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1、骨髓检验,主要内容,骨髓细胞学检查细胞形态学细胞化学染色免疫表型分析染色体分析基因诊断,骨髓病理学检查组织结构免疫组织化学染色,骨髓检查流程,1.骨髓检查适应证,造血系统疾病某些血液病及其相关疾病某些寄生虫感染性疾病恶性肿瘤骨髓转移某些类脂质沉积病待查贫血原因待查发热原因待查淋巴结肿大原因待查肝脾肿大原因待查骨痛原因待查,唯一的禁忌证：严重的凝血因子缺陷,2.标本制备,取材部位：髂后、髂前上棘、胸骨、棘突、病灶部位采集、涂片染色：瑞氏（Wright）染色或瑞-姬（Giemsa）混合染色,骨髓穿刺和活检针,骨髓穿刺部位,Bone Marrow Aspirate,3.镜检,低倍镜制片质量增生程度（
2、5级）巨核细胞计数异常细胞筛查选择油镜检查区域,油镜有无造血岛细胞形态观察有核细胞分类计数计算粒红比值有无异常细胞及寄生虫,4.分析,要结合外周血象来分析对疑难细胞或不典型标本的处理借助其他方法：化学染色、免疫表型分析两个阶段间的细胞，计入下一阶段换部位重抽或定期复查形成骨髓象检查报告描写细胞形态与数量，作出肯定性诊断、支持性诊断、排除性诊断或形态学描写。注意事项骨髓片应制作良好，才能进行形态学观察,正常骨髓象,有核细胞增生活跃粒红比值为24：1，平均3：1各系细胞比例、形态、染色大致正常巨核细胞735个/1.5x3cm2，多为产板型可见少量单核细胞、浆细胞、骨髓基质细胞、组织嗜碱细胞、成骨细
3、胞、破骨细胞等核分裂细胞约为0.1%,骨髓有核细胞增生程度,各系细胞,粒系细胞：原粒、早幼粒、中性幼粒、中性杆状核、中性分叶核、嗜酸性、嗜碱性粒细胞红系细胞：原红、早幼红、中幼红、晚幼红淋巴细胞：成熟、原淋、幼淋巨核系细胞：原始、幼稚、颗粒型、产板型少量单核细胞、浆细胞、骨髓基质细胞（成纤维细胞、内皮细胞、脂肪细胞、巨噬细胞等）、组织嗜碱细胞、成骨细胞、破骨细胞,细胞化学染色（cytochemical stain),髓过氧化物酶（POX）染色酯酶（esterase）染色中性粒细胞碱性磷酸酶（ALP）染色糖原（PAS）染色铁染色,一些名词缩写介绍,AML：急性髓系白血病AML-md：微分化型（A
4、ML-M0）AML-wom：未成熟型（AML-M1）AML-wm：成熟型（AML-M2）AMML：急性粒-单核细胞白血病（AML-M4）AMoL：急性原单核细胞和单核细胞白血病（AML-M5）AEL：急性红白血病（AML-M6）AMegL：急性巨核细胞白血病（AML-M7）,一些名词缩写介绍,ALL：急性淋巴细胞白血病APL：急性早幼粒细胞白血病CML：慢性髓性白血病CLL：慢性淋巴细胞白血病AA：再生障碍性贫血PNH：阵发性睡眠性血红蛋白尿MDS：骨髓增生异常综合征IDA：缺铁性贫血RARS：难治性贫血伴环形铁粒幼细胞增多,POX染色,正常细胞染色反应（-+）存在于髓系细胞胞质中，愈成熟反应
5、愈强，原粒C（-）。原单C（-），幼单C和单核C（）。淋巴、巨核、幼红细胞（-）,临床意义AML-md（-）AML-wom（-）AML-wm（+）AMML（+）AMoL（-/）AMegL（-）ALL（-）,酯酶染色,三种酯酶特异性酯酶(SE)非特异性酯酶(NSE)单核细胞酯酶(ME),用于鉴别诊断AML亚型,酯酶染色（正常细胞反应）,酯酶染色（临床意义）,ALP染色,正常中性粒细胞染色反应（-+）10%40%（+）积分751,临床意义鉴别感染性疾病的类型（细菌感染时酶活性增强）鉴别CML和类白鉴别AA和PNH鉴别真性红细胞增多症和继发性红细胞增多症,PAS染色,正常细胞染色反应粒系细胞：中幼粒
