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1、大豆抗原蛋白与仔猪过敏性腹泻,1,.,大豆抗原蛋白与仔猪过敏性腹泻1.,内容提要,2,.,内容提要 仔猪腹泻与产生原因1. 日粮致敏性腹泻与大豆,仔猪腹泻发生的原因,传染性病因 1.1 病毒性腹泻传染性胃肠炎、轮状病毒感染1.2 细菌性腹泻仔猪黄痢、仔猪白痢、仔猪副伤寒、仔猪红痢,3,.,仔猪腹泻发生的原因传染性病因 3.,2. 免疫系统因素,1,2,3,4,周龄,6,7,5,6,8,4,2,免疫力,主动免疫,被动免疫（母乳）,4,.,2. 免疫系统因素 1234周龄6756842免疫力主动免疫,3. 应激因素3.1 温度骤变 皮下脂肪薄，被毛稀少：保温能力差；糖原水平低，产热能力不足，因此仔
2、猪对冷相当敏感,5,.,3. 应激因素5.,1,2,3,4,周龄,6,7,5,6,8,4,2,免疫力,主动免疫,被动免疫（母乳）,断奶,3.2 断奶应激,6,.,1234周龄6756842免疫力主动免疫被动免疫（母乳）断奶,胃酸分泌不足，消化酶活性不高 母乳 饲料,饲料（营养）因素4.1 营养消化不良,7,.,胃酸分泌不足，消化酶活性不高 母乳 饲料饲料（营养,日粮抗原蛋白过敏导致仔猪腹泻的一个重要因素,饲料（营养）因素4.2 日粮抗原过敏,8,.,日粮抗原蛋白过敏饲料（营养）因素8.,仔猪日粮抗原蛋白的来源,植物性饲料,大 豆大豆制品,9,.,仔猪日粮抗原蛋白的来源植物性饲料大 豆9.,大豆
3、中含多种抗营养因子,10,.,大豆中含多种抗营养因子 蛋白酶抑制因子脲酶, 大豆抗原蛋白是由 Duke等（1934）首次发现 婴儿过敏 Castimapoolas和Ekenstam（1969）从大豆中分离出4种抗原 蛋白:,大豆球蛋白（glycinin）,-伴大豆球蛋白（-conglycinin）,-伴大豆球蛋白（-conglycinin）,-伴大豆球蛋白（ -conglycinin）,大豆抗原蛋白,11,., 大豆抗原蛋白是由 Duke等（1934）首次发现 , Glycinin 由6个酸性多肽和6个碱性多肽组成的 大分子蛋白（360 kDa）,Glycinin晶体结构,占大豆总球蛋白的40
4、%（李德发，2003）,12,., Glycinin 由6个酸性多肽和6个碱性多肽组成的,-Conglycinin是大豆中的一种主要贮藏蛋白,13,.,-Conglycinin是大豆中的一种主要贮藏蛋白13.,孙鹏等，2008,仔猪对glycinin的过敏反应,14,.,孙鹏等，2008仔猪对glycinin的过敏反应14.,Glycinin对仔猪小肠内肥大细胞数量及组胺含量的影响, 日粮中添加 2%或 4% 的glycinin可显著增加仔猪空肠、回肠内组胺的释放量。,孙鹏等，2008,15,.,Glycinin对仔猪小肠内肥大细胞数量及组胺含量的影响Gl,大豆抗原蛋白与仔猪断奶腹泻,饲喂含与
5、不含大豆抗原蛋白的仔猪腹泻情况（Miller，1994）,16,.,大豆抗原蛋白与仔猪断奶腹泻饲喂含与不含大豆抗原蛋白的仔猪腹泻,大豆抗原蛋白与仔猪生长性能,大豆抗原蛋白使仔猪在断奶后第一周生长速度明显下降(P0.05),Li等（1990，1991）,17,.,大豆抗原蛋白与仔猪生长性能 大豆抗原蛋白使仔猪在断奶后第一,Glycinin对仔猪（24-28日龄）生长性能影响,孙鹏等（2008）,纯样品,18,.,Glycinin对仔猪（24-28日龄）生长性能影响孙鹏等（,-conglycinin对断奶仔猪（38日龄）生长性能的影响,pigs,19,.,-conglycinin对断奶仔猪（38日
