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1、转基因产品正在渐渐走进我们的生活,转基因产品正在渐渐走进我们的生活,基因工程的基本操作程序-31张ppt,日照海边的夜色,日照海边的夜色,基因工程的基本操作程序-31张ppt,会自己发光的转基因树,会自己发光的转基因树,第二节 基因工程的基本操作程序,第二节 基因工程的基本操作程序,一、获取目的基因,发光基因,一、获取目的基因发光基因,大肠杆菌,基因组文库,部分基因文库,基因文库,大肠杆菌基因组文库部分基因文库基因文库,一、获取目的基因,方法一：从基因文库中获取,方法二：利用PCR技术扩增,发光基因,一、获取目的基因方法一：从基因文库中获取方法二：利用PCR技,利用PCR技术扩增目的基因,DN
2、A双链复制,模板、 原料、 酶、 能量,引物,原理：,条件：,Taq酶,利用PCR技术扩增目的基因DNA双链复制模板、 原料、 酶、,一、获取目的基因,方法一：从基因文库中获取,方法二：利用PCR技术扩增获取,方法三：人工合成,发光基因,一、获取目的基因方法一：从基因文库中获取方法二：利用PCR技,1、利用PCR技术扩增的原理是什么？,2、实现PCR技术需要什么条件？,3、利用PCR技术扩增与体内DNA复制有何区别？（尝试从酶的角度进行分析）,利用PCR技术扩增目的基因,1、利用PCR技术扩增的原理是什么？2、实现PCR技术需要什,1、利用PCR技术扩增的原理是什么？,2、实现PCR技术需要什
3、么条件？,3、利用PCR技术扩增与体内DNA复制有何区别？（尝试从酶的角度进行分析）,DNA双链复制,模板、 原料、 酶、 能量,（1）在利用PCR技术扩增过程中是高温解旋不需要DNA解旋酶。（2）在复制过程中需要的是耐高温的热稳定性聚合酶（Taq酶）,【思考】,1、利用PCR技术扩增的原理是什么？2、实现PCR技术需要什,二、构建基因表达载体,【思考】（限时2分钟） 1、为什么要构建基因表达载体？ 2、构建好的基因表达载体包括哪些结构？ 3、启动子有什么作用？ 4、标记基因有什么作用？,（核心）,二、构建基因表达载体【思考】（限时2分钟）（核心）,质粒,目的基因,限制酶,二、基因表达载体的构
4、建,【基本过程】,质粒目的基因限制酶DNA连接酶二、基因表达载体的构建【基本过,利用所给的质粒和含发光基因的片段，构建发光基因表达载体,【合作探究】,（限时5分钟）,1、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只用一种酶切割会出现什么弊端？2、能不能用两种不同的酶切割？3、请讨论并制定一个最佳构建方案,利用所给的质粒和含发光基因的片段，构建发光基因表达载,【展示分享】,1、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？只用一种酶切割会出现什么弊端？2、能不能用两种不同的酶切割？3、请讨论并制定一个最佳构建方案,各共同体成员要积极参与、协同合作。要确定好展示者，展示者声音要洪亮，语言表达要简洁
5、、清晰。,【展示分享】1、如果用一种酶切割，应该选哪种限制酶？为什么？,双酶切的优点：,1.防止目的基因与运载体反向连接2.防止运载体和目的基因的自身环化,双酶切的优点：1.防止目的基因与运载体反向连接,【小结】,构建基因表达载体的注意事项：,1、要使用同种限制酶切割，使质粒和载体形成相同的粘性末端。,3、防止质粒和载体反向连接,2、目的基因应插在启动子和终止子之间,【小结】构建基因表达载体的注意事项：1、要使用同种限制酶切割,三、导入受体细胞,【课前预习成果展示】,三、导入受体细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法受,三、导入受体细胞,三、导入受体细胞生物种类植物细胞动物细胞微生物细
6、胞常用方法农,发光基因,三、目的基因导入受体细胞,农杆菌转化法：,构建基因表达载体,导入植物细胞,原理：1、农杆菌对植物具有感染能力。2、T-DNA易整合到受体细胞的染色体DNA上。,发光基因三、目的基因导入受体细胞农杆菌转化法：构建基因表达载,四、目的基因检测与鉴定,导入检测,转录检测,翻译检测,个体水平检测,分子水平检测,功能性检测,四、目的基因检测与鉴定翻译转录RNA蛋白质DNA导入检测转录,四、目的基因检测与鉴定,导入检测,DNA分子杂交技术,原理：碱基互补配对原则,四、目的基因检测与鉴定翻译转录RNA蛋白质DNA导入检测DN,DNA分子杂交技术,形成杂交带,放射性元素标记,DNA分子
7、杂交技术形成杂交带放射性元素标记,基因探针,非目的基因,基因探针非目的基因,四、目的基因检测与鉴定,导入检测,转录检测,翻译检测,DNA分子杂交技术,分子杂交技术,抗体-抗原检测,抗性检测、功能活性比较等,四、目的基因检测与鉴定翻译转录RNA蛋白质DNA导入检测转录,获取目的基因,构建表达载体,导入受体细胞,目的基因检测与鉴定,基因工程的基本操作程序,发光基因,含发光基因的重组质粒,获取目的基因构建表达载体导入受体细胞目的基因检测与鉴定基因工,课堂评价当堂巩固知识运用举一反三,课堂评价,1、据图回答：(1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。(2)能使人乳铁
8、蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_(填字母代号)。A启动子 BtetR C复制原点 DampR(3)过程可采用的操作方法是_(4)该过程成功的标志是_。,Hind和BamH,A,显微注射,牛乳汁中含有人乳铁蛋白,1、据图回答：Hind和BamH A 显微注射 牛乳汁中,2.（山东理综）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_作探针进行分子杂交检测又要用_方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。,耐盐基因（目的基因）,3.（山东理综）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器，需将目的的基因导入牛受精卵，最常用的导入方法是_；获得转基因母牛后，如果_即说明目的基因已经表达。,显微注射法,牛奶中含有人类白细胞介素（或牛乳腺细胞已合成人类白细胞介素）,2.（山东理综）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放,
