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1、培养基制备与消毒灭菌,培养基制备与消毒灭菌,实验目的及要求,了解培养基配制原理，学习并掌握培养基制备方法。了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌方法。学习一些微生物的实验准备工作。,实验目的及要求了解培养基配制原理，学习并掌握培养基制备方法。,实验原理,培养基的制备培养基：满足微生物生长的营养需要，人工配制的混合营养基质。用途：用于微生物的分离、培养、增殖、保藏及鉴定。牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养）马铃薯糖培养基（常用于培养真菌）高氏一号培养基（用于培养放线菌）,实验原理培养基的制备,配制原则,根据营养不同配制不同培养基 注意各种营养物质的浓度及配比 调节适
2、宜的pH值 考虑加生长因子 培养基应物美价廉 灭菌处理,培养基,配制原则 根据营养不同配制不同培养基培养基,1 根据化学组成分类,完全用天然物质或其浸出汁配制。成分不确定。如肉汁、豆芽汁、牛乳、土豆汁是天然营养原料。,酸奶、饮料酒、腐乳、酱类的发酵生产。,优点：配制方便，成本较低，营养丰富。生产上用,缺点：成分不确定。,（1）天然培养基：,培养基,培养基分类：,1 根据化学组成分类完全用天然物质或其浸出汁配制。成分不确定,（2）合成培养基,全由化学成分已知的物质配制的培养基。成分确定。,如：高氏培养基、察氏培养基。,优点：成分确定，重复性强，宜于科学研究 如菌种选育，遗传分析。实验室用。,缺点
3、：费用较高。,培养基,（2）合成培养基全由化学成分已知的物质配制的培养基。成分确定,（3）半合成培养基,由部分天然物质和一些成份已知的化学药品配制而成。,如：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。,优点：营养成分更全面、均衡。,实验室、发酵业用得最多。,培养基,（3）半合成培养基由部分天然物质和一些成份已知的化学药品如：,2 根据物理状态分类,（1） 固体培养基,概念：在液体培养基中加入凝固剂琼脂、明 胶、硅胶等。常用的是琼脂（洋菜）。琼 脂加入量1.52.0。,成分为多缩半乳糖绝大多数微生物不能利用融化温度96 ，凝固温度45对微生物无毒性,固体培养基作用,培养菌落进行分离、鉴定、计数、保藏,琼脂的特性：
4、,培养基,2 根据物理状态分类（1） 固体培养基概念：在液体培养基中加,（2）半固体培养基,（3）液体培养基,加入凝固剂。琼脂加入量0.20.5%,作用：观察细菌的运动状况。,不加凝固剂,用于发酵业。液体培养。,培养基,（2）半固体培养基（3）液体培养基加入凝固剂。琼脂加入量0.,（1）基础培养基,概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。 用于普通微生物培养。,细菌通用培养基牛肉膏蛋白胨培养基。,真菌通用培养基马铃薯蔗糖培养基。,培养基,3 按用途差异分类,（1）基础培养基概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。,（2）加富培养基,在普通培养基中加入某些特殊物质或某些生长素，只适于一种
5、或一类微生物的生长。,（3）选择培养基,根据培养微生物的生理特性配制。可促进某种微生物生长，抑制某类微生物生长。,如：加青霉素的培养基，分离霉菌和酵母菌。 加1%酚分离放线菌,特点：某种微生物富集逐渐淘汰其它各种微生物。,培养基,（2）加富培养基在普通培养基中加入某些特殊物质或某些生长素，,（4）鉴别培养基,特点：确保所培养的微生物有丰富的营养条件。 显示微生物的某些形态构造或生理代谢上 的特点。,如：伊红美兰培养基区分大肠杆菌和产气肠杆菌。,（5）活体培养基,用某些活的动植物体或离体的生活组织细胞作培养基。,病毒培养。,概念：用以区别不同微生物种类的培养基。,培养基,（4）鉴别培养基特点：确
