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1、第二节 中药制剂分析的一般程序,取样,鉴别,含量测定,检查,提取,纯化,一、取样 1.取样均匀、合理、代表性 2.按规定方法取样 （中药材、中药制剂）,二、鉴别（一）显微鉴别 在下列情况中应用：药材及炮制品的外形鉴别特征不明显或外形相似难于鉴别而组织构造不同时；药材破碎或呈粉末不易用肉眼辨认或区分时；含原药材粉末的中药制剂。,丸剂、片剂、胶囊剂、散剂 快速，简便，覆盖面大选择原则 1、应选有专属性的特征进行鉴别 2、多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别,安宫牛黄丸1、水牛角浓缩粉,2、麝香,3、珍珠,4、朱砂,5、雄黄,6、黄连,7、栀子,8、郁金,9、黄芩,显微化学反应鉴别法：一般可取药材切
2、片或粉末，中成药取粉末，置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察产生的结晶、沉淀物，以及特殊的颜色变化，作为鉴别特征。该法可以确定基础品种中特殊化学成分的存在及在组织中的分布。,(二）化学鉴别 抗干扰能力差,显色、荧光,例,二妙丸中苍术的鉴别,苍术酮苍术炔,（三）色谱鉴别TLC法应用最多（Rf、颜色、荧光）GC法 适用于含挥发性成分的药物HPLC法常与含量测定同时进行,鉴定有临床疗效的已知成分黄连 小檗碱（抗菌消炎） 麻黄 麻黄碱（支气管哮喘）乌头 乌头碱（毒性）洋地黄 强心苷（强心）延胡索 延胡索乙素（镇痛）,阴、阳对照法阳性对照 将要鉴别的药材按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶
3、液阴性对照 把制剂中要鉴别的药材除去，用剩下的各味药按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液,OO O O O O O O O O O 阴 样 阳 对 品 对,例,大补阴丸 黄柏的TLC法鉴别,例,薄层板的选择,硅胶G板（可加0.3% 0.5% CMC-Na） 多用氧化铝板 常用于生物碱类药物聚酰胺板 常用于黄酮类及酚类 药物 纤维素板 常用于氨基酸类药物,（四）中药鉴别新技术中药指纹图谱（色谱）1.定义： 中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的色谱分析手段，得到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的色谱图,2.色谱指纹图谱的基本属性 a.整体性 将指纹图谱作为一个整体来分析和比较它的综合
4、特征以达到鉴别的目的。 b.模糊性 强调分析、比较指纹图谱的相似性，而不是完全相同。 是一种综合的、量化的色谱鉴别手段。,色谱指纹图谱在中药质量评价中能够尽可能多地反应中药的全貌。 不需要清楚每一个组分的化学结构；不需要对每一个组分都进行定量；只要求不同批号的同一种药品的指纹图谱保持一致。,3. 指纹图谱的应用,雅莲,云莲,味莲,雅莲,云莲,I,III,II,诃 子,小诃子,大诃子,绒毛诃子,人参须根,人参主根,不同产地高良姜的气相指纹图谱,指纹图谱研究过程中的注意事项：1、在药效学指导下进行研究，保证指纹图谱反映的化学成分包括中药材中有效部位所含的绝大部分成分或有效成分的全部。2、样品的预处
5、理过程及测定方法应简便、经济、易行，且专属性、准确度与重现性好。,水分总灰分和酸不溶性灰分重金属砷盐残留农药,主要项目,杂质来源及检查意义水分 结块、霉变或有效成分水解灰分 控制药物本身及泥土、沙石等 无机杂质重金属 环境污染和使用农药引入砷盐 剧毒，常由除草剂、杀虫剂或 化肥引入残留农药 有毒,（一）水分测定法烘干法（不含或少含挥发性成分）甲苯法 （含挥发性成分）减压干燥法（含挥发性成分贵重药）GC法,酸不溶性灰分的测定,（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定总灰分的测定,干法破坏（ChP）,湿法破坏（USP）,碱融法破坏湿法破坏,碱融法,H+,（五）残留农药的测定1、总氯量的测定2、总磷量的测定
