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1、抗菌药物敏感性试验,Antimicrobial Sensitivity Test,1,药敏试验的概述,第 一 章,2,第一节 药敏试验的定义,药敏试验简称药物敏感试验（或耐药试验）。旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感（或耐受）程度，以指导临床合理选用抗生素药物的微生物学试验。一种抗生素如果以很小的剂量便可抑制、杀灭致病菌，则称该种致病菌对该抗生素“敏感”。反之，则称为“不敏感”或“耐药”。,定义,3,当前，“对症下药”已经变得难以奏效。首先，致病菌的种类发生了改变，一种疾病可以由多种病原菌所引起，包括致病菌和条件致病菌；其次，感染人群发生变化，从健康人群到老年人、长期使用激素、免疫抑制剂及放
2、疗、化疗的人群，临床症状常常不典型；最后，早期不规范使用抗生素，也会导致临床症状不典型。,对症下药,第二节 还能轻松对症下药吗？,与此同时，“对菌下药”又难以获得满意效果。耐药菌尤其是多重耐药菌的出现，使临床医师按照抗生素的作用机制选择12种抗菌药物不能覆盖常见的病原菌。因此，药敏试验成为临床工作的重要手段之一。,对菌下药,4,第三节 药敏试验的意义,B,D,A,C, 指导临床医生合理选择抗生素，AST的结果为“耐药”，则应更换药物。, 监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行。, 提供所选择药物的依据；, 可预测抗菌药物治疗的效果， “敏感”治疗可
3、能有效；“耐药” 可能失败；,5,药敏试验常用方法,第 二 章,6,第一节 药敏试验常用方法,01,Kirby-Bauer法（K-B纸片琼脂扩散法）和 直接纸片药敏法,纸片扩散法,02,琼脂稀释法和肉汤稀释法。,稀释法,03,抗生素浓度梯度法-E 试 验（E-test）,抗生素浓度梯度法,7,为了解致病菌对哪种抗菌素敏感，以合理用药，减少盲目性，往往应进行药物敏感试验。其大致方法是：从病人的感染部位采取含致病菌的标本，接种在适当的培养基上，于一定条件下培养；同时将分别沾有一定量各种抗生素的纸片贴在培养基表面（或用不锈钢圈，内放定量抗生素溶液），培养一定时间后观察结果。由于致病菌对各种抗生素的敏
4、感程度不同，在药物纸片周围便出现不同大小的抑制病菌生长而形成的“空圈”，称为抑菌圈。抑菌圈大小与致病菌对各种抗生素的敏感程度成正比关系。于是可以根据试验结果有针对性地选用抗生素。,YAO MIN SHI YAN DA ZHI FANG FA,第二节 药敏试验大致方法,8,试验原理,将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分，溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC值愈小
5、,一、纸片扩散法,9,判定标准,一、药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。 表一 药敏试验判定标准 具体对于不同的菌株，及不同的抗生素纸片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。二、药物敏感实验判定标准参考表1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，69毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。,10,试验原理,将药物混匀于琼脂培养基中，配制含不同浓度药物平板，使用多头接种器接种细菌，经孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含药物浓度测得MIC。MIC：稀释法所测得的某抗菌药物能抑制被检菌肉眼可见生长的最低浓度,二、稀释法,11,试验原理,E试条是一条 5mm50mm的无孔试
6、剂载体，一面固定有预先制备的，浓度呈连续指数增长稀释抗生素，另一面有读数和判别的刻度。将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育过夜，围绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交点的刻度浓度即为抗生素抑制细菌的最低浓度。,三、抗生素浓度梯度法-E 试 验,12,结果判断和报告 读取椭圆形抑菌 圈与E试验试条 的交界点值，即 为MIC值,13,三种方法的比较,纸片扩散法 稀释法 E-Test,优点缺点,操作简单，重复性好；成本较低；无需特殊设备；灵活选择抗菌药物；结果容易理解,标准化方法，结果可靠；检测菌的范围更广；定量检测；更好地反映菌株耐药程度,操作简单；定量检测,不适用于生长较慢或生长速