6、保所培养的微生物有丰富的营养条件。,消毒与灭菌,消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病 原微生物）。灭菌：应用理化方法杀灭物体上所有微生物。,消毒与灭菌消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病,类型,一、加热高温灭菌 1.干热灭菌 火焰烧灼灭菌 热空气灭菌 2.湿热灭菌 常压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌 煮沸法灭菌 超高温灭菌二、紫外线灭菌三、过滤灭菌四、化学药剂的消毒与灭菌,消毒与灭菌,类型一、加热高温灭菌消毒与灭菌,一.高温灭菌：利用高温使菌体蛋白和核酸变性而失去活力以达到杀菌的目的。二.紫外线灭菌：诱发菌体核酸结构变异，及使空气中氧电离、水氧化而产生杀菌化学物质以杀灭杂菌。三.过滤除菌：
7、将处理的含菌液体或气体通过细菌过滤器，使杂菌被机械截留从而达到除菌。四.化学药剂的消毒和灭菌：杀菌剂（破坏微生物的代谢机能并有致死作用）；消毒剂；防腐剂（抑制微生物的生长繁殖）。,消毒与灭菌,一.高温灭菌：利用高温使菌体蛋白和核酸变性而失去活力以达到杀,利用温度的灭菌方法,高温灭菌：蛋白质凝固变性，酶失活。,高温灭菌,消毒与灭菌,利用温度的灭菌方法 高温灭菌：蛋白质凝固变性，酶失活。高温灭,1 干热灭菌(dry heat sterilization),1）火焰灭菌：接种时的用具如接种环等无经济价值的物体。 特点：彻底、迅速。,2）干燥热空气箱灭菌 用法：160-170,2小时（利用热空气灭菌
8、) 特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态 下不易杀死。所以温度高、时间长。,消毒与灭菌,1 干热灭菌(dry heat sterilization),2 湿热灭菌 (利用饱和热蒸汽灭菌),1）巴斯德消毒法 (pasteurization) a 方法：6366 -30min 或71-15min 或135 or 150 -2sec b 特点：不破坏营养物质，并杀死病原菌。 c 适用：牛奶、饮料等食品生产。,消毒与灭菌,2 湿热灭菌 (利用饱和热蒸汽灭菌) 1）巴斯德消毒法 (p,2）间歇灭菌法 a 方法： 283724h培养 37 24h培养100/1530min 100/1530min 1
9、00/1530min 用水蒸汽把培养基加热到100，分几次蒸煮以 达到彻底灭菌又保护营养成分的目的。 b 适用：营养含量高、不适于用高压蒸汽灭菌的特殊培养基、 药品的灭菌。此法麻烦、周期长。,消毒与灭菌,2 湿热灭菌 (利用饱和热蒸汽灭菌),2）间歇灭菌法消毒与灭菌2 湿热灭菌 (利用饱和热蒸汽灭菌),3）高压蒸汽灭菌法:利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，提高温度以达到高温灭菌目的方法。 a 方法： 一般121（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20min-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项： 灭菌开始排净冷空气； 灭菌终了，缓慢降压； 灭菌结束，趁
10、热取出物品。,消毒与灭菌,2 湿热灭菌 (利用饱和热蒸汽灭菌),3）高压蒸汽灭菌法:利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升，提,干热灭菌的操作,包扎。装箱（物品不可与灭菌箱内壁接触，且不可摆放过挤）灭菌（启动开关，并打开排气孔，待温度升至80-100关闭排气孔，继续升温至160-170 计时，恒温2小时）降温，取物（关闭电源，自然降温到60度开箱取物）,消毒与灭菌,干热灭菌的操作包扎。消毒与灭菌,消毒与灭菌,消毒与灭菌,高压蒸汽灭菌的操作,灭菌前准备（在锅内加适量水）。装放物品（不要过挤，且容器口端不要与物品接触）加热放气（打开放气阀，待有大量水汽排出，维持35分钟，锅内空气排尽，关上放气阀）升