6、3、GC法,中国药典中药制剂含量测定所占比例 版本 % 1977 1.48 1985 5.31 1990 8.73 1995 12.81 2000 62.09 （HPLC 36% TLCS 24% GC 3%),测定成分的选定原则1.首选君药及贵重药、剧毒药建立含量、限量测定方法2.其次考虑臣药及其他味药3.有效成分明确的，可选有效成分,4.成分类别清楚的，可测某一类总成分的含量5.检测成分应归属某单一药味6.检测成分应与中医用药的功能主 治相近7.确无法含量测定的，可测定浸出 物含量,（一）化学分析法 重量分析法 容量分析法特点 A、准确度、精密度高 B、抗干扰能力差,（二）分光光度法UV法
7、 比色法特点 A、灵敏度高 B、简便、快速 C、精密度稍低 D、干扰多,芦丁,黄芩苷,小檗碱,丹皮酚,（三）TLCS法 测定薄层板上斑点对单色光的吸收或反射的强度而进行定量的方法特点 A、分离效果好 B、适用于无法用UV、HPLC 法测定的组分 C、准确度、精密度低于HPLC,2000年版中国药典（2000年版）薄层扫描法品种,品种数量 TLCS数量 占总数%534（药材） 20 3.74458（成药） 32 6.99978（总数） 52 10.73,1.选择测定条件（1）薄层色谱条件 分离好 不拖尾（2）检测方法 吸收测定法 荧光测定法 反射法 透射法 外标法 内标法（3）扫描方式 单波长
8、双波长 线性扫描法 锯齿扫描法,（4）散射参数SX薄层板的散射使,Kubelka-Munk方程,2.注意事项（1）薄层板 均匀、平整（2）点样量 准确（3）斑点 应完全分离，不拖尾（4）显色剂 均匀、适当（5）保护斑点 用相同大小洁净玻璃盖住薄层板，并用透明胶纸封住边缘，以起固定和隔绝空气作用,外标法（两点校正法）,（四） HPLC法 外标法和内标法RP HPLC 色谱柱 ODS 流动相 甲醇 - 水PIC反离子 氢氧化四丁基铵RP - PIC 反离子 烷基磺酸盐 无机阴离子,离子对色谱法（PIC） 极性流动相中加入离子对试剂，与被分析离子生成中性离子对，从而增加在非极性固定相中的溶解度，使分
9、配系数增大,2000年版中国药典（2000年版）HPLC法品种,品种数量 HPLC数量 占总数%534（药材） 54 10.11458（成药） 48 10.48978（总数） 102 20.59,应用实例-小青龙合剂,处方 麻黄125g 桂枝125g 白芍125g 干姜125 五味子125g 细辛62g 甘草(蜜炙) 法半夏188g,生物碱,桂皮醛,芍药甙,挥发油,三萜皂甙,应用实例-小青龙合剂,制法 以上八味，细辛、桂枝提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与白芍、麻黄、五味子、甘草加水煎煮至味尽，合并煎液，滤过，滤液和蒸馏后的水溶液合并，浓缩至约1000ml。法半夏、甘姜照流浸膏剂项下渗
10、漉法，用70%乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，漉液浓缩，与上述药液合并，静置，滤过，滤液浓缩至1000ml，加入苯甲酸钠3g与细辛、桂枝挥发油，搅匀，即得。,性状 本品为棕黑色的液体；气微香，味甜、微辛。功能与主治 解表化饮，止咳平喘。用于风寒水饮，恶寒发热，无汗，喘咳痰稀。用法与用量 口服，一次10-20ml，一日3次，用时摇匀。,方药分析：君 麻黄发汗为君臣 桂枝解表为臣佐 甘草恐发汗太过, 佐以甘草缓 之使 白芍、干姜、细辛、法半夏、五 味子几药合力共为使。可外发汗，内行水，散表里之邪。,汉代张仲景伤寒论小青龙汤 近代由重庆桐君阁中药厂该汤剂为合剂 本方治疗伤寒表不解，心下有水气，干
11、呕，发热而咳。近代也用于慢性支气管炎，支气管哮喘、肺气肿，均见咳、喘、痰白清稀者。,供试品溶液与阴性对照液的制备： 取合剂10 ml，石油醚分3次萃取，合并石油醚萃取液油层，浓缩至1ml，为供试品溶液A； 水层用Na2CO3调PH11-12，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，残渣用1ml甲醇溶解，为供试品溶液B； 阴性对照液如上法同步进行。,1. 桂皮醛的鉴别 取供试品液A、阴性对照液、桂皮醛对照液（1ug/ml）15ul，点于同一硅胶G板上，环己烷-乙酸乙酯（17：3）展开，晾干，喷2，4二硝基苯肼乙醇T.S，供试品A与对照品在相应位置上显相同的橙色斑点，而阴性对照液无此斑点。,2.
