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1、实验17 微生物细胞数量的镜检计数法,一、实验目的掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。,二、实验原理,利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。,血球计数板的结构它是特制的厚载玻片，中央区域有四条凹槽而形成三个平台，中间平台较宽，它又被一短横槽分隔为两部分，每一部分均有一个方格网，每一方格网可分为九个大方格，中央大方格就是计数室。大方格分为16个中方格，每个中方格又可分为25个小方格。每个大方格共含有400个小方格
2、。计数室大方格边长为1mm，底面积为1mm2，高0.1mm,所以每个计数室固定容积为0.1mm3。,计数方法,在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位计数左上、左下、右上、右下等四个中方格（100个小方格）所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数的平均值，计数室每个小方格容积为：0.110-340014106(ml)计算公式：每ml菌液含菌数= N K d(N：每个小方格含菌数平均值；d：菌液稀释倍数；K=4106),三、实验材料,酵母菌菌悬液,四、实验方法步骤,1 镜检计数室：对计数室进行镜检，若内有污物，清洗后才能计数。2 加样液：先在血球计数板两个计数室部位加盖玻片，
3、再用无菌玻棒或滴管沾取待测菌悬液稀释液（已摇匀），从盖玻片边缘滴加，使菌液沿缝隙靠毛细作用自行进入计数室内。静置5min。,3 显微镜计数：将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜观察，后换高倍镜观察计数。位于格线上菌体只计上边线和左边线上的，如果出芽酵母芽体大小达到母细胞一半时，可计作两个菌体。选择五个视野，在每个视野内任意选择五个小方格计数，求出每个小方格菌体数量平均值。4 根据公式计算每ml菌液含菌数。5测量完毕后，取下盖玻片用水冲洗血球计数板（严禁用硬物刷洗），晾干，放入盒内保存。,注意事项,（1）取待测稀释菌悬液向血球计数板加样前，须将菌悬液充分摇匀。（2）加样过程中，应避免将菌液滴在盖玻片（3）由于菌体在计数室中处于不同空间位置，须在不同焦距下才能观察到，故观察时须不断调节微调，计数菌液中全部菌体，尽量避免遗漏。,作业：P 16,
