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1、第十三章 凝集反应,制作人：和燕,早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。-肥达试验 至1903年，Landsteiner在特异性血凝现象的基础上发现了人类ABO血型，并于1930年获得了诺贝尔医学奖。 -血型鉴定,凝集反应的发现,凝集反应的定义,凝集反应： 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体特异性结合，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒（红细胞、聚苯乙烯乳胶颗粒、炭粒）后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。,可见反应形成,阴性？,阳性？,凝集反应的分型,凝集反应,直接凝集
2、反应,间接凝集反应,抗球蛋白试验,第一节 直接凝集反应,直接凝集反应： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,凝集原(agglutinogen)：凝集反应中的抗原。,凝集素(agglutinin)：凝集参与反应的抗体,（一）玻片凝集试验,方法评价:定性试验简便和快速敏感度低,应用:菌种鉴定血清学分型血型鉴定,在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,（二）试管凝集试验,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,弃掉0.5,试管凝集试验原理,结果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,结果,+,很小的凝集颗粒,混浊,-,无凝集现象,与
3、对照相同,+,小、部分凝集块,中等混浊,+,大多凝集管底,轻度混浊,+,大的凝集块,清亮,凝集程度,沉淀,上清,管底沉淀,凝集程度,方法评价：半定量试验简便、快速敏感度低可有假阳性,临床应用：肥达试验外斐试验交叉配血试验,第二节 间接凝集反应,间接凝集反应: 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象.,载体,可溶性抗原,致敏,致敏颗粒,NS,凝集颗粒,间接凝集试验示意图,常用载体,红细胞-间接血凝试验,聚苯乙烯乳胶-胶乳凝集试验,1、正向间接凝集试验2、反向间接凝集试验3、间接凝集抑制试验 4、协同凝集试验,间接凝集反应的类型
4、,用抗原致敏载体-检测抗体,正向间接凝集试验,反向间接凝集试验,用抗体致敏载体-检测抗原,间接凝集抑制试验,用抗原致敏载体-检测抗原,间接凝集抑制试验,待测抗原,已知抗体,特异结合,抗原抗体复合物,NS,致敏颗粒,无凝集颗粒阳性,间接凝集抑制试验,待测抗原,已知抗体,无结合,抗原抗体分散,NS,致敏颗粒,有凝集颗粒阴性,SPA:SPA-IgG Fc;SPA抗体致敏-测抗原,协同凝集试验,原理图,IgG,SPA,SPA- IgG,待测抗原,SPA- IgG-待测抗原凝集颗粒,混合,加入,间接凝集反应的应用,抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗体
5、的检测检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。,抗球蛋白试验又称Coombs试验,第三节 抗球蛋白试验,（一）直接Coombs试验,不完全抗体,检测红细胞上抗体,（二）间接Coombs试验,检测血清中的抗红细胞抗体,临床应用：在输血上的应用血型抗原抗体的检查对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断对溶血性贫血的研究对细菌或立克次体的不完全抗体检查,冷凝集试验原理,抗原决定簇隐含，不能与抗体结合,混合,暴露的抗原决定簇与抗体结合,混合,37,4,37,胶乳凝集试验-类风湿因子检测,抗自身变性IgG抗体，属于IgM类，主要存在于血清中。约90%类风湿性关节炎（RA）患者的RF呈阳性。某些自身免疫病，如冷球
6、蛋白血症、进行性全身性硬化症、干燥综合征、SLE等患者都有较高的阳性率；一些其他疾病如血管炎、肝病、慢性感染也可出现RF。,类风湿因子RF,其病因及发病机制仍不完全明了, 机体出现免疫系统紊乱, 进而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏的自身免疫性疾病。,类风湿性关节炎RA,RF可与IgG的Fc段结合。将变性IgG包被于聚苯乙烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时，即可发生肉眼可见的凝集。,乳胶凝集试验,类风湿胶乳诊断试剂RF阴性对照RF阳性对照反应板搅拌棒,主要的试剂和器材,取阳性血清、阴性血清各1滴于反应板上，然后分别加类风湿胶乳诊断试剂1滴。用搅拌棒充分混匀后，轻轻摇动反应板
7、23min，观察结果。,步骤,在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒出现，且液体澄清者为RF阳性,结果观察和判断,1、凝集反应是指细菌和红细胞等_或载体表面包被_与相应抗体/抗原结合后，可出现肉眼可见的_现象2、凝集反应的分类？3、直接凝集反应包括哪两类？4、间接凝集反应的分类？原理？,复习题,小结,凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原/抗体的颗粒性载体与相应抗体/抗原结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。 可以分为直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白试验。直接凝集反应主要有玻片法和试管法。间接凝集反应主要有正向间接凝集试验、反向间接凝集试验、间接凝集抑制试验。 间接凝集反应应用不同的载体，其中医学检验最常用的为间接血凝试验、胶乳凝集试验。,1、凝集反应的概念2、凝集反应的技术类型3、各类间接凝集反应的原理,作业,