12、 细辛挥发油的鉴别 取供试品液A、阴性对照液、细辛挥发油对照液（1：10乙醚液）5ul，点于同一硅胶G板上，环己烷展开，晾干，喷10%香草醛浓硫酸T.S，加热至显色，供试品A与对照品在相应位置上显相同的粉红色斑点，而阴性对照液无此斑点。,3. 麻黄碱的鉴别 取供试品液B，阴性对照液，麻黄碱对照品液（1mg/ml）各5ul，点于同一硅胶G，氯仿-甲醇-浓氨水（20：5：0.5）展开，晾干，喷茚三酮T.S，加热至斑点显色，供试品B与对照品在相应位置上显相同的蓝紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。,取合剂5ml，上聚酰胺柱，DW洗脱，洗脱液水浴浓缩至干，用1ml甲醇溶解，为供试品溶液C； 聚酰胺柱再用9
13、5%乙醇洗脱，弃取洗脱液，用3M氨乙醇液洗脱，收集洗脱液水浴蒸干， 1ml甲醇溶解，为供试品溶液D。,4. 芍药甙的鉴别 取供试品液C、阴性对照液、芍药甙对照液（1mg/ml）10ul，点于同一硅胶G板上，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-甲酸（8：1：2：0.04）展开，晾干，喷10%硫酸乙醇液，加热至显色，供试品C与对照品在相应位置上显相同的紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。,5. 甘草酸的鉴别 取供试品液D、阴性对照液、甘草酸铵对照液（2mg/ml）2ul，点于同一硅胶G板上，乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-蒸馏水（30：2：2：4）展开，晾干，喷10%硫酸乙醇液，加热至显色，UV灯365nm观察，供
14、试品D与对照品在相应位置上显相同的紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。,含量测定,HPLC法测定芍药甙的含量仪器与色谱条件 BECKMAN 332型高效液相色谱仪163型可变波长紫外检测仪，220nm427型记录及数据处理仪色谱柱为YWGC18流动相乙腈-水（15：85）,标准曲线制备 精密称取芍药甙5.08mg，溶于水至50ml量瓶中，定容，分别吸取0.50、1.00、1.50、2.00ml于10ml量瓶中定容。回收率测定 精密吸取除去白芍制成的合剂（即阴性对照液）0.3ml与适量芍药甙对照品液，通过0.5g聚酰胺柱，用水洗脱至50ml量瓶中至刻度，依前述条件测定，平均回收率为99.42%，RS
15、D为0.23%（n=3）。,样品测定 取自制小青龙合剂摇匀，用滤纸过滤，精密吸取0.3ml滤液通过聚酰胺柱，以不同回收率测定条件进行测定。,分析实例万氏牛黄清心丸,处方 牛黄10g 朱砂60g 黄连200g 黄芩120g 栀子120g 郁金80g,分析实例万氏牛黄清心丸,制法以上六味，除牛黄外，朱砂水飞或粉碎成极细粉；其余黄连等四味粉碎成细粉；将牛黄研细，与上述粉末配研，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜100-200g制成大蜜丸，即得。,古方为糊丸，亦有水丸,性状本品为红棕色至棕褐色的大蜜丸；气特异，味甜、微涩、苦。功能主治清热解毒，镇惊安神。用于热邪内闭，烦躁不安，神昏谵语，小儿高热惊厥。,
16、方药分析 本方来源于明.痘疹世医心法 ，本方为清心开窍剂，主治热邪内陷心包所致窍闭神昏症。 方中牛黄，清心解毒，豁痰开窍为君药；黄连、黄芩、栀子清热泻火，为臣药；朱砂清心，重镇安神，郁金行气开窍共为佐使药，合用以奏透邪泻热，开窍安神之效。,方药分析牛黄清热解毒药，主含胆酸类成分。黄连清热燥湿药，主要为小檗碱。黄芩清热燥湿药，主要为黄酮类。栀子清热泻火药，主含栀子甙。朱砂安神药，主含硫化汞（HgS）。郁金活血去瘀药，主含挥发油。,鉴别,显微鉴别郁金糊化淀粉团块几乎无色。栀子种皮石细胞。黄芩纤维淡黄色，梭形，厚壁，孔沟细。黄连纤维鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显。朱砂不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红
17、色或棕黄色。,郁金糊化淀粉团块栀子种皮石细胞黄芩纤维黄连纤维朱砂不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色,化学鉴别1. 朱砂的鉴别 取本品3g，加水适量，研匀，反复洗去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取出，加入盐酸1ml及铜片少量，加热煮沸，铜片由黄色变为银白色。 HgS+2HCl+CuCuCl2+Hg+H2S 在酸性条件下，朱砂与铜片发生置换反应析出金属汞，在铜片表面形成银白色汞齐。,2. 人工牛黄的鉴别 取本品，剪碎，加硅藻土0.6g，研匀，加氯仿10ml、冰醋酸0.5ml，加热回流30min,放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。 胆酸和猪去氧胆酸加