11、温保压（温度，压力升至灭菌所需时计时，压力1.05Kg/cm2,121.3 ，2030分钟）出锅（关闭电源，待指针回零，打开放气阀，稍等一些时间，再取物）,消毒与灭菌,高压蒸汽灭菌的操作灭菌前准备（在锅内加适量水）。消毒与灭菌,消毒与灭菌,消毒与灭菌,培养基制备与消毒灭菌, 湿热灭菌较干热灭菌效果好,1) 特点：温度低、时间短、灭菌效果好。2) 灭菌效果好的原因： 菌体内含水量越高凝固温度越低。 蒸汽冷凝会放出潜热。 饱和水蒸汽穿透力强。,消毒与灭菌, 湿热灭菌较干热灭菌效果好1) 特点：温度低、时间短、灭菌,实验内容,分组操作：分8组，78人1组。每组需要做的工作。（1）1、2、3、4、5组
12、做牛肉膏蛋白胨培养基。每组做600ml。装试管10支，余下装三角瓶。（2）6、7、8组做马铃薯糖培养基。每组200ml。装试管10管，余下装三角瓶。（3）每组包 1 ml 吸管8-9支。（示范）（4）每组包10 ml吸管3支（5）每组装9 ml无菌水10管。 （示范）（6）每组包培养皿2包（每包6个）（示范）（7）装锅灭菌。,实验内容分组操作：分8组，78人1组。每组需要做的工作。,1牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养）,（1） 培养基组成： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 18-20g 水 1000ml PH 7.0-7.2,（2）配置方法,称量：溶化：电炉加热熔化调
13、节PH：分装：试管和三角瓶包扎：双层纸和绳子。灭菌：高压蒸汽灭菌。,实验内容,1牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养） （1） 培养,（2）配制方法： 称量：注意马铃薯去皮后切成丝称量。 溶化：将马铃薯丝放入水中置于电炉上加热并不断搅拌，煮沸510min，用多层纱布过滤得滤液，在滤液中加入其他药品，不断搅拌直至完全溶解。 分装： 包扎： 灭菌：,2马铃薯糖培养基（通常用于培养真菌）,（1） 培养基组成： 马铃薯 200 g 葡萄糖或蔗糖 20 g 琼脂 18-20 g 水 1000ml PH 自然,实验内容,（2）配制方法：2马铃薯糖培养基（通常用于培养真菌）（,3、高压蒸汽灭菌（1）灭菌前
14、的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内 加入适量的水，将内桶放入。（2）装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。（3）加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，维持3-5min，锅内空气排尽，关上排气阀。（4）升温保压： 压力为1.05kg/cm2（121.3）,20-30min（5） 出锅：隔断热源，自然降温，待压力表指针回到零，打开排气阀，稍等一些时间，再开盖取物。,实验内容,3、高压蒸汽灭菌实验内容,实验报告 （1） 培养微生物的培养基应具备哪些条件？ （2） 为什么培养基配制好后必须立即灭菌？ （3） 在培养基中，
15、琼脂有何作用？它有哪些特性？ （4） 使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时应注意哪些事项？ （5） 比较干热灭菌与高压蒸汽灭菌的异同。,实验报告,自主设计性实验（学生综合实验技能训练）,自主设计性实验,自 主 设 计 性 实 验（每5个学生1组）,结合已做过的实验，每组选择一个自己感兴趣的综合设计性实验选题，从实验的设计、准备、实验操作、实验结果的分析到最后实验报告的完成都由学生自己动手完成，教师对设计报告的科学性、可行性把关、指导，并指导学生实验。,自 主 设 计 性 实 验结合已做过的实验，每组,参考选题：1、嗜盐菌的分离及初步鉴定2、产淀粉酶菌株的分离及初步鉴定3、葡萄皮上菌种分离及葡萄酒发酵 4、常见水果滋生真菌分离及初步鉴定 5、常见蔬菜腐烂滋生细菌分离及初步鉴定6、实验室环境和人体表面微生物的检查7、米酒的酿造8、平菇子实体菌丝的分离纯化和菌丝生长检测9、香菇子实体菌丝的分离纯化和菌丝生长检测,培养基制备与消毒灭菌,
