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1、第十四章,抗生素类药物的分析,第一节 概述,抗生素的定义,抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。,1. 生物合成（发酵）,2. 化学合成或半合成,抗生素的来源,抗生素类药物的特点,3、稳定性差,1、化学纯度较低,2、活性成分易发生变异,抗生素质量的复杂性,产品稳定性差,分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作用,发酵过程不易控制易受污染,生产工艺复杂,发酵液中杂质,无机盐、脂肪、各种蛋白质、各种降解产物、色素、热原、毒性物质,增加 异常毒性、细菌内毒素、热原、降压物质、无菌,检查,含量测定方法,（一）生物学方法,测定抗生素抑菌或杀菌的
2、能力,（二）化学及物理化学方法,以理化方法测定主药含量,分类（按结构）： 内酰胺类、 氨基糖苷类、 四环素类、 大环内酯类、 氯霉素类、 多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、 其他抗生素类,第二节 内酰胺类抗生素,青霉素类,头孢菌素类,青霉素,（青霉素G、苄青霉素）,氨苄西林（氨苄青霉素）,阿莫西林（羟氨苄青霉素）,普鲁卡因青霉素,头孢氨苄,头孢羟氨苄,酸性,一、结构与性质,与碱金属(Na+、K+)成盐,（一）羧基,易溶于水,与有机碱(普鲁卡因)成盐,难溶于水,普鲁卡因青霉素,（二）手性C,头孢菌素类 C6 C7,青霉素类 C3 C5 C6,旋光性,（三）共轭体系,青霉素类 母核无明显UV 多数有苯
3、环取代基,UV,（四）内酰胺环的不稳定性,水溶液 不稳定,干燥纯净 稳定,不稳定性因素,四元环张力大 (内酰胺环),酰胺键易水解,（一）呈色反应,1. 羟肟酸铁反应,-内酰胺类,NaOH,呈色,二、鉴别,（红、棕、褐）,. 双缩脲反应,-内酰胺类,（开环分解）,似肽键,2、肽键特征反应,. 茚三酮反应,-氨基,蓝紫色,3. 与重氮苯磺酸反应,（偶合）,酚羟基,头孢哌酮,（二）沉淀反应,1.钠盐反应 ： 遇酸,在过量HCl或有机溶剂中溶解,2. 有机胺盐反应,（1）重氮化 - 偶合反应,重氮化-偶合反应,芳伯氨基,普鲁卡因,普鲁卡因青霉素,1、,UV法,样品、分解产物,Cu2+,头孢氨苄 max
4、 = 262nm,青霉素V钠 A280nm/A264nm = 1.301.50,-内酰胺环,仲酰胺基,对照品对照法,三、特殊杂质的检查,（一）高分子杂质检查 分子排阻色谱法、离子交换色谱法、反相色谱法（二）吸光度检查,（水解）,青霉素类,ChP,四、含量测定,样品,以未经水解的样品作空白测定,例,青霉素钠 含量测定,取本品约50mg，精密称定，加水5ml溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置15分钟，加1mol/L硝酸溶液5ml，醋酸盐缓冲液(pH4.6)20ml及水20ml，摇匀，照电位滴定法(附录 A),用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极为参比电极，在3540，用硝酸汞滴定
5、液(0.02mol/L)缓慢滴定，,（控制滴定过程约为15分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相当于7.128mg的总青霉素(按C16H17N2NaO4S计算)。 另取本品约0.5g，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液(0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上.,每1ml硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当于7.128mg的降解物（按C16H17N2NaO4S计算）。 总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。,（1）以第二次滴定突跃为终点 电位法指示终
6、点,（2）反应摩尔比 1 : 1,（3）空白试验 消除已降解产物干扰,（4）优点 不需标准品,精密称取含水量为0.5%的青霉素钠0.0502g，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。,例,青霉素钠 含量测定,ChP 头孢菌素类,特点 快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）,哌拉西宁 原料药 含量测定色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇0.2mol/L磷
7、酸二氢钠溶液10氢氧化四乙基铵溶液水（400503547）用磷酸调节pH值至5.5为流动相。检测波长为254nm。,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素 庆大霉素阿米卡星 新霉素卡那霉素 妥布霉素,链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基-L-葡萄糖胺,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L-葡萄糖胺,链霉胍,链霉糖,N-甲基-L-葡萄糖胺,绛红糖胺 + 2-脱氧链霉胺 + 加洛糖胺,绛红糖胺,紫素胺,2-脱氧链霉胺,加洛糖胺,N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺,庆大霉素C复合物 庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素C2a