7、率不同的菌株以及某些苛养菌,操作费时费力,成本太高，常规试验很难应用；局限性，主要用于苛养菌或厌氧菌,14,对任何分离的可疑病原菌，若不能从该菌的种属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。,以下情况不必进行药敏试验：,正常定植菌与感染的关系不明确时；污染菌；已知细菌对某种抗生素天然耐药；已知细菌对某种抗生素全部敏感。,第二节 哪些细菌需要做药敏试验？,15,一般细菌培养,幽门螺旋杆菌,血培养,痰培养,其他,第三节 安康检验微生物检测,目前我中心开展的微生物检测主项目众多，比较常见的有血培养（需氧、厌氧）、幽门螺旋杆菌培养、骨髓培养、中段尿+菌落计数、大便常规培养、霍乱弧菌培养
8、、咽拭子、痰培养、脑脊液培养、穿刺液培养、胸腹水培养、浓汁及创伤、眼耳分泌物、前列腺液培养、念珠菌培养、一般细菌培养、肥达氏反应、外斐氏反应等数十种。,药敏,16,小结,药物敏感实验后，应选择高敏药物进行治疗，也可选用两种药物协助使用，以减少耐药菌株。在选择高敏药物时应考虑药物的吸收途径，因为我们药敏实验是药液直接和细菌接触，而在给患者用药的时候，必须通过机体的吸收才能使药物达到一定的效果，所以在给患者用药时，高敏药物一定要配合适宜的给药方法，这样才会达到好的治疗效果。,17,医院获得性感染,第 三 章,18,医院感染的定义,医院感染（Nosocomial Infection，Hospital
9、 Infection）的概念 指住院病人在医院内获得的感染，包括在住院期间发生的感染和在医院内获得出院后发生的感染；但不包括入院前已开始或入院时已存在的感染。医院工作人员在医院内获得的感染也属医院感染。（2001，MOH）,19,院感,医院感染（Nosocomial Infection，Hospital Infection）的概念 指住院病人在医院内获得的感染，包括在住院期间发生的感染和在医院内获得出院后发生的感染；但不包括入院前已开始或入院时已存在的感染。医院工作人员在医院内获得的感染也属医院感染。（2001，MOH）,第二章 医院获得性感染（医院内感染）,20,院感,医院感染日益成为一个严
10、峻的问题摆在广大医务工作者面前。目前我国每年大约有5000万住院病人,其中约有500万患者出现医院感染,每年造成的额外的医疗消费约100亿人民币。在美国医院感染的发生率在5%10%,每年造成的额外的医疗消费约为175350亿美元。除了经济上的损失以外,更严重的是给患者带来巨大的危害。,第二章 医院获得性感染（医院内感染）,21,新加坡最严重院内感染，“医院幽灵”无处不在,近日，新加坡中央医院遭遇建院史上最严重的院内感染，该院近期病人中22人患上丙型肝炎，其中4人因并发症和败血症死亡。这一事件引发国际医院界对于丙型肝炎院内感染的探讨。事件背后有个疑问，新加坡这样医疗体系较为完善的国家，为何会发生
11、如此严重的事故？如何避免院内感染这个“医院幽灵”？,22,近年我国发生的几起重大院内感染事件,一、西安交通大学一附属医院八例患儿死亡2008年9月3日起，西安交通大学医学院第一附属医院新生儿科9名新生儿相继出现发热、心率加快等临床症状，其中8名新生儿发生弥漫性血管内凝血相继死亡，1名新生儿经医院治疗好转。调查认为：该事件为医院感染所致。事后撤销该院院长和主管副院长的职务;免去医务部、护理部等有关职能部门负责人的职务;免去医院新生儿科主任、护士长的职务;交大一附院补偿每位死亡患儿家属18万元。二、安徽宿州“眼球事件”医院感染管理之痛 2005年12月11日，安徽省宿州市立医院眼科的医生和来自上海
12、的眼科主任医师徐某等人为10名患者白内障超声乳化手术，第二天护士发现10名患者的眼睛发生感染!其中9名患者应施行眼球摘除手术，另一名患者施行玻璃体切割手术。三、非典型性肺炎(SRAS) 2003年2月首次发现SARS于广东后波及香港等地，并迅速蔓延到世界27个国家和地区。截至2003年5月18日12时，全国内地共累计报告非典型肺炎病例4698例，其中医务人员917例，死亡224例。在SARS防控中17名医务人员以身殉职。SARS失控与医院感染密切相关，SARS的最后控制也是得力于良好的医院感染控制措施!时任卫生部部长免职、北京市长免职，各地政府和医院相关责任人受到不同程度的处分或处理。,23,医院获得性感染（医院内感染）,医院内感染：指病人在住院期间发生的感染依感染来源分：1）交叉感染：由医院内病人或医务人员直接或间接传播引起的感染；2）内源性幡然或自身感染：由病人自己体内正常菌群引起的感染；3）医源性感染：在治疗、诊断或预防过程中，因应用的医疗器械等消毒不严而导致的感染。,24,
