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1、钙的测定,两种方法： 高锰酸钾滴定法 乙二胺四乙酸络合快速滴定法,高锰酸钾滴定法-测定钙的含量,一、实验目的 掌握高锰酸钾滴定法测定饲料中钙的含量。,二、基本原理 样本经灰化（550）后，用浓盐酸酸、浓硝酸消化样本中的粗灰分，样本中有机物质被破坏，溶液中含有各种盐类。其中也含有钙盐，钙盐与草酸铵作用，形成白色沉淀 化学反应如下： CaCl2 + (NH2)2C2O4 CaC2O4 + 2NH4Cl 钙盐 草酸铵 草酸钙,二、基本原理（续） 用硫酸溶解草酸钙再用标准高锰酸钾溶液滴定与钙结合的草酸量。根据高锰酸钾的用量，可计算出样本中钙的含量。化学反应式如下：CaC2O4+H2SO4CaSO4+H
2、2C2O4 2KMnO4+5H2C2O4+3H2SO410CO2+2MnSO4+8H2O+K2SO4 钙测定的基本过程： 钙的沉淀洗涤滴定,三、操作步骤试样分解： 为测定样本中矿物质，样品处理通常有两种方法： 1）干法（灰化法）（Ca含量低时） 2）湿法（消化法）（Ca含量高时，用于 无机物和液体饲料） 目前更多的是采用干法测定钙的含量，因此，我们仅介绍干法的测定方法：（可直接用测灰分的样品）,灰化法测定方法：1、灰化（550）及试验分解液制备1）称取2克样本放在坩埚中，然后在电炉上小心炭化。参照 样本灰化测定方法（或直接用已测定灰分的样本）。2）再灰化好的残灰中加10-20ML HCL(1+
3、3)，同时加数滴（7滴）浓硝酸（HNO3），放在电炉上小心煮沸冷却后将此溶液滤入250 ML容量瓶中，用热蒸馏水洗涤坩埚和漏斗中的滤纸8次，冲洗完毕冷却后稀释至容量瓶刻度，混合均匀作为试样分解液。3）同时进行试剂空白试验（不加样本）,2、试样分解液Ca的测定 草酸钙的沉淀洗涤滴定 1）草酸钙的沉淀： 用移液管准确移取试样分解液1020ML（根据 钙的含量而决定取量）放入250ML三角瓶中。 加入100ML蒸馏水和甲基红指示剂2滴，溶液即呈红色。 滴加（11）氢氧化铵使溶液由红变为桔红色。 再加入（13）数滴盐酸，使溶液由桔黄色变为红色。 注意：再重复一次 （调节PH为2.5-3.0）,1）草酸
4、钙的沉淀（续） 然后放在电炉上小心煮沸慢慢滴加热草酸铵（4.2%）溶液10ML（不断搅拌）使溶液变桔黄色再应补滴加盐酸（13）使溶液至红色为止。 将溶液煮沸34分钟，使溶液中的草酸钙沉淀颗粒增大，易于分出。然后放置过夜使草酸钙沉淀更完全。（如果不过夜可放在水浴锅上加热2小时，一般急需结果时采用。）,2）草酸钙沉淀的洗涤 次日用精密的定量滤纸过滤。 用（150）氢氧化铵溶液洗涤沉淀，冲洗三角瓶和滤纸上的草酸钙沉淀68次直到无草酸根离子为止。 测定无草酸根离子的方法： 用试管接取滤液2-3ML后加(13)的硫酸数滴，加热80度后，再加高锰酸钾溶液1滴，呈微红色，半分钟不退色）,3）滴定 用玻璃棒将
5、钙的沉淀和滤纸一起转入原三角瓶中，加入（13）的热硫酸10ML再加蒸馏水50ML将瓶内滤纸破碎后放在电炉上加热到7585然后用0.05mol高锰酸钾标准溶液滴定呈粉红色,半分钟不退色为终点。,四、注意,1、高锰酸钾溶液浓度不稳定，应至少每月标定一次。2、每种滤纸的空白值不同，消耗高锰酸钾溶液体积也不同，至少每盒滤纸应做一次空白试验。3、结果计算方法：（请看书）,五、试剂的配制,1、配制0.05N高锰酸钾标准溶液 称取1.6克固体高锰酸钾，溶于1000ml蒸馏水中，然后放电炉上煮沸10分钟冷却，放置过夜或放1-2天过滤后保存于干净的棕色瓶中。2、标定高锰酸钾溶液 （标定方法见书24-25页）,思
6、考题,试样溶液中为何需先加氢氧化铵，后又加盐酸？为什么需用氢氧化铵溶液冲洗草酸钙沉淀直至剩余的草酸钙洗净为止？,快速方法测定钙乙二胺四乙酸二钠（EDTA）滴定,一、基本原理,将试样中有机物破坏，使钙溶解制备成试样分解液(同高锰酸钾法)，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用EDTA标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。反应方程式简写如下：In2-+Ca2+=CaIn(红色不稳定)In为钙的指示剂Ca2+H2y2-=Cay(无色)+2H+H2y2-为EDTA液,二、测定步骤,试样制备与分解与高锰酸钾法相同测定钙的含量1）准确移取试样分解液5
