是使用剂量多。而且同一疫苗，应用皮下接种时，其反应较皮内为大。大部分常用的疫苗和免疫血清，一般均采用皮下接种。,2皮内接种法：马的皮内接种采用颈侧、眼睑部位。牛及羊除颈侧外，可在尾根或肩胛中央部位。猪大多在耳根后。鸡在肉髯部位。现用兽医生物制品用作皮内接种
13、的，仅有羊痘弱毒菌苗，猪瘟结晶紫疫苗等少数制品，其他均属于诊断液方面。 皮内接种的缺点是手续比较麻烦。,接种技术,皮下注射时，猪应被保定，选择皮肤松弛部位,3肌肉接种法：马、牛、猪、羊的肌肉接种，一律采用臀部和颈部两个部位。鸡可在胸肌部接种。 现有兽医生物制品，除猪瘟弱毒疫苗、牛肺疫弱毒疫苗以及在某些情况下接种血清采用肌肉接种外，其他生物制品一般都不应用此法进行接种。 肌肉接种的优点是药液吸收快，注射方法也较简便，其缺点是在一个部位不能大量注射。同时臀部接种如部位不当，易引起跛行。,接种技术,良好的技术和正确的注射部位,接种技术,正确的注射角度：与注射部位正切面垂直,接种技术,注射部位太高、角
14、度不正确,2022/12/11,46,2022/12/11,47,2022/12/11,48,2022/12/11,49,4静脉接种法：马、牛、羊的静脉接种，一律在颈静脉部位，猪在耳静脉部位。鸡则在翼下静脉部位。 现用兽医生物制品中的免疫血清，除了皮下或肌肉接种外，亦可采用静脉接种，特别在急于治疗传染病患畜时。疫苗、菌苗、诊断液一般不作静脉注射。 静脉接种的优点是可使用大剂量，奏效快，可以及时抢救病畜。缺点是手续比较麻烦，如设备与技术不完备时，难以进行。,5经口免疫法：分饮水免疫和喂食免疫两种，前者是将可供口服的疫(菌)苗混于水中，畜禽通过饮水而获得免疫，后者是将可供口服的疫(菌)苗用冷的清水
15、稀释后拌入饲料，畜禽通过吃食而获得免疫。本法具有省时、省力的优点，适于大群畜禽的免疫，缺点是由于畜禽的饮水量或吃食量有多有少，因而进入每头动物体内的疫(菌)苗数量，不能象其他方法那样准确一致,6气雾免疫法：此法是用压缩空气通过气雾发生器，将稀释疫(菌)苗喷射出去，使疫（菌）苗形成直径1一l0m的雾化粒子，均匀地浮游在空气之中，通过呼吸道吸入肺内，以达到免疫。 雾化粒子大小与免疫效果有很大关系。一般粒子大小在1一l0m为有效粒子。气雾发生器的有效粒子在70以上者为合格。,接种后观察,正常反应：食欲减退严重反应: 过敏性休克 全身感染 变态反应：荨麻疹措施：急救 地米、肾上腺素 对局部炎症 消炎消
16、肿 合并感染 抗生素治疗,(1) 室内气雾免疫法：此法需有一定的房舍设备。免疫时，菌苗用量主要根据房舍的大小而定，可按下式计算：菌苗用量=DA/TV式中： D计划免疫剂量； A免疫室容积(L)； T免疫时间(分钟)； V呼吸常数，即动物每分钟吸入的空气量(L)。,(2) 野外气雾免疫法：菌苗用量主要以动物数量而定。以羊为例，如为1000只，每羊免疫剂量为50亿活菌，则需50 000亿，如果每瓶菌苗含活菌4000亿，则需12.5瓶，用500ml灭菌生理盐水稀释。本法具有省时、省力的优点，适于人群动物的免疫，缺点是需要的疫（菌）苗数量多。,免疫接种用生物制品的保存、运送和用前检查,1兽医生物制品的
17、保存：各种生物制品应保存在低温、阴暗及干燥的场所，死菌苗、致弱菌苗、类毒素、免疫血清等应保存在215防止冻结；弱毒疫苗，如猪瘟兔化弱毒疫苗、鸡新城疫弱毒疫苗等，应置放在0以下，冻结保存。,2兽医生物制品的运送：要求包装完善，防止碰坏瓶子和散播活的弱毒病原体。运送途中避免日光直射和高温，并尽快送到保存地点或预防接种的场所。弱毒疫苗应放在装有冰块的广口瓶内运送，以免其性能降低或丧失。,3兽医生物制品的用前检查：各种兽医生物制品在使用前，均需详细检查，如有下列情况之一者，不得使用。(1) 没有瓶签或瓶签模糊不清，没有经过合格检查的。 (2) 过期失效的。(3) 生物制品的质量与说明书不符者，如色泽、