6、以下阶段（+）；巨核系和PLT:（+）淋巴、单核:（ ）幼红C、RBC:（-）,临床意义ALL、淋巴瘤细胞白血病：（+，粗颗粒或块状）；AML-wom：（-）；AMML：（+,弥漫,细颗粒）CLL：（+，粗颗粒）幼红细胞克隆增生：（+，粗颗粒或块状）； 幼红细胞良性增生：（-）,铁染色,正常染色反应（-+）细胞外铁：+铁粒幼细胞：19%44%，无环形铁粒幼细胞,临床意义鉴别IDA与非IDA诊断铁粒幼细胞性贫血诊断MDS-RARS,几种常见AL的细胞化学染色结果,细胞免疫表型（immunophenotypes）分析,标本：血液、骨髓、淋巴结穿刺液、胸腹水、脑脊液、肺泡灌洗液临床意义急性白血病和淋
7、巴瘤的分型诊断与疗效、预后判断成熟淋巴细胞肿瘤的分类诊断淋巴细胞免疫表型分析判断免疫功能造血干细胞计数方法流式细胞仪：目前的首选方法免疫组织化学法：用于病理切片免疫荧光显微镜法：现已少用,Normal marrow showing CD45 versus side scatter, which identifies major cell populations as indicated,ALL与AML细胞免疫表型特点,骨髓病理学检查,反映骨髓组织结构及间质成分较全面地衡量造血细胞增生程度，以及造血组织、脂肪组织和纤维组织的容积比例；“干抽”时能反映造血情况及纤维组织增生程度，如骨髓纤维化、髓样
8、化生；协助某些血液病的诊断，如MDS、毛白、淋巴瘤累及骨髓；较早期预测疾病的预后，反映白血病治疗效果；观察重要的骨髓组织学变化，如铁储备、炎性肉芽肿、转移瘤、骨小梁变化、血管栓塞、骨髓坏死、淀粉样变。,Bone Marrow Biopsy,骨髓病理学检查,正常骨髓的组织形态学造血组织骨质间质,骨髓病理学检查,常见血液病的骨髓病理学诊断骨髓纤维化（MF）细胞期胶元形成期硬化期骨髓增生异常综合征（MDS）基质改变：网状纤维增生增生程度：少数增生低下三系造血细胞的定位紊乱与形态异常：ALIP现象巨核细胞多聚集于静脉窦窦壁外，形态表现为单个或多个圆核、淋巴样小巨核或微巨核细胞,Gomori染色（+）以
9、上,染色体分析,检测内容：包括染色体数目和结构分析标本：抗凝血、骨髓、淋巴结穿刺液、活检标本、胸腹水、羊水,染色体分析临床意义,恶性血液病的诊断与分型监测恶性血液病等缓解、预后及复发监测遗传性疾病与血液病发生Down syndrome与髓系白血病监测造血干细胞移植后的嵌合状态,A. t(9;22)(q34;q11.2), CML. B. t(8;21)(q22;q22), AML-M2. C. inv(16)(p13.1q22), AMMoL-M4Eo. D. t(15;17)(q22;q1221.1), APL. E. t(9;11)(p22;q23), AMoL-M5. F. del(5)(q13q33), t-AML.,基因诊断,检测内容：融合基因、突变基因、免疫球蛋白或T细胞受体基因重排标本：抗凝血、骨髓液、淋巴结穿刺液,临床意义,PML-RARA,BCR-ABL,AML1-ETO,CBFB-MYH11,JAK2 V617F,APL,CML,AML-wm,AMML,MPN,休息一下吧,