6、龄）生长性能的影,大豆抗原蛋白通过诱发幼龄动物的过敏反应，影响机体消化系统和免疫功能，导致腹泻，最后抑制动物生长减少豆粕用量是减轻断奶仔猪过敏反应的有效措施正确的饲喂制度 免疫耐受的产生需要一定时间（断奶后7-10d） 教槽料应持续用到断奶后10天,20,.,大豆抗原蛋白通过诱发幼龄动物的过敏反应，影响机体消化系统和免,在使用前，对大豆抗原蛋白进行消除是提升大豆及其制品质量，避免仔猪腹泻的关键。,21,.,在使用前，对大豆抗原蛋白进行消除是提升大豆及,大豆抗原蛋白的消除,微生物发酵,外源酶水解,基因工程技术,有机溶剂萃取,多种措施结合,22,.,大豆抗原蛋白的消除微生物发酵外源酶水解基因工程技
7、术有机溶剂萃,微生物发酵,23,.,微生物发酵23.,大豆抗原蛋白,寡 肽生物活性肽,抗原活性降低,微生物发酵,24,.,大豆抗原蛋白寡 肽抗原活性降低微生物发酵24.,微生物发酵工艺：,生产工艺：,稳定的好，才是真正的好！,25,.,微生物发酵工艺：生产工艺： 稳定的好，才是真正的好！25.,发酵过程控制,PH值,温度,水分,酸性蛋白酶,-半乳糖苷酶,大豆抗原,不良寡糖,降解,降解,枯草芽孢,酵母菌,乳酸菌,26,发酵过程控制PH值温度水分酸性蛋白酶-半乳糖苷酶大豆抗原不,大豆蛋白在进入动物体内之前降解为小分子蛋白，提高蛋白质的利用率；降低大豆抗原蛋白的抗原活性；降解不良寡糖（棉籽糖、水苏糖
8、）；产生有益代谢产物（乳酸3%）；具有发酵香味，提高适口性和采食量；,豆粕生物发酵的优势,27,.,大豆蛋白在进入动物体内之前降解为小分子蛋白，提高蛋白质的利,大豆基因工程改良,28,.,大豆基因工程改良28.,据报道，三亚基的抗原活性： ,29,.,据报道，三亚基的抗原活性： 29.,-conglycinin-亚基对大鼠肠道超微结构的影响,正常组：上皮细胞微绒毛结构清晰,试验组：上皮细胞微绒毛结构模糊,郭鹏飞（2007）,30,.,-conglycinin-亚基对大鼠肠道超微结构的影,结果表明，-conglycinin的-亚基同样有较强的致过敏活性。,31,.,结果表明，-conglycin
9、in的-亚基同样有较强的,RNA Gel Blot Shows Conglycinin Cosuppression,Transgenic Soybean Seeds, ,Kinney等，2001,基因敲除（沉默）,32,.,RNA Gel Blot Shows Conglycinin,但研究表明，大豆-conglycinin含量的减少，将伴随着glycinin含量的增加。而glycinin同样是一种抗原蛋白,33,.,但研究表明，大豆-conglycinin含量的减少，将伴随,不同加工工艺大豆蛋白比较,34,.,不同加工工艺大豆蛋白比较34.,因 此生物发酵技术是目前降低大豆抗原蛋白的最佳方法
10、,35,.,因 此35.,发酵豆粕的质量差异及大豆抗原蛋白的含量检测,36,.,发酵豆粕的质量差异及36., SDS-PAGE （定性） 抗血清测定（特异性问题） 高效液相色谱分析（设备、前处理问题） 以抗大豆-conglycinin单克隆抗体为介质的 免疫学检测方法,37,., SDS-PAGE （定性）37.,Marker,豆粕对照,发酵豆粕1,发酵豆粕2,发酵豆粕3,发酵豆粕4,发酵豆粕5,发酵豆粕6,电泳图谱,38,.,Marker豆粕对照发酵豆粕发酵豆粕发酵豆粕发酵豆粕发酵豆粕,以单抗为介质的ELISA（定量）,39,.,以单抗为介质的ELISA（定量）39.,热处理是应用较为广泛的日粮抗原消除方法，但对于热稳定性高，热加工不足以有效地灭活的抗营养因子，人们必须要不断地研究新的方法加以消除。 微生物发酵是目前改善大豆及其制品营养价值和饲喂价值，减少仔猪致敏性腹泻的有效途径！,结 语,40,.,热处理是应用较为广泛的日粮抗原消除方法，但对于热稳定,谢谢！,谯仕彦教授中国农业大学,41,.,谢谢！谯仕彦教授41.,