18、沉淀有变化，制剂内有异物、发霉和有臭味的。,(4) 瓶塞不紧或玻璃破裂的。(5) 没有按规定方法保存，加氢氧化铝的死菌苗经过冻结后，其免疫力可降低。 经过检查，确实不能使用的生物制品，应立即废弃，不能与可用的生物制品混放在一起，决定废弃的弱毒生物制品应煮沸消毒或予以深埋。,四、免疫接种的组织及接种时的注意点,在某一地区或农牧场进行接种时的组织工作是特别重要的。因为它可以决定全部措施的结果和成效。接种时的组织工作如下： 1在某一地区或农牧场进行免疫接种时，应取得地区或农牧场领导的支持，并商请给以人力保证。2对饲养员、工人进行适当的兽医宣传，宣传内容包括有关接种工作的基本原理及其在防制家畜传染病上
19、的重要性、接种后家畜的饲养管理条件等。3准备适当的场地和保定工具。4编订全部注射家畜的登记表册，并准备给家畜编号的器具，以免错乱而造成重复注射。,实验四 病料的取材和送检,目 的:学会被检病料的采取、保存、包装、记录的方法。,内 容 及 方 法,一、病料的采取:1解剖前检查： 患畜(包括马、牛、羊及猪等)有急性死亡时，未解剖之前，必须用显微镜检查其血液抹片或脾脏触片中是否有炭疽杆菌存在。如怀疑是炭疽时，则不可随意解剖，可采取患畜的血液或脾脏(局部解剖)检查。只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。解剖时，采取有病变之脏器或组织送往实验室，以便证明其病因。,2取材时间：内脏病料的采取，须于患畜死后立
20、即进行，最好不超过6小时，否则时间过长，由肠内侵入其他细菌，致使尸体易于腐败，有碍于病原菌的检出。,3应用器械的消毒： 刀、剪、镊子等用具可煮沸消毒30分钟，使用前，最好用酒精擦拭，并在火焰上烧一下。 采取一种病料，使用一套器械与容器，不可用其再采其他病料或容纳其他脏器材料。,4各种脏器及组织材料的采取：采取病料的种类，应根据不同的传染病，相应的采其脏器或内容物。在无法估计是某种传染病时，可进行全面的采取。为了避免污染杂菌，检查病变应待取材完毕后再进行。,(1) 脓汁：用灭菌注射器或吸管抽取或吸出脓肿深部的脓汁，置于灭菌试管中。若为开口的化脓灶或鼻腔时，则用无菌棉签浸蘸后，放在灭菌试管中。(2
21、) 淋巴结及内脏：将淋巴结、肺、肝、脾及肾等有病变的部位各采取1一2cm3的小方块，分别置于灭菌试管或平皿中。若为供病理组织切片的材料，应将典型病变部分及相连的健康组织并切取，组织块的大小每边约2cm左右，同时要避免使用金属容器，尤其是当病料供色素检查时(如马传贫、马脑炎及焦虫病等)，更应注意。,(3) 血液：血清：以无菌操作吸取血液10ml，置于灭菌试管中，待血液凝固(经12天)析出血清后，吸出血清置于另一灭菌试管内，如供血清学反应时，可于每毫升中加入5%石炭酸水溶液12滴。,全血：采取l0ml牛血，立即注入盛有5柠檬酸钠lml的灭菌试管中，搓转混合片刻后即可。心血：心血通常在右心房处采取，
22、先用烧红的铁片或刀片烙烫心肌表面，然后用灭菌的尖刃外科刀自烙烫处刺一小孔，再用灭菌吸管或注射器吸出血液，盛于灭菌试管中。,(4) 乳汁：乳房先用消毒药水洗净(取乳者的手亦应事先消毒)，并把乳房附近的毛刷湿，最初所挤的3-4股乳汁弃去，然后再采集l0ml左右乳汁于灭菌试管中。若仅供显微镜直接染色检查，则可于其中加入0.5的福尔马林液。(5) 胆汁：先用烧红的刀片或铁片烙烫胆囊表面再用灭菌吸管或注射器刺入胆囊内吸取胆汁，盛于灭菌试管中。,(6) 肠：用烧红刀片或铁片将欲采取的肠表面烙烫后穿一小孔，持灭菌棉签插入肠内，以便采取肠管粘膜或其内容物，亦可则线扎紧一段肠道(约6cm)两端，然后将两端切断，
23、置于灭菌器皿内。(7) 皮肤：取大小约10l0cm2的皮肤一块，保存于30甘油缓冲溶液中，或l0饱和盐水溶液中，或10福尔马林液中。,(8) 胎儿：将流产后的整个胎儿，用塑料薄膜、油布或数层不透水的油纸包紧，装入木箱内，立即送往实验室。(9) 小家畜及家禽：将整个尸体包入不透水塑料薄膜、油纸或油布中，装入本箱内，送往实验室。,(10) 骨头：需要完整的骨头标本时，应将附着的肌肉和韧带等全部除去，表面撒上食盐，然后包于浸过5石炭酸水或0.1升汞液的纱布或麻布中，装于木箱内送到实验室。(11) 脑、脊髓：如采取脑、脊髓作病毒检查，可将脑、脊髓浸入50甘油盐水液中或将整个头部割下。包入浸过0.1%升