18、乙醇制成1ml含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。,TLC法 CMC-Na，硅胶G展开剂 醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇 （32:6:1:1）显色剂 10%磷钼酸乙醇液， 1100C,10min,人工牛黄,供试品,牛黄空白,猪去氧胆酸,胆酸,3. 黄芩的鉴别 供试品溶液的制备：取本品3g，剪碎，加硅藻土0.5g，研匀，加甲醇20ml，加热回流1hr,放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。 对照品溶液的制备：黄芩甙对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。,TLC法 CMC-Na，硅胶G （4%醋酸钠）展开剂 醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水 （5:3:1:1）显色剂 2%三氯化铁乙醇液,使斑点更
19、为集中,-OH与Fe+3络合,黄芩甙,供试品,黄芩空白,4. 栀子的鉴别 供试品溶液的制备：取本品3g，加乙醚15ml，研磨，弃去乙醚。残渣挥干乙醚，加醋酸乙酯30ml，加热回流1hr,放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。 对照品溶液的制备：栀子甙对照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。,TLC法 CMC-Na，硅胶G展开剂 醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水 （10 : 7 : 2 : 0.5）显色剂 10%硫酸乙醇 1050C, 10min,栀子甙,供试品,栀子空白,5. 黄连的鉴别 供试品溶液的制备：取含量测定项下剩余的盐酸-甲醇提取液4ml，水浴
20、蒸干，残渣加甲醇溶解，使成1ml作为供试品溶液。,对照药材溶液的制备：黄连对照药材50mg，加甲醇10ml，回流加热15min ,滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。 对照品溶液的制备：再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含 0.5mg的溶液，作为对照品溶液。,TLC法 硅胶G CMC-Na展开剂 苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（12:6:3:3:1）显色剂 UV（365nm）,公式品,含量测定 1. 朱砂 取本品约5g，剪碎，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸30ml与硝酸钾8g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶
21、，洗液并人溶液中，滴加1%高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴加2%硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液滴定，即得。每1ml的硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞。,硫酸与硝酸钾分解试样及有机破坏高锰酸钾溶液除去试样分解时产生的亚硫酸粉红色两分钟内不消失亚硫酸可将Hg2+ 还原Hg+使含量变低，观察两分钟完全除去亚硫酸硫酸亚铁溶液除去过量的高锰酸钾滴定反应 Hg2+ +2CNS- Hg(CNS)2显色反应 CNS-(过量)+Fe3+ Fe(CNS)2+(红色),2.黄连 取本品约4g，剪碎，精密称定，置索氏提取器，盐酸-甲醇（1:100）适量，加热回
22、流提取至提取液无色，提取液移至50ml量瓶中，用盐酸-甲醇适量稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法，精密量取5ml，上AL2O3柱,25ml洗脱，收集洗液置50ml量瓶中，乙醇稀释至刻度，精密吸取2ml置50ml量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。UV345nm测定A。 为728,本品含总生物碱按盐酸小檗碱计不得少于1.7%。,黄连 方中臣药之首 用量最大有效成分清楚 黄连有效成分为小檗碱，尚含其它少量生物碱，如黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、巴马亭等，均为原小檗碱型生物碱。,硫酸溶液 在酸性条件下，N原子呈共轭体系的季铵状态，在345nm处有最大吸收。其它五味药的空白提取液在该波长处略有吸收，约相当于0.3%小檗碱，因此测定结果偏高。 本品为蜜丸制剂，其黄连生物碱溶出速率较药材相对缓慢，回流至提取液无色后应放置一段时间。,
