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1、电泳技术与自动化,电泳是指带电荷的溶质或粒子在电极的作用下在液体介质中的泳动。,电泳技术的分类,1、基础的电泳技术,淀粉凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是一种实用的电泳技术。它用的介质是一种纯化的、主要是中性部分的琼脂，即琼脂糖。这一技术已成功能应用到血清蛋白、血红蛋白、乳酸脱氢酶及肌酸激酶、脂蛋白等物质的分离。琼脂糖优点是对蛋白质的亲和力低，干燥后透明度高，便于密度检测。醋纤膜电泳圆盘电泳聚丙酰胺凝电泳等电聚焦电泳二维电泳高分辨电泳,1、毛细管电泳2、与免疫学技术结合衍生出的电泳技术免疫电泳交叉免疫电泳对流免疫电泳免疫固定电泳 广泛用于蛋白质的鉴定。它是免疫蛋白混合液在琼脂糖凝胶上进行
2、电泳，再在胶上直接加入相应抗血清，抗原抗体复合物沉淀下来。这些免疫沉淀物在凝胶上固定下来，不沉淀的蛋白质在胶上可以洗脱。对凝胶进行染色，即可将蛋白质鉴定出来。目前广泛应用于骨髓病蛋白的评价上。,电泳技术与自动化,1、电泳系统：HYDRASYS全自动电泳系统，以琼脂糖凝胶为载体，自动点样、电泳孵育、染色、脱、烘干。采用微孔滤纸渗透的专利点样技术，电脑程控化管理，快捷简便的人机对话2、HYRYS-PHORFSIS光密度扫描仪，程序化多功能全自动学密度仪。,血清蛋白电泳,血清蛋白质在一种指定的缓冲液，直流电场中，每种蛋白质按各自的速度迁移，根据它们所带的电荷而分离。,正常血清电泳分离出5个区带：白蛋
3、白、1球蛋白、2球蛋白、球蛋白、球蛋白。每个区带含1种或多种血清蛋白成分。按迁移递减次序排列依次是1、白蛋白:迁移最快，最大的部分，靠近凝胶的阳极2、1球蛋白:相当于1-抗胰蛋白酶及血清类粘蛋白3、2球蛋白:相当于：触珠蛋白、2巨球蛋白、血浆铜蓝蛋白、GC球蛋白及脂蛋白4、球蛋白:相当于：转铁蛋白、脂蛋白及补体、特殊情况下，可迁移成清晰的1和2带。5、球蛋白:相当于血清免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）,图谱(正常),特殊情况1、单克隆免疫球蛋白病 出现异常的尖峰，通常出现迁移到区，但有时迁移到或2区。但并非所有的单克隆免疫蛋白均为恶性型的。,单克隆免疫球蛋白电泳图谱,本周蛋白(免疫固定电泳
4、),2、非恶性型或独特型球蛋白病有下列特征, 单克隆的峰值弱小 单克隆组分的浓度整个过程无变化 多克隆免疫球蛋白不减少 本周蛋白很少出现此类病人可检测免疫固定电泳，确定为哪类单克隆免疫球蛋白且必须有规律地监控这类病人3、年龄变化 :10到16岁以前，球蛋白未达到正常水平。达到40岁时，白蛋白和球蛋白通常增加。4、脐带的表现:白蛋白减少，和2球蛋白减少。球蛋白正常（主要来自母体）,白蛋白区带的改变,1、双白蛋白血症 遗传性变异、大剂量酰胺类抗生素治疗、胰蛋白酶对白蛋白内部水解所致胰腺炎2、近乎完全缺乏区带 先天性白蛋白缺乏症3、白蛋白减少4、高白蛋白血症 血液浓缩,1球蛋白区带的改变,减少 肝功