8、R=CH3 R1= R2=H 庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3,多与硫酸成盐,碱性,二糖胺结构，PH47稳定 酸性：链霉胍链霉双糖胺 N-甲基-L-葡萄糖胺 碱性：链霉胍链霉双糖胺 麦芽酚（专属）,庆大霉素 pH212,（二）旋光性,链霉素在230nm处有吸收，庆大霉素、奈替米星无,羟基胺结构,链霉胍特有反应,8-羟基喹啉, -萘酚,链霉糖特有反应,紫红,麦芽酚,吡咯衍生物,红色,（Elson-Morgan反应）,硫酸盐反应,H+,CHP 庆大霉素及其制剂,链霉素B（甘露糖链霉素）,方法 TLC中的对照品法 （CHP、BP）,1. 来源 反应中间体,操作方法：供试品溶液：0.25mg
9、10mg/ml甲醇液对照溶液：甘露糖36mg-72ug/ml(1mg甘露糖相当于.13mg的链霉素）薄层板：硅胶展开剂：甲苯醋酸甲醇（：） 显色剂：.2%1,3-萘二酚乙醇溶液与20%硫酸液等体积混合。,四、含量测定,链霉素、庆大霉素,微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。,第四节 四环素类抗生素,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,四环素（TC）tetracycline,金霉素 (CTC) chlortetracycline,氯四环素,土
10、霉素 (OTC) oxytetracycline,氧四环素,多西环素 (DOTC) doxycycline,脱氧土霉素,美他环素（METC） metacycline,结构特点,Your company slogan,四并苯或萘并萘衍生物,1、酸碱性与溶解度（两性化合物、具引湿性） C4：二甲氨基N(CH3)2弱碱性 C10：酚羟基(-OH);共轭系统弱酸性 临床多为盐酸盐。盐酸盐易溶于水，溶于酸、碱溶液，不溶于有机溶剂。,（二）性质,PH4.5-7.2,难溶于水PH8 or4,溶解度增加,游离碱,2、旋光性 具有不对称碳原子，有旋光性，可定性、定量。3、紫外、荧光性质 共轭双键系统UV 降解产
11、物FLA 四环素降解后呈黄色荧光，区别于其他抗生素,4、不稳定性（1）差向异构化性质（四环素、金霉素） 四环素在PH2.0-6.0发生，C4构型改变。抗菌能力减弱或消失。,土霉素、多西环素，C5羟基和C4二甲氨形成氢键，结构稳定。,（2）降解性质（四环素、金霉素） 酸性降解：PH2，C环脱水，生成脱水四环素。,A脱水金霉素435nmA脱水四环素445nm,淡黄黑,（3）碱性降解：碱性溶液中，-OH作用，C环开环，形成无活性内酯，生成异四环抗生素。,异四环素,UV,正相分配薄层 色谱,EDTA 克服痕量金属造成的 拖尾现象, 4-差向四环素（ETC） 脱水四环素（ATC） 差向脱水四环素（EAT
12、C） 盐酸金霉素（CTC）,HPLC法（2010版）,标准品对照法,盐酸四环素,杂质吸收度,（2010版A530）,ChP、USP,HPLC法（外标法）,系统适用性试验 1. 防护柱2. 预试溶液 4-差向脱水四环素 四环素3. RSD2.0%,JP 比色法（标准曲线法）,原理,1. 熟悉抗生素类药物分析的特点及其 常规检验项目。了解抗生素类药物 的分析现状，熟悉生物学法与物理 化学法测定效价的原理及优缺点。2. 掌握内酰胺类抗生素的结构、 性质、鉴别及含量测定。,第十一章 复习内容,3. 掌握氨基糖苷类抗生素的结构、性 质及鉴别，了解其检查及含量测定4. 掌握四环素类抗生素的结构及性质，了解
13、其鉴别、检查及含量测定5. 了解抗生素类药物的质量考察方法,1下列哪个药物会发生羟肟酸 铁反应 A. 青霉素 B. 庆大霉素 C. 红霉素 D. 链霉素 E. 维生素C,2中国药典(2010年版)测定头孢菌素类药物的含量时，多数采用的方法是 A. 微生物法 B. 碘量法 C. 汞量法 D. 正相高效液相色谱法 E. 反相高效液相色谱法,3属于-内酰胺类的抗生素药物有 A. 青霉素 B. 红霉素 C. 头孢菌素 D. 庆大霉素 E. 四环素,4能和茚三酮发生呈色反应的物质有 A链霉素 B庆大霉素 C土霉素 D氨基酸 E苯巴比妥,5.青霉素类药物可用下面哪些方法测定 A. 三氯化铁比色法 B. 汞
14、量法 C. 碘量法 D. 硫醇汞盐法 E. 酸性染料比色法,6能发生重氮化一偶合反应的抗 生素类药物是 A. 青霉素 B. 庆大霉素 C. 苄星青霉素 D. 盐酸四环素 E. 普鲁卡因青霉素,7. 以下反应可适用的药物 A. 青霉素 B. 链霉素 C. 两者均能 D. 两者均不能 Kober反应 羟肟酸铁反应 坂口反应 N甲基葡萄糖胺反应 在酸性溶液中水解,D,A,B,B,C,8：可以鉴别的药物是 A. 链霉素 B. 庆大霉素 C. 两者均可 D. 两者均不可 用Kober反应 用坂口反应 用麦芽酚反应 用三氯化铁反应 用茚三酮反应,D,A,A,D,C,问题4650 A. 茚三酮反应 B. 麦芽酚反应 C. 坂口反应 D. FeC13反应 E. 羟肟酸铁反应 46头孢唑林钠 47金霉素 48链霉素 49庆大霉素 50青霉素,E,D,E,A,ABC,（ ）青霉素分子能与碘定量反应，因此可以根据消耗的碘量计算青霉素的含量。,9四环素在酸性条件下的降 解产物是 A. 差向四环素 B. 脱水四环素 C. 异四环素 D. 去甲四环素 E. 去甲氧四环素,