24、汞液的纱布或油布中，装入木箱或铁桶中送检。,(12) 供显微镜检查用的脓、血液及粘液抹片：先将材料置玻片上，再用一灭菌玻棒均匀涂抹或另用一玻片抹之。组织块、致密结节及脓汁等亦可压在二张玻片中间，然后沿水平面向两端推移。用组织块作触片时，持小镊将组织块的游离面在玻片上轻轻涂抹即可。,二、病料的保存,欲使实验诊断得出正确结果，除采取适当的病料外，尚需使病料保持在新鲜或接近新鲜状态，以免病料送达实验室时已失去原来状态，而影响工作。,1常用的保存剂：,(1) 病理组织材料：常用者为10福尔马林液，亦可用95-100酒精等，上述任何一种保存液的用量均需较标本大10倍。如用10福尔马林液固定组织时，经24
25、小时应重换新鲜液一次。 神经系统组织(脑、脊髓等)，需固定于10中性福尔马林溶液内。中性福尔马林溶液的配制法是于福尔马林液的总容积中，加510碳酸镁。 在寒冷季节，为了避免病料冻结，在运送前，可将预先用福尔马林固定过的病料置于含有30一50甘油的10福尔马林溶液中。,(2) 细菌检验材料：一般用灭菌的液体石蜡、30甘油缓冲盐水或饱和氯化钠溶液。供细菌检验的液体，可用封闭的巴斯德毛细玻管或试管运送。寄送肠道时，先清除肠内粪团，用灭菌盐水清洗后，置于盛有上述保存剂的试管中即可。生前由直肠中采取的粪便，可移入灭菌容器中寄送。,(3) 病毒检验材料：一般用灭菌的50甘油缓冲盐水或鸡蛋生理盐水溶液。(4
26、) 血清学检验材料：固体材料(如小块肠、耳、脾、肝、肾及皮肤等)可用硼酸或食盐处理，液体材料(如血清等)可在每毫升中加入35石炭酸溶液12滴。,2几种保存剂的配制法(1) 30甘油缓冲盐水溶液 纯中性甘油 30ml 氯化钠 0.5g 碱性磷酸钠 1.0g 0.02酚红 1.5ml 中性蒸馏水加至 l00ml混合后，在151磅高压灭菌器中灭菌30分钟。,(2) 50甘油缓冲盐水溶液： 氯化钠 2.5g 酸性磷酸钠 0.46g 碱性磷酸钠 10.74g 纯中性甘油 150ml 中性蒸馏水 50ml 混合分装后，在151b*高压灭菌器内灭菌30分钟。,(3) 10福尔马林溶液：取福尔马林10ml加入
27、蒸馏水90ml即成。(4) 饱和食盐水溶液：取一定量的蒸馏水加入纯氯化钠，不断搅拌至不能溶解为止(一般为3839左右)，然后用滤纸过滤。,(5) 鸡蛋生理盐水溶液：先将新鲜鸡蛋的表面用碘酒消毒，然后打开将内容物倾入灭菌的三角瓶中，加灭菌盐水(占总量的10)，摇匀后，用无菌纱布过滤，然后加热至5658历时30分钟，第二天及第三天按上法再加热一次，即可应用。,三、病料的记录、包装和运送方法,1病料送往检验室时，应附病料送检单，该单需复写三份，其中一份存根，两份寄往检验室，待检查完毕后，退回一份。,2病料的包装和运送： (1) 液体病料(如粘液、渗出物、尿及胆汁等)最好收集在灭菌的细玻璃管中，管口用
28、火焰封闭，封闭时，注意勿使管内病料受热。 将封闭的玻管用废纸或棉花包裹，装入较大的试管中，再装在木盒中运送。用棉签蘸取的鼻液及脓汁等物，可置于灭菌试管内，剪取多余的签柄，严密加塞，用蜡密封管口，再装在木盒内寄送。,(2) 装盛组织或脏器的玻制容器，包装时力求细致而结实，最好用双重容器(图15)。将盛材料的器皿加塞用蜡封口后，置于内容器中，内容器中衬垫废纸。当气候温暖时，须加冰块，但需避免病料标本直接与冰块接触，以免冻结。 当怀疑为危险传染病(炭疽、口蹄疫等)的病料时，应将盛病料的器皿置于金属匣内，将匣焊封加印后装入木匣寄送。,(3) 病料装于容器内至送到检验部门的时间，应越快越好。运送途中，须避免病料接触高温及日光，以免材料腐败或病原体死亡。,
