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1、医学微生物学与免疫学实验中草药抗菌试验,黑龙江中医药大学教学实验中心医学形态室微生物与免疫学实验室 -李建志,1实验目的：掌握中草药抗菌实验的实验方法筛选出抗菌实验好的中药用于临床上疾病的治疗，用于教学和科研工作。2实验内容：（1）.中草药原液的制备（2）.肉汤培养基的制备（3）.试管法进行结果总判定3.实验材料:（1 ）药品蛋白胨，氯化钠，牛肉膏，蒸馏水，氢氧化钠等 （2 ）中药：黄连，连翘 （3 ）菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌 （4 ）器材：天平，砝码，吸管，PH试纸，洗耳球，试管等。,一.中草药原液的制备：（1）水浸剂:取一定量的中药加5倍量水 如黄连100克加蒸馏水500ml经浸泡后
2、放置于冰箱内过夜取出待达到室内温度后再加热100.30分钟 加石棉网防止玻璃器皿炸裂 用纱布过滤后取药渣再加5倍量水，再加热100，30分钟后 过滤将两次浸液混合，加热蒸发浓缩至100ml(每ml含生药1g) 做为100g/100ml浓度的中药原液。校正pH至7.47.6，使用离心机，离心后以8磅15分钟高压灭菌，待凉后放冰箱内备用。,（2）实验材料是中药丸剂时，应先将中药丸剂磨碎后，等量加水，如1g丸剂加水1ml，加水量应浸过丸剂药末，放冰箱内浸24小时，然后加热10030分钟后，补足失去的水分，高压灭菌8磅20分钟，待凉后放冰箱（保鲜室）内备用。,（3）实验材料如是片剂，则磨碎后加水配成1
3、000g/ml作为原液。如50mg药粉，则需加水50ml，溶解后即成1000mg/ml。,校正PH值至7.47.6。用离心机离心后分装试管中，安好棉塞。以8磅20分钟高压灭菌，待凉后放冰箱（保鲜室）内备用。,二.肉汤培养基的制备 1.成份： 牛肉膏：0.3g 蛋白胨: 1g Nacl: 0.5g 蒸馏水：100ml 2.加热完全溶解。3.校正PH值至7.47.6，过滤。 4.高压灭菌（ 8磅20分钟 )后放冰箱备用。,三试管法：,肉汤培养基(毫升) 1.5 1 1 1 1 1 1 1 1 1,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,中药原液(毫升) 0.5 1 1 1 1 1 1 1 1 弃
4、掉1ml,含中药原液稀释度 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 0,6h培养物1/1000稀释 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0 0.05,培养基: 第1管加1.5ml,以后每个管加1ml, 摇匀 中药原液(黄连): 先在第一支管加0.5ml,摇匀 从1管中吸出1ml放入2管中,摇匀,再从3 管中吸出1ml放入3管中, 依此类推,到第9管吸出1ml,弃掉加菌：除第9管外，每管加0.05ml 的菌液(大肠杆菌)。,37摄氏度 24小时培养 观察结果:,四.结果与测定：第9管不加菌做为药液对照。第10管不加药做为菌液生长情况对照。放37温箱中培养24小时，观察各管生长情况。最低抑菌浓度:凡能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该药物对试验菌的最低抑菌浓度（药物的抑菌效价）。然后，分别将未长菌的培养液再接种于适当的琼脂平板培养基上，如培养后重新长出试验菌，则说明该药物仅有抑菌作用，如没有细菌生长则说明该药有杀菌作用，也可依次找出最小杀菌浓度。,再见!,