5、能衰竭、营养不良、蛋白丢失、先天性1抗胰蛋白酶缺乏增多 炎症，常伴有2球蛋白,2球蛋白区带的改变,1、双区带现象 结合珠蛋白表型差异、单克隆性游离轻链迁移2、减少 肝功能衰竭、营养不良、蛋白丢失、血管内溶血结合珠蛋白下降3、增多 炎症综合征、肾病综合征,球蛋白区带改变,1、减少 肝功能衰竭、低补C32、增多 非单克隆因素,球蛋白区带变化,1、低球蛋白血症2、高球蛋白血症,血清蛋白电泳图谱变化表,血红蛋白电泳pH8.6 TEB缓冲液醋酸纤维膜电泳,点样 E D G K J H (异常条带) - A2 F A +（正常条带）,在HbA前出现快速异常：HbH，J，K组在HbA后出现慢速异常：HbG，
6、D，E组,图谱1,磷酸盐缓冲液(pH 6.5) 主要用于HbH和HbBarts的检出 HbH泳向（+），HbBarts则在点样点不动，而其余的血红蛋白都向（-） TEB缓冲液(pH 8.6) 适合于检出HbA、HbA2、HbS、HbC，但HbF不易与HbA分开，HbH与HbBarts不能分开和显示,箭头所指处为点样点3 和 6 为正常对照标本，1、2、4、5为病人标本,图2,临床应用：珠蛋白生成障碍性贫血,-珠贫 ：正常-珠蛋白合成减少的Hb病 -珠贫：正常-珠蛋白合成减少的Hb病 -珠贫：正常-珠蛋白合成均减少的Hb病,尿蛋白电泳分析与临床应用,尿蛋白的电泳分析主要根据蛋白质的分子量及电荷特
7、性而将其分离，形成电泳区带，染色，并用光密度扫描仪结合总蛋白定量，便可得出各区带蛋白的含量。 用尿标本进行电泳分析，并将尿标本中的各种蛋白成分按分子量大小排列，明确各种蛋白成分及所占比例，从而了解肾脏的病变部位。方法准确、灵敏度高，容易实现，仅用常规尿标本。（最好是晨尿） 可以对肾脏疾病作早期诊断/鉴别诊断及分型、治疗效果的观察、肾活检（属创伤性诊断）前的筛查、甚至代替肾活检。,尿蛋白的概念：,1）生理尿：50-150mg/每天。通常小于100mg/每天，主要成分是白蛋白。2）病理尿：大于180毫克/每天，成分可能有大或中或小分子蛋白。,尿蛋白升高的原因：,1）生理性：餐后，运动，直立，紧张。
8、2）肾前性：高血压、高热、心脏、肝脏衰竭，溢出性尿。3）肾性：肾小球损伤、肾小管重吸收障碍及混合性损伤。4)肾后性：输尿管炎症及损伤。,图,原理,琼脂糖凝胶蛋白尿电泳图谱,病理蛋白尿的分型及诊断,肾前性蛋白尿肾前性蛋白尿常是由于高血压、高烧、心脏功能衰竭等原因所致。另一些情况血浆中高浓度蛋白，使得肾小球超负荷滤过及肾小管重吸收的相对减低，从而过量地出现于尿中。,肾性蛋白尿,1. 肾小球损伤的特征：由于肾小球滤膜的损伤，引致大分子蛋白分子透过滤膜，而肾小管无法将大分子蛋白重吸收，终尿可发现大中分子蛋白，主要包括：白蛋白、转铁蛋白、IgG、IgA、IgM、2巨球蛋白、触珠蛋白；2. 肾小管损伤的特征：由于肾小管受损，重吸收功能障碍，由于肾小球功能完好，大分子未被滤过，终尿可发现小分子蛋白，主要包括：2微球蛋白、视黄 醇结合蛋白、轻链、1微球蛋白、溶菌酶及少量的白蛋白；3. 混合性损伤：即肾小管、肾小球同时受损，终尿可发现上述所有分子。,肾小管蛋白尿,肾小球损伤,混合性蛋白尿,肾后性蛋白尿,可见于泌尿道上皮细胞分泌蛋白进入尿中，以及泌尿道损害引起血浆蛋白渗入尿中，像泌尿系的炎症等。泌尿道的损害常引起血尿和蛋白尿，这种蛋白尿可能不存在肾小球滤过和肾小管重吸收方面的改变。,溢出性蛋白尿,光密度仪扫描结果,