7、-25ml；（含钙量而定）；2）加水50ml；3）分别加淀粉溶液10ml、三乙醇胺2ml、乙二胺1ml、1滴孔雀石绿；3）滴加氢氧化钾溶液至无色，过10分钟；4）加0.1g盐酸羟胺，加钙绿素少许摇匀；5）在黑色背景下用EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。,钙含量计算公式：,EDTA标定值EDTA滴定毫升数试样分解液总体积 Ca%= 100 试样重量分析试样毫升数,试剂配制（见书）,氢氧化钾溶液 200克/L淀粉溶液（现配现用）孔雀石绿水溶液 1克/L钙黄绿素甲基百里香酚蓝指示剂（0.1克钙黄绿素与0.13克甲基百里香酚蓝、5克氯化钾研细混合，贮存于磨口瓶中备用）钙标准溶液0
8、.001克/ML-称2.497克于105-110 烘干至恒重的基准碳酸钙，溶于40ml（1+3）盐酸中，加热赶除二氧化碳后，冷却，转移1000ml容量瓶中稀释至刻度。,试剂配制,EDTA标准滴定溶液配置：称取3.8克EDTA放入烧杯中，加200ml水，加热溶解冷却后转入1000ml容量瓶中，稀释至刻度。EDTA标准滴定溶液标定：准确移取钙标准溶液10ml，按试样测定法进行滴定；用EDTA标准滴定溶液对钙的滴定度按下列公式计算： 钙标准溶液浓度 所取钙标准溶液体积 T= EDTA溶液滴定用量,磷的测定钼黄比色法,一、目的：掌握应用钼黄显色光度法测定饲料中磷的含量,二、基本原理 首先将试样中有机物
9、破坏（相同于测钙时灰化法所做的分解液可用来同时测磷）使磷游离出来，样本中磷在酸性溶液中，与钒钼酸铵结合生成黄色沉淀（ NH4）3PO3NH4VO3 16MoO3成为磷-钒-钼酸复合体。 在波长420nm下进行比色测定，即可计算样本中磷的含量。 此方法测得结果为总磷含量，包括动物难以吸收的植物磷。,三、操作步骤,1、标准曲线的绘制：1）取8个50ML容量瓶，分别编上号码 0,1,2,38。在0号放入少量蒸馏水作空白，然后将1.8号各瓶内依次放入0.5，1.0，2.0，5.0，7.0，9.0，10Ml的标准磷酸溶液。2）在每个容量瓶内加入钒钼酸铵显色剂10毫升；3）各容量瓶内加蒸馏水稀释至刻度摇匀
10、常温下静置10分钟后,以0号溶液作空白（为参比）,用10mm比色池，在420nm波长下,用分光光度计测各溶液的吸光度。4）以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。,光密度,磷 含 量,磷的标准曲线,2、样品中磷的测定：1）用移液管准确吸取试样分解液1-10ML（根据磷的含量高低而定，一般在50500微克）放入50ML容量瓶中。2）分别加入钒钼酸铵显色剂10ML；3）分别加入蒸馏水稀释至50ML，摇匀、常温下静置10分钟。（目的是使已形成的“钼蓝”的溶液，通过静置状态，使钼蓝产生的更充分）4）另取50ML容量瓶做空白溶液，方法按2),3)操作。5）静置后以空白溶液作参比，用10mm比色池，
11、在420nm波长下,用分光光度计比色，测各试样分解液的吸光度，根据样本溶液所测出的吸光度，在标准曲线上查出样本溶液中磷的含量。,3、结果计算公式,样品中总磷含量按下列公式计算： 标准曲线查得试样分解液含量（微克）P%= 100 试样重量取试样分解液的体积（ml）分析结果相对允许偏差范围： 磷含量小于0.5%允许偏差10%； 磷含量大于等于0.5%允许偏差3%；,分光光度计,预热30分钟在进行比色,四、试剂配制,1、钒钼酸铵显色剂 1）移取偏钒酸铵1.25克，加硝酸250毫升； 2）另称取25克 钼酸铵，溶于400ml蒸馏水中； 3）上述溶液冷却后，将两种溶液混合在一起，用蒸馏水定容至1000毫升。避光保存（贮存于棕色试剂瓶中保存备用，如若生成沉淀，则不能继续使用）。,四、试剂配制（续）,2、标准磷酸溶液 将磷酸二氢钾在105度烘箱中干燥1小时，在干燥器中冷却后，准确称取0.2196克溶于蒸馏水，转入1000ml容量瓶中，加硝酸3毫升，用蒸馏水稀释至刻度，混匀备用； 此溶液即为50 g / ml的磷标准液；,思考题,1、叙述钙的基本原理、操作步骤。2、为什么需用氢氧化铵溶液冲洗草酸钙沉淀直至剩余的草酸铵洗净为止？如何检测草酸铵是否洗净？3、简述磷的测定原理。,
